【地方标准】 配合饲料中呋喃西林和呋喃唑酮的测定 液相色谱法

本标准（DB33/T616-2006）由浙江省海洋与渔业局提出并归口，主要起草单位为农业部渔业环境及水产品质检中心（舟山）。标准规定了配合饲料中呋喃西林和唑酮的液相色谱测定方法。 1 范围 本标准适用于配合饲料中呋喃西林和呋喃唑酮的测定，采用液相色谱法进行检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款： GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1 饲料采样方法 3 原理 样品中的呋喃西林和呋喃唑酮通过乙腈提取、正己烷脱脂、固相萃取柱净化后，采用反相色谱柱分离，紫外检测器检测，采用外标法进行定量分析。 4 试剂 本标准所用试剂在呋喃西林和呋喃唑酮的出峰处应无干扰峰。实验用水应符合GB/T6682中的一级水标准。 4.1 呋喃西林标准品：纯度>99%。 4.2 呋喃唑酮标准品：纯度>99%。 4.3 正己烷：分析纯。 4.4 乙腈：分析纯。 4.5 甲醇：色谱纯。 4.6 磷酸二氢钠：分析纯。 4.7 0.05mol/L磷酸二氢钠溶液。 4.8 0.01mol/L磷酸盐缓冲溶液（pH=2.5），分析纯。 4.9 乙二胺四乙酸（EDTA）溶液（50g/L），分析纯。 4.10 HLB固相萃取柱（150mg/3mL）。 4.11 标准储备液：100mg/L，准确称取一定量的标准品，用少量乙腈溶解后，用甲醇定容为100mg/L的储备液，避光冷藏保存，保存期为一个月。 4.12 标准中间液：2mg/L，用流动相稀释标准储备液。 5 仪器与设备 5.1 液相色谱仪：配紫外检测器。 5.2 样品粉碎机。 5.3 均质机。 5.4 离心机，4000rpm。 5.5 旋转蒸发器。 5.6 固相萃取装置。 5.7 超声仪。 5.8 旋涡混匀器。 5.9 氮吹仪。 5.10 天平，感量为0.01g和0.0001g。 6 色谱条件 6.1 色谱柱：ODSC-18，5μm，4.6mm×250mm，或同类型号色谱柱。 6.2 柱温：室温。 6.3 流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（pH=4.0，体积比20：80）。 6.4 流速：1.0mL/min。 6.5 进样量：20μL。 6.6 紫外检测波长：365nm。 7 分析步骤 7.1 试样制备 按GB/T14699.1采集实验室样品。将实验室样品（通常500g）粉碎，使其全部通过1mm筛，充分混匀，并贮于磨口瓶中备用。 7.2 提取 称取样品5g（准确至0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，加入乙腈20mL，摇匀，超声波辅助提取10min，均质（10000r/min）2min，4000r/min离心5min，过滤，用20mL乙腈重复提取，合并滤液于125mL分液漏斗。 7.3 净化 分液漏斗中加入25mL经乙腈饱和的正己烷，振摇5min，静置分层后，将乙腈层放入旋发瓶中，于40℃减压蒸馏浓缩至近干，加入5mL0.01mol/L磷酸盐缓冲液（4.7）溶解，待净化。固相萃取柱依次用10mL甲醇、10mL纯水、2mL5%EDTA溶液、10mL纯水预洗，上样，以10mL甲醇洗脱，氮气吹至近干，流动相准确定容至2mL，经0.45μm滤膜过滤，待HPLC分析。所有操作应在避光条件下进行。 7.4 工作曲线 取呋喃西林和呋喃唑酮标准中间液，用流动相稀释成浓度为0.1mg/L至2.0mg/L的标准工作液。分别取20μL进样，以峰高为纵坐标，以标准样品中呋喃西林和呋喃唑酮含量为横坐标，绘制工作曲线。 7.5 色谱测定 取试样滤液20μL进样，记录峰高，从工作曲线查得样品提取液中呋喃西林和呋喃唑酮的含量。如果样液浓度超过线性范围，需用流动相稀释样品溶液。样品中呋喃西林和呋喃唑酮的含量按下式计算： X = (C×V) / (xf×m) 式中： X 为试样中呋喃西林和呋喃唑酮的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； C 为试样溶液中呋喃西林和呋喃唑酮的含量，单位为毫克每升（mg/L）； m 为试样的质量，单位为克（g）。