【地方标准】 动物组织中赭曲霉毒素A的测定 高效液相色谱法和液相色谱串联质谱法

ICS65.020.30
DB50/T952—2019
动物组织中赭曲霉毒素A的测定高效液相色谱法和液相色谱串联质谱法

地方标准信息服务平台
2019-12-15发布
重庆市市场监督管理局
2020-03-15实施

前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由重庆市农业农村委员会提出并归口。本标准起草单位：重庆市动物疫病预防控制中心、重庆市兽药饲料检测所。
本标准主要起草人员：侯亚莉、周莉、李玉平、朱英才、盛欣、胡健、张毅、丁平、范首君、何义刚等。

1 范围
本标准规定了动物组织中赭曲霉毒素A的测定方法。本标准适用于动物肾脏、肝脏、肌肉组织中曲霉毒素A的测定。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文本的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用本文件。
GB/T 6628 分析实验室用水规格和试验方法

3 高效液相色谱法
3.1 方法原理
用提取液提取试样中的赭曲霉毒素A，经免疫亲和柱净化后，采用高效液相色谱结合荧光检测器测定赭曲霉毒素A的含量，外标法定量。

3.2 试剂和材料
3.2.1 水为符合GB/T 6682规定的一级水。
3.2.2 乙酸乙酯：分析纯。
3.2.3 磷酸：分析纯。
3.2.4 碳酸氢钠：分析纯。
3.2.5 乙酸铵：分析纯。
3.2.6 甲醇：色谱纯。
3.2.7 乙腈：色谱纯。
3.2.8 1mol/L磷酸溶液：称取磷酸115.3g，用水溶解并稀释至1000mL。
3.2.9 0.05mol/L碳酸氢钠溶液：称取碳酸氢钠21g，用水溶解并稀释至500mL。
3.2.10 赭曲霉毒素A标准品：纯度大于99%。
3.2.11 赭曲霉毒素A标准储备溶液：精确称取标准品100g（精确至0.0001g），置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇定容，得浓度为1mg/mL的标准储备液。8℃保质期3个月。
3.2.12 赭曲霉毒素A标准中间溶液：准确移取标准储备溶液1mL，置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，标准品浓度为0.1mg/mL。2℃/8℃保质期1周。
3.2.13 赭曲霉毒素A标准工作溶液：准确移取赭曲霉毒素A标准中间溶液适量用乙腈-水一水溶液（55+45，体积比）配制成浓度为0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL和10ng/mL的标准工作溶液。现用现配。
3.2.14 淋洗缓冲液：称取12.5g氯化钠、5g碳酸氢钠溶于水中，加入0.1mL吐温-20，用水稀释至1000mL。
3.2.15 洗脱液：甲醇-乙酸溶液（49+1），量取490mL和10mL的乙酸，混匀。
3.2.16 微孔滤膜：0.22μm，有机系。
3.2.17 赭曲霉毒素A免疫亲和柱：规格3mL，柱容量≥100ng，或等效柱。

3.3 仪器和设备
3.3.1 分析天平：感量0.1mg，0.01mg。
3.3.2 液相色谱仪：配荧光检测器。
3.3.3 组织捣碎机。
3.3.4 旋涡混匀器。
3.3.5 氮吹仪。
3.3.6 振荡器。
3.3.7 离心机：转速不低于5000r/min。
3.3.8 PH计：精度为0.01。

3.4 试样的制备与保存
取代表性样品约100g，用组织捣碎机捣碎，装入试样袋，密封并做好标识，于-20℃下保存。

3.5 提取与净化
3.5.1 样品的提取
准确称取待测样品2g（精确至0.001g），置于50mL离心试管中，加0.6mL磷酸溶液（3.2.8），涡旋混匀，放置15min后，加入5ml乙酸乙酯提取，涡动3分钟，4000rpm离心5分钟，将上清液转入另个50mL离心管中。重复提取3次，合并3次上清液。上清液加入5mL的碳酸氢钠溶液（3.2.9）涡动3分钟，4000rpm离心5分钟，收集碳酸氢钠溶液层，再提取2次，合并3次提取液，得到的提取液用磷酸溶液（3.2.8）调节其pH7.4~8.4，备用。
3.5.2 样品的净化
将免疫亲和柱置在温下预先平衡，加入提取液，调节流速不超过1.0mL/min，使其缓慢通过免疫亲和柱。待柱内液体流干后，前入1C.0mL淋洗缓冲液进行淋洗，弃去全部流出液。把柱内残余液体抽干，加入3.0mL洗脱液，收集洗脱液于玻璃刻度试管中，氮气50℃下吹干。准确加入1.0mL乙腈-水一水溶液（55+45，体积比）溶解，过滤膜后，采高效液相