【国家标准(GB)】 染色体畸变分析估计生物剂量

中华人民共和国国家标准
染色体畸变分析估计生物剂量
Chromosomal aberration anafysis fnr bialogical dnse asscssmcnt1生题内容与适用范围
GB/T 12715—91
本标准规定了受电离输射照射人员外周血淋巴细胞的细胞培养，染色体标本制备、染色体略变分析及察量估算分法。
本标准适用于受过量外照射人员的生物剂生估计。2术语
2.1过量照射
工作人员受到人于国家标准推荐的相应剂虽当且限疽的照射。在本标罹中指应急或事故情沉下,超过 100) mSv 的照射。
2.2持续照射
一般地指持续时间获长的照射，在本标准中，则指由于照射时间较长·声要对剂量效应加以修正的殿射。
2.3菜色体
遗专考因的载体，存在于卵胞内的线形缺构，由脱我核糖核酸(DNA)蛋户质机少堂接钾核酸（NA）等组成。在纠跑分睾的中期变粗，其形态最为清晰，便于识别。每个中期染色体都含有两条染他单体。
2.4染色体变
正常染色体在物理(如患离辑射)或化学等素作月下发生的结构和数量上的异带2.5生物剂最计
H以估计受照剂虽的生物体系,这一生物体系受到照射后的反应与受照剂量之间存在者某种定基关系,从而可用来算受照的剂盛，3细胞培养与染色体瞄变分析方法3.1材料
3.1.1试剂
综台培荠基（LagalMFM.TC.199.RPMI1640等）小牛或胎牛血消
肝素钠
5-滨脱氧尿嗪啶校节
332581lotchst
秋水仙素或基秋水酰胺
育游素（医川）
链毒亲（医月）
国家技术监督局1991-D1-2B批准1992 01 01实瓶
Giemsa染料
冰醒酸A.R
梭酸氢钠A.R
无离子水
菠璃器肌洗涤剂
3. 1. 2器
培养瓶(10~15 mL）
注射器（各种容冠
注射针头 (各种姚格)
试剂瓶（各种容量）
刻,变离心管10 t:L
吸管橡皮头
载玻片
精密T:H 试纸(6. c~8.4)
3.1.3设备
GR/T 12715—91
冰箱（最好也有一20℃的低温冰箱）恒温培差箱(提妇带控温）
高压毒
恒溢水浴
离心机《甩平式)
药物大平（感堂0.001g）
紫外綫灯或光灯（20W）
台秤（般大称量1003）
双筒生物显微镜（带晟微照相装台）（镜7X或10X，物镜10x和100x准镜）接种箱或显净工作台
3.2淋巴细胞培养
3. 2. 1 培养液配制
3.2.1.1按选用的培养基说明要求,用炎菌无离了水溶解至T作液的浓度。3. 2. 1. 2将血清加人至上述轿释的培养被中,占培养液总量的 12. 5泥~25%3.2.1.3按规定将1IA用消游的生理盐水溶解成工作放，入至上述培养践中，加入量接使用说明或每 100 ml.培养液加人相当于 25 mg美英豆的 HJA提取液。3. 2. 1. 4 入栏当于培养液总体积 0. 5% ~(1. 8的肝素T作液(530 ILI/mL)。3.2.1.5于上述培养液中加入抗生素被，其最终浓度为：青霉素10IUI/nL，链毒束J00g/L3. 2. 1. 6 用 5. 5%的 Na,HCO,溶液训节培养基的 m11,可在 7. n~7. 3 之间,以 7. 2 为宜。3.2.1.7谢上述培养液充分混匀后，即分装垒每个增养瓶中、每瓶加人配制好的培养波4~5mL培养瓶的容积，清范度和无菌也分再要，3.2. 2 接种和培养
3. 2-2. 1 用肝素溶液作抗凝剂,凝润灭伴注射器后,抽取静脉血 0. 7 mL,于每培养瓶下加入 0. 3 可l.,平行接种两瓶。
3.2.2.2对过量变照者，于照射后尽早取血，供不要超过30d.接种瓶数不少于3瓶，3.2.2.3为确保分析的细脂都为培差后第-次有丝分裂细胞,丁每瓶培养勒中圳人5汉脱氧尿嘧啶GB/T 12715—91
核告溶液，最终浓度为15tmml/ml.+然后放入恒温培养箱中避光培养。车培养11h之后，加入适当浓度的秋水仙素液，使最终浓度为1.75remo1/m1.此法为FPG染色法所必需。3.2.2.4可制此少骤代替3.2.2.3.即在人癌样后-不加人5腹脱氧尿喀嗪核并济液。将培养物移至37C的恒温培养箱中磨养 24 h 后,加入适当浓度的水仙相溶液,使其或疼浓度为 0. 5 ~0. 75 μmol/mL。秋水仙素稀释溶液也可任开始培养时加人。3.2.3注意事项
3.2.3.1狂保作时，必须严格注意在无菌系件下进行，3.2.3.2将培养物移入恒温培养箱后增养48~5h，注意避光非保持恒温箱内温度在37=0.5℃的范围内。
3. 3染色体标本制备
3.3.1抵渗
3. 3. 1. 1 用吸管将培养物轻轻吹散:[匀+移至 10 mL 刻度高心管中t离心(800 ~ 1 600 r/min,6-10in），夫掉率，留下1~1.5m培养物。3. 3. 1. 2 加入项治至 37'C的 4. 075 mlol 的 KC1 溶被 6~8 mL,打匀后进行低渗。3.3.1.3将离心答放入37℃的恒温水浴锅中停留21lmn，在18min时加人0.5～1mL固定被到各管中进行预周定，巅即经轻吹散打匀后离心，去掉上清液。3.3.7团定
3.3.2.1加入新鲜配制的固定被(3·1的甲醇与冰乙酸4~6 tl.-注意强慢加人，轻轻打散细胞团块，直至20 min后之离心，去上消液。3.3.2.2再加人固定液2~4ml..静10min(中间用吸管经轻收打1~2次)后，再离心大上滑液，再加入0.2mL新能配制的固定液
3.3.3谢片
3.3.3.1用作制片的或玻片，必须严销按规定小心处理干净，用双蒸水浸泄，冰箱中保存(最好不超过—)。
3.3.3.2将余下0.2mL左有的培养物，轻轻充分打勾,吸0.1mL滴加在预冷的载型片上3.3.3.3接着出片的一方向另一方轻轻状气，即从片子底部用吸水纸将水吸干将片么酒精灯火焰上惊过1~2次，每晾片架上，待其自下。3.3.3.4重复制片步骤，使离心管内培养物间片两张。3.4染色
3.4.1FG染色法
3.4. 1-1滴 10液Haechar 染液(0. 5 μg/ml. pH6. 8的碰稳缓冲液)于标本片上,并盖上盖玻片,将片效在紫外灯或黑光灯下照0.5h，
3.4.1.2小心够走盖肢片，用pH6.8的磷酸缓冲液仔细滑洗。3. 4. 1. 3敏到 60r 的 2×sSC 裤液 20~35 min,接着用蒸耀水冲洗3.4.1.4用Giemss张液染色，Giemsa原液量为pH6.8的酸酸缓冲液容积的5%~10%.染3uin以3.4.1.5归凝冲液提泡短时间，蒸馅水洗，气于后封片。3. 4. 2 避常的 Giernss 染色
3.4.2.11价(ieus源液与2份PH为7.01~7.2的微酸缓冲液混句。3. 4.2.2将片的正面朝下料放衣干净的玻璃板上，将染液沿片边加入,15~30min后用H来水冲洗。3. 4. 2. 3 再用蒸调水殊,骨晾比架上嗪于,即可观查。3.5显微镜下分析
3.5.1进行镜下分析的工作人从，必须受过较严格训练+并具有辐射细胞遗传学的基本知识。CB/T 12715—91
3.5.2为尽基减少观察分析染色体质变对判断标准的差异，成事至对工件人员进行训练，与括分析同弥木片的新定区域内的畸变类及质变数，并受他人纯果卫对比，以达到市」3%的差异获国为官。3.5-3切本片上标等前规格、内容和拖贴位臣应就范化，3.5.4分折片了时,应将片子标案始终改作裁台的同--方向：右片时应从片的端片始,按横向或纵间顺序移动，选择可供分析的中期分辑继胞逆行分所计数。3.5.5先在低倍镜载出染免体长度适1,分做较好和极少重叠作中期细驱，再转泌镜逃行分切和记录.45或16士1条案色体的中期细孢，3.5.6一化春到略要时，应经恒人循认，并记录该畸变在显微镜上位受的举标。4估计剂量
4.1电离辑射外账射的情况下，用染色体畸变分析作剂显件计的范患在2.1~.5（iy间。4.2各个实验空应建立各自的剂量效应标准曲线，注意郡用1:述相同的细跑培养和染色体分析然。4.3应按本标准所述要求，建立剂量效应标准曲线，要同时选用2~3必不吸端的健康成年人血详进行离体照对,将其血禁照前,照射期间及照后(1. 5.~2 h)在程中,都应保在 37C的患度中,然后将受照射应血波滴加到装有培养疫的瓶中进行培养。4.4为伙曲线的数学拟合有较优的适度和有正大可用性，从0.1~5Gy问,最好要消10个以上的不可剂母进行照射以建立标准曲线，4.5双低传能缓密度(LET)的电岛辑射，以效着丝粒晴变戴以无青丝粒喷变对指标，其剂量效应关系，以拟合次多为宾。
Y=++Y=+B
式 y-
为某类染色体畸变的发生李,%；照射剂底，Gy：
。…带数，出为该类断变本底值：9-为剂平方项系数；
为剂查线项系数。
刘高LET辐射，剂量效应关系大多数为直线模式：Y-e+al)
式（2)中符号同式（1)。
这样，可从梳查到的畸变却估计出生物剂量值。.....
4.6估计剂量时，要注意事放过量照射的时缓种类,剂量分布均沟度、是一次全身均匀或局衍照射还是迁延照射取拌时尚及培养条件
1.7在估计剂望时，还应对受照者的情说石较详纠调查，以除么儿他因素对深色体畸受率的影响，如受照存在过量照射前半下有无接受医疗照射，感染性埃病；近年实曾否接触有害物质（某些药物、病靠及有关化学鼎等);术人及源族有尤遗传灶疾病史等。4.8用案色体的变分析法在估算全受次性均匀分布的贯穿性（X、7射线和中了照射)的过基外照较准确，对」不均句照射，本法其能给出相当于一次全身均勾照射的等效剂基，对持续性外照身下的剂量传，要引入一些因于,其准确性稍差，4.9为提高剂量估计的可信程度，应分析是帮的细胞数以缩小可信区间.分析纠胞数的多少，次决丁受照剂量的高低(表1)。
数据的记录，处理和保存
(:3/7 1271591
分列细胞数估剂坤慎信计约还可信限询可
5.1数据记录的日的是为「对每半例、相应片号及凉始清况有详红记或，便于日后查找和整注，5.？每~实验军应有T作目走、各白切格统：的标证，片号及原始记录氧、整泽统计记录织等，5.3原始记录纸对每个细胞有记求落外,还,定他恬标本、受控者列名制择H期,姚察后期,现察者，所历显微镜专及各种萨变小计栏等，5.1记录畸变的文宇机探记,应极还际染色体命名法将写,并应记下每略变在显微镜上的坐际.5.5刘每例所受别量的牛物剂望估计方法、原始记改、估计剂些结等资料,需要编些长期保存以备证
A1射线急性全身照射剂望估算步骤GB/T 12715---91
附录A
剂量估计中的实例
（补在）
41.1设在射线账射离而后，建议的剂量效应模式为：3. 9$ × 10-+ -- 8.16 × 10 'D*-(AI1bZxz.net
：的单位为rHd,的单位为畸变数/纸驱A1.2事故受照老在受照F61至32d之间被取而7次，每次分析390个中期细验，各次双若丝粒略变数分别为72、75、62、68.419,67 和 65,它门之间波动不大,取其牛内值。A1.3观紧「31C0个中期细胆，#478个双著丝粒染忙，代入式（A1)(Y478/2109).求得=1.y+即均身吸收剂量为1.4Gy
41.4丧较A1所述步骤:算出95%置信区间的上下限数值A2 射线与中子对全身的急性混合照射的剂蛋估算步骤42. 1 设中子对乐线的吸收剂量比位为 2 1 3.中于 0.7 MeV 内签变,Y线为LY射线,汁数1C0个中期纽胆任120个双著丝，即每个细胞有1.2个双若浓粒。其剂基效应幽线分别为：3. 7 MeV 巾了 = 0. 0005 + 8, 32 × 10-'n丫射线
式和的单位同式(A1)
Y = 0. 0G05 + 1. 64 × 10-ID ± +, 92 × 15~61342.2用为是限合的了封线和中子照射,故进行剂虽钻计时按下述步骤进行。表 A1对 射线和中子混射后进行剂虽估算的步骤些聚 A%. 5 和 A2. 7
中子，(iy
虑聚 A2. 4
射绒剂
步强A2.5
丫乐越照后，
及丝拉/细
A2. 3每细胞1.2个双者丝粒相当于1. 4Gy的中子照射A2.4 1. 44 Gy73/2 2. 16 Gy 7射线A2. 52. 15 [isY射线相当平综细胞为(1. 265个孜若丝粒略变。42.61.2—9.266—0.034起山寸了诱发的双者丝粒产额(A2）
了乐经照片，
双普丝粒/细胞
GB/T 12715-91
A2.7保细胞(i.43个双若丝粒当于1.12G的中子剂基（又回到步骤A2.3)A2.8接若文按步深2.1出线剂量为1.686，如此反复公多次，即可导到近以估计道，中剂1.21Gy射线剂1.89G
A2. 9再A1斯注步骤许击05%置信文间的[:限和下限效值。r用以F筒法求得：对+-fY,\r! a.
射线, =+,), +,
款中：
中了照时透发染负本和畸变章：有线模式中的一次頭案数;
中了圾收剂量G
射线诱发染色体喷变率！
真线项系数t
平力项系数+
..射线吸收削盘,Gy
女1已年
中子与了射线的吸收剂举比值，财
D. -- R I.
Y.-- =++(Ra -r), + x -...
解2次求出 D.而 L,=R·n.故可求出 Da。A3持续照射
A3. 1 在低 LET 射持续照射时-剂量T:方须的系数下降A3.2些,剂坚半方项应引一小依赖于时问的围子,即G函数，放公式可为：F - + PG(X)D:
武中：、均与正文我()同。
而 G(X) =
tx -1 - exp(- X)
X—/T
1为照时持续时间，T为染色体断裂的平均存在寸间（.~2小）A
（A7）
++......+( A8?
43.3设一人受照于工业赠相的射减8h，观察了1000个中期组剂+有100个双落丝粒畸变接公式计算，档当于受1.26（照时5I入 G(X),+/1-8/2=2
让算得 G(X)-1. 577
代人式(A8)后,计算得剂量为1.02(y43.4采后(所数进行计算剂杀件为，照射时剂放率比较相定，受照的剂其人于二次项系数与次项系数的比值即为值/。
A4剂量起计中的不确定性的计算方法用下例衣示。
GB/T 17715-91
某人受射线照射店，被分析了500个中期细胞，规察到25个效差丝对贴变，别训用个组跑为5.核下送步操让算，
A4.1按数学模式(Y5×10-1+1.64×:0-+4.02>16-),求得量6.65GyA4.2由于标准由毁不确定性，变产率的标准误为0.(0022S双者统粒/纤范A4.3了计数的质产标能误为系/505.切当十每组制0.01个双君丝粒（实除度月时，也可1算均）
A4.4总标准误=[(5.00215)—(0.013*)→10.010244.5散规察到的畸变产率的95%可倍需为0.05±：.96(0.0102).即每组脑为6.03和0.07个双存丝粒，此两值代人剂量效应曲编，分别弹得为7.e3和1.(3（V的吸收剂量。附录1
染色体畸变的分类
（参孝作）
染色体畸变是辐射作用的敏感杰标之一。因书，准确认识略变炎率，对牛物剂量估翁的准性·有十分事受的关系、
B1 染色体型畸变
国B各利类型的柒色本型畸变模式图B1.1 非稳完性畸变
B1. \,1末端缺失和中间缺失
B1.1.1.1末端缺尖是-对无差丝粒断片，来源于模贯染色体译的·个断额，不伴随个H类的研变(图31.L)。a为正常染么休。
B1.1.1.2中可缺失：染色休F有--对较心的契色小点，演出染色体肾的两个极端充近的断裂而图1.)。
R1.1.1.3元着丝粒环，上述两个断然在司上问距较大，这对断片的两个晰学与相事接，则形成无考丝粒环（图B1.d)
B1. 1.2非对称性的染色休间换
B1.1.2.1双著丝粒染色体;辐射左两个染位体1门时诱发未端缺失,对个染包体的断端点相接合,而两对断片断也出现接合,树而形感一个双者丝检巢色体和一对断片(图H1.1)。1.1.2.2“三若丝粒或更态者丝粒的染色体：三者丝较柒供体的出现伴随有两断止，冲伴楚内开数应为形成的多若丝粒染包位的若丝冠数减1.B1.1.3非对称性的染色体内点换若丝粒弥色体：在一个染包本的两齿部止现恢性世教，带卷丝粒染色沐的两个断端核此弯过来相接盒成环状，前未端两对断的断游接合成对斯片（潮B1.）。H1.2稳定性喷变
GB/r12715--91
B1.2、1刘称性的染色径间万换（析下易位）在印乙两个染色体音上向时发生断婴.甲染色体的断片与乙架色体断端要台，艺染色体的断片与甲染色体断端接合而皮两个染色体。在用常规染色的标本上,难于发现,除非发生易位后的染色体与正常羧型的染色体十分不同，才能观察到（图B1.g）.B1.2.2称的典色休内换
文称倒位,换发生在间一个染色体内,即染色体的长肾和短背1都出现一次横贯性断裂,接者是染色体倒位150°,其断端再与两未端断片重接而成。这种脂变能否分辨出束，取决于着丝粒的位置改变尼f明显(图B1.1)。
图E2元道效粒断片（长舒头和缺失（短箭头）图B3双着丝粒和伴随断片
B2染色单体型畸变
B2.1末端缺尖和中间缺头
GB/T 12715 -- 91
就失发生也-一条染包单体上，因而不是对称的，而是单！的碎开或单件附近要距单件较远。B2.2非染色所祖伤
比种损伤也称为裂蒙,是在架色体的-条或两单体上出现的不著色或策色-常的小区段，其觉度小于染色单体的直径。
B2.3单休等位缺失
断位发生在两条染负单体的闻一位些上。B2.4非对称性互换
此种互换在荣种程度上与染色位型的双者然粒时变形感有世类假，斑裂发出在两个染色体的单生E B6).
三若丝粒利双者终粒
染色体及“对伴髓的断片（箭头指处图 H5中问缺失或称微小体
（箭头处）
图E6爽色苹体的非刘称性换
B2.5对称性换
此科了换在某种程度上与染色体的相互易你畸变的形成有些相似，两个单-断片发生工交换（图H7)。
附加说明：
GB/7 12715
图 B7染应单体的对轻性;换
本标准在出围瘤工业总公司出
本标准由中国辑射防范研突竞负资起营。本标主要逐早人邓患诚
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。