【地方标准】 饲料中赭曲霉毒素A的测定 高效液相色谱法

DB51/T1081-2010 饲料中赭曲霉毒素A的测定 高效液相色谱法 前言 本标准由四川省畜牧食品局提出并归口，由四川省质量技术监督局批准，四川省饲料工作总站负责起草，主要起草人包括柏凡、赵立军、李云、高庆军、甄阳光、张静。 1 范围 本标准规定了饲料中赭曲霉毒素A含量的测定方法，采用高效液相色谱法(HPLC)。适用于配合饲料、浓缩饲料及饲料原料的检测。本标准中赭曲霉毒素A的检出限为30μg/kg。 2 规范性引用文件 - GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 - GB/T14699.1 饲料采样 - GB/T20195 动物饲料试样的制备 3 原理 试样经甲醇-水提取，离心、过滤后，取滤液通过免疫亲和柱净化并浓缩，然后用高效液相色谱仪配备荧光检测器检测，采用外标法计算赭曲霉毒素A的含量。 4 试剂和溶液 除特殊说明外，所有试剂均为分析纯，色谱用水符合GB/T6682一级用水规定。 4.1 甲醇：分析纯、色谱纯 4.2 氯化钠 4.3 氯化钾 4.4 磷酸钠 4.5 磷酸氢二钠 4.6 磷酸二氢钾 4.7 提取液：甲醇与水按80:20体积比混合 4.8 吐温-20 4.9 磷酸盐缓冲液(PBS)：称取8.0g氯化钠、1.44g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾，溶于1000mL水，调pH至7.0 4.10 清洗缓冲液：0.1mL吐温-20溶于1L PBS中 4.11 猪曲霉毒素A标准品：含量>98% 4.11.1 标准贮备液：精密称取10mg标准品，用乙睛溶解定容至100mL，浓度为100μg/mL，2~8℃保存，有效期6个月 4.11.2 标准工作溶液：分别稀释制成0.001~5.0μg/mL各浓度，2~8℃保存，有效期1个月 4.11.3 猪曲霉毒素免疫亲和柱 注意事项：凡接触赭曲霉毒素A的容器，需浸入4%次氯酸钠溶液半天后清洗备用；分析人员操作时须佩戴医用乳胶手套，并在通风橱内操作。 5 仪器与设备 5.1 分析天平：感量0.1mg 5.2 超声波清洗器 5.3 离心机：转速≥5000r/min 5.4 超纯水处理器 5.5 涡旋混合器 5.6 高效液相色谱仪：配备荧光检测器 5.7 氮吹仪 5.8 0.45μm滤膜 6 试样制备 按GB/T14699.1采样后，按GB/T20195选取代表性实验室样品1kg，四分法缩减至约200g，粉碎过1mm孔筛，混匀装入磨口瓶备用。 7 分析步骤 7.1 试样溶液制备 7.1.1 提取：称取20g试样于锥形瓶中，加入2g氯化钠、50mL提取液，超声提取20min，离心，取上清液过滤，准确量取5mL滤液加入20mL PBS稀释，混匀待净化 7.1.2 净化：将免疫亲和柱底帽去除，连接注射器，将稀释液5mL过柱(流速1-2滴/秒)，依次用5mL清洗缓冲液、5mL蒸馏水冲洗，抽干柱子，用2mL甲醇洗脱，收集洗脱液于50℃水浴中氮气吹干，加入1000μL流动相，涡旋30s，0.45μm滤膜过滤后上机测定 7.2 色谱条件 7.2.1 色谱柱：C18柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒度5μm，或同等性能柱 7.2.2 柱温：30℃ 7.2.3 流动相：甲醇+水（具体比例依实验方案）