【国家标准(GB)】 方正银鲫

GB/T 16874-1997
我国东北和西北地区是银鲫的原产地之一。该鱼依其栖息环境不同，而表现为不同的生态类型。尤以黑龙江省方正县双凤水库的银鲫为突出，具有生长快、抗病力强、遗传基础稳定等特点，故称该鱼为“方正银鲫”，现已在我国全面推广养殖。为保存方正银鲫的优良经济性状，防止混杂和退化，特制定该方正银鲫种质标准。
本标准的附录A至附录D均为标准的附录。本标准从1998年1月1日起实施。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会归口。本标准起草单位：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所。本标准主要起草人：刘明华、沈俊宝、范兆廷。61
1范围
中华人民共和国国家标准
Fangzheng crucian carp
GB/T16874-1997
本标准规定了方正银鲫（Carassius auratus gibelio Bloch）原种主要生物学性状、生化指标、遗传学特性，以及检测方法。适用于方正银鲫良种鉴定。2名称与分类
2.1学名
银鲫(Carassius auratus gibelio Bloch)。2.2分类位置
属鲤形目（Cypriniformes），鲤科（Cyprinidae），鲤亚科（Cyprininae），鲫属（Carassius），鲫种（Caras-sius auratus)。
3主要生物学性状
3.1外部特征
3.1.1形态性状
体型短，体侧扁而高，头小，吻钝，口端位，下唇厚，唇后沟仅限于口角。无须。眼小，位于头侧上方。背鳍具有硬刺，外缘平直，后缘锯齿粗，排列稀。胸鳍不达腹鳍。尾鳍分叉浅，上下叶末端尖。鱼体背部、背鳍和臀鳍为黑灰色，体侧深银白色，体侧每个鳞片的边缘颜色稍深，见图1。图1方正银鲫外形
国家技术监督局1997-06-16批准62
1998-01-01实施
3.1.2可数性状
GB/T 16874—1997
3.1.2.1背鳍硬棘皿（V），分枝鳍条数16~19，多数为17。3.1.2.2左侧第一鳃弓鳃粑数44～54，多数为49。32，侧线鳞29～32，多数为30～31。3.1.2.3鳞式：29
3.1.3可量性状
不同体长组个体，可量性状变动值见表1。表1
全长，mm
体长，mm
体长/体高
体长/头长
体长/尾柄长
体长/尾柄高
头长/吻长
头长/眼径
头长/眼间距
3.2内部特征
42.0-~81,0
33.0~~66.0
分两室，后室长为前室1.5倍左右。3.2.2.肋骨
肋骨有13对。
3.2.3下咽齿
下咽齿一行。齿式为4/4。
3.2.4脊椎骨bZxz.net
93.1～118. 0
72.0~89. 5
190.0~215.0
161.0~183. 0
206.4~263.2
164.0~199. 9
脊椎骨总数为颅后椎骨、腹椎骨、尾椎骨数之和，脊椎骨总数、颅后椎骨、腹椎骨、尾椎骨数分别为30~31、4、12~13、14块。
3.2.5腹膜
腹膜为灰黑色或黑色。
3.2.6肝脏
肝脏肥大、柔软、褐红色，几乎覆盖整个肠脏，其重量占体重的6.5%～7.4%。3.2.7红血球
红血球核的长径平均为7.07um,短径平均为3.84 μm,核的体积平均为45.8μm。3.3生长与繁殖
3.3.1生长
不同年龄组的鱼体长和体重的理论值见表2。63
年龄\，龄
体长，mm
体重，g
41～73
1）年龄，主要依据鳞片上的年轮数。3.3.2繁殖
GB/T 16874—1997
108～141
43~147
3.3.2.1成熟年龄：雄、雄鱼均为1~~2龄3.3.2.2雌、雄鱼比为9：1，行天然雌核发育。3.3.2.3性腺·年成熟次，分批产卵。3.32.4繁殖水溢：13-25℃
3.3.2.5怀卵量：不同年龄个休怀哪最则表3。表3
年龄·龄
体重·g
绝对坏卵量，粒
相对怀卵量,粒/g
4生化指标
16. 0~ 58. 0
3362~14531
101～151
185～231
190~245
50~167
12 752~39 858
121~165
233327
276~850
255~336
1601056
161~410
38600~81127
137~185
肝酯酶同工酶(EST)有四种谱型，受 a、b、c3个等位基因控制,其中BC型频率达 0.902;另在EST-2位点上，a、b、c3个等位基因同时存在于个个体，即ABC异质型，表现出3倍性，见表4、图2。表4
样本数
观察值
期待值
DDABAC|AD
三倍性
AB ACBCABC ABD BCD BB
基因频
<0.0010.0330.4840.475
BC ABC ABD BCD
CCABAC
图2方正银鲫肝酯酶(EST)电泳图谱5遗传学特性
5.1体细胞染色体2倍数
2n=156～162。
5.2核型
GB/T 16874--1997
雌、雄鱼核型完全-致。有中部着丝粒染色体（m组）21对.亚中部着丝粒染色体（sm组）37对，亚端部及端部着丝粒染色体(st组及t组）20对，染色体臂数(NF)272.见图3。2.r e xx xs xx Yx xe xe xe
X斯 Is 数L HR SREE LE iSBR Ka +e美 斯 品L 品氏
人民 病 美 显感 高果 美 a 美是 人 病美人 食人 #o幼#Aoun Aa 民a l乐beAABKAe#i
an美食A Aa
5.3脱氧核糖核酸(DNA)含量
图3方正银鲫的染色体组型
体长121~320mm，体重65～1125g健康鱼红血球每个细胞的DNA含量为7.69pg（与鸡血对照）。
6检测方法
6.1生化遗传分析
6.1.1肝脏电泳样品液制备
电泳前，将肝脏从液氮罐中取出，在室温下解冻，然后放研钵中加入5倍体积的0.2mol磷酸缓冲液及少量细砂，在冰浴中匀浆，制得的匀浆液用15000r/min离心机离心20min，用上面的澄清液电泳。
6.1.2电泳条件及染色方法
采用7.5%浓度的聚丙烯酰胺凝胶。电极缓冲液和凝胶制备见附录A（标准的附录）。电泳在冰箱：中进行，电流为1.25mA，电泳约2h。电泳后取下胶带先置于已配好的萘酯-丙酮液，在37℃温育20min，再加入坚牢蓝液经数分钟染色，可出现红棕色的区带。萘酯-丙酮液与坚牢蓝液的配制见附录B（标准的附录)。
6.1.3结果判定
GB/T16874—1997
根据肝酯酶酶谱区带Ⅱ谱带数和迁移距离分出表现型类型，按表现型类型分析得到X?值、基因频率和表型期待值，详见表4、图2。6.2染色体检测
6.2.1标本制备
采用肾组织细胞加植物血凝聚素（PHA），在25℃条件下培养2～4h，经吹风或者自然干燥制片，吉姆萨(Giemsa）染色。Giemsa染色液的配制见附录C(标准的附录）。6.2.2计数
‘在光镜下，选取染色体铺散良好，完整的中期分裂相计算染色体数目，确定2n数。6.2.3形态分类
选择10个以上的分裂相，进行显微拍照，按放大照片对染色体组型分析。染色体的形态类别，按以下要求划分：即臂比1.0~～1.7为中部着丝粒染色体（m组）；1.71~3.0为亚中部着丝粒染色体（sm组）;3.1~～7.0为亚端部着丝粒染色体(st组);7.1~的为端部着丝粒染色体(t组）。m组和sm组染色体臂数为2;st组和t组染色体臂数为1。6.3脱氧核糖核酸(DNA)含量测定6.3.1血涂片制片
从尾动脉采血0.5mL，生理盐水(0.7%NaCI)稀释制成血涂片；同时采小公鸡血，用同法制片作对照。
6.3.2固定
血涂片空气干燥后，用卡诺氏液（甲醇：冰乙酸为3：1)固定1h，然后将血涂片移出存放于4℃冰箱中或者直接染色。
6.3.3染色
血涂片经3.5molHCl水解30min(28℃）,蒸馏水冲洗，放入希夫（Schiff)试剂C其配制方法见附录D（标准的附录)】，于28℃暗处染色1h，立即用二氧化硫水洗3～5次，每次2～10min，再经梯度酒精70%、80%、90%、95%、100%脱水，二甲苯透明后用胶封片。6.3.4DNA含量测定
用显微分光光度计测量，波长560nm，物镜40×，目镜10×，扫描步距0.5～1um。66
A1电极缓冲液的制备
GB/T16874-1997
附录A
(标准的附录）
电极缓冲液和凝胶的制备
三羟甲基氨基甲烷（Tris）6g，甘氨酸28.8g，加少量蒸馏水溶解后，再加蒸馏水至1000mL，用盐酸(HCI)调整pH为8.3,使用时稀释10倍。A2凝胶的制备
A液：Tris36.3g加四甲基乙二胺（TEMED)0.23mL溶解，加1molHCl约48mL，再加入蒸馏水至100ml，用盐酸调整pH为8.9。B液：Tris3g，加TEMED0.23mL，再加1molHCl约24mL，再加蒸馏水至100mL，用HCl调整pH 为 6.7。
C液：丙烯酰胺（ACR)20g，甲叉双丙烯酰胺(BIS)1g，加蒸馏水至100mL溶解。D液：核黄素（VB2)0.004g，溶于100mL双蒸馏水。E液：过硫酸铵（AP)0.28g，加蒸馏水至50mL溶解。F液：蔗糖40g，加蒸馏水至100mL溶解。分离胶比例A液：C液：蒸馏水：E液=1：2：41。浓缩胶比例B液·C液：F液：D液=1：1·1：1。附录B
（标准的附录）
染色液配制
B1萘酯-丙酮液
乙酸-酯0.2g，加30mL丙酮溶解。B2坚牢蓝液
0.2g坚牢蓝染料加200mLpH6.4磷酸缓冲液，并使之完全溶解。附录C
（标准的附录）
吉姆萨(Giemsa)染色液配制
C1Giemsa染色母液配制
称量0.5gGiemsa粉，量取甘油33mL，在研钵中先用少量甘油与 Giemsa粉混合，研磨至无颗粒时再将剩余甘油加入，在56℃条件下保温2h后，加入33mL甲醇，保存于棕色瓶内。67
C2pH7.2磷酸缓冲液配制
GB/T 16874-1997
0.2mol 磷酸氢二钠(Na,HPO)溶液72.0 mL加上0.2mol磷酸二氢钠(NaH,PO4)溶液28.0 mL即成。
C3Giemsa工作染色液配制
取100mIpH7.2磷酸缓冲液，加入3mLGiemsa染色母液即成。附录D
（标准的附录）
希夫(Schiff)试剂的配制
将0.5g碱性品红溶于100mL热蒸馏水中，使之充分溶解，待溶液冷却至50℃时过滤，再冷却到25C时加入1mol盐酸(HCI)10ml和1g亚硫酸氢钠(NaHSO，)或1.5g偏重亚硫酸钠(NazS,Os），放置暗处，静置24h后，加0.25～0.5g活性炭摇荡1min，过滤，溶液呈无色，装入棕色瓶中塞紧瓶塞，保存在冰箱内（0～4'C），用前预先取出，使之恢复至室温后再用。如溶液呈粉红色就不能用，须重配。68
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