【水产标准】 罗非鱼链球菌病诊断规程

ICS 65.020.30

B 41

SC/T 7235—2020

罗非鱼链球菌病诊断规程

Code of diagnosis for tilapia streptococcosis

2020-08-26 发布2021-01-01 实施

前 言

本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由农业农村部渔业渔政管理局提出。

本标准由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC 156)归口。

本标准起草单位:中国水产科学研究院珠江水产研究所。

本标准主要起草人:张德锋、石存斌、刘鹏威、任燕、王庆、曾伟伟、潘厚军、常藕琴。

罗非鱼链球菌病诊断规程

1 范围

本标准给出了罗非鱼链球菌病诊断所需试剂和材料、器材和设备、临床症状，规定了采样、细菌分离与纯化培养、生理生化鉴定、PCR 检测与综合判定等方法。

本标准适用于罗非鱼链球菌病的流行病学调查、诊断和监测。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB 4789.9 食品安全国家标准 食品微生物学检验 空肠弯曲菌检验

GB 4789.28 食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求

SC/T 7014—2006 水生动物检疫实验技术规范

SC/T 7201.1—2006 鱼类细菌病检疫技术规程 第1部分：通用技术

3 缩略语

下列缩略语适用于本文件。

16S rRNA：16S核糖体 RNA (16S ribosomal RNA)

BHI：脑心浸液肉汤培养基 (brain heart infusion)

bp：碱基对 (base pair)

CTAB：十六烷基三甲基溴化铵 (cetyltrimethylammonium ammonium bromide)

DNA：脱氧核糖核酸 (deoxyribonucleic acid)

dNTPs：脱氧核苷三磷酸 (deoxy ribonucleoside triphosphate)

EDTA：乙二胺四乙酸 (ethylenediaminetetraacetic acid)

H₂O₂：过氧化氢 (hydrogen peroxide)

PCR：聚合酶链式反应 (polymerase chain reaction)

SDS：十二烷基硫酸钠 (sodium dodecyl sulfate)

Taq 酶：水生栖热菌 DNA聚合酶 (Thermus aquaticus DNA polymerase)

Tris：三羟甲基氨基甲烷 (tris hydroxymethyl aminomethane)

V. P：伏-普反应(Voges-Proskauer test)，又名乙酰甲基甲醇试验

4 试剂和材料

4.1 除非另有说明，标准中使用的水为蒸馏水、去离子水或与其相当纯度的水。

4.2 16S rRNA 基因序列扩增引物 27F: 5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3', 1492R: 5'-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3'，−20°C保存。

4.3 dNTPs(各 10 mmol/L)，含 dATP、dTTP、dGTP、dCTP 各 10 mmol/L 的混合物，−20°C保存。

4.4 10×PCR 缓冲液，无 Mg^{2+} 离子，−20°C保存。

4.5 Taq DNA 聚合酶(5 U/μL)，−20°C保存。

4.6 细菌生化鉴定管或生化鉴定卡，商品化试剂。

4.7 脑心浸液肉汤琼脂培养基见附录 A 中的 A.1。

4.8 血琼脂平板见 A.2。