【卫生标准】 乙型肝炎表面抗原酶免疫检验方法

中华人民共和国卫生行业标准

WS/T 223—2002

乙型肝炎表面抗原酶免疫
检验方法

Guidelines for enzyme immuno-assay of hepatitis B surface antigen

2002-04-20 发布 2002-07-01 实施

中华人民共和国卫生部 发 布

前 言

乙型病毒性肝炎（简称乙肝）是由乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus, HBV）引起的传染性疾病，在我国人群中感染率较高，是严重危害人民身体健康的常见传染病之一。对乙肝的诊断主要以实验室检测乙肝表面抗原（Hepatitis B surface antigen, HBsAg）为主，检测方法主要有酶免疫法、反向间接血凝法、放免法、化学发光法、免疫荧光法等。目前应用较广、较普及的是酶免疫法。

本标准所使用的缩略语为HBV、HBsAg。

本标准从2002年7月1日起实施。

本标准由卫生部医政司提出。

本标准由北京大学医学部人民医院肝病研究所负责起草。

本标准主要起草人：陶其敏、全文斌。

本标准由卫生部委托卫生部临床检验中心负责解释。

中华人民共和国卫生行业标准

乙型肝炎表面抗原酶免疫
检验方法

WS/T 223—2002

Guidelines for enzyme immuno-assay of
hepatitis B surface antigen

1 范围

本标准规定了血清HBsAg酶免疫检验方法(两步法)中相关的技术要求。

本标准适用于各基础、临床实验室和流行病学研究中血清HBsAg测定。

2 方法选择

2.1 常用方法

HBsAg的酶免疫检验方法根据反应模式可分为“一步法”和“两步法”两种方法。“一步法”是将待测样品和酶标记抗体同时加入到反应孔中进行反应，从而达到快速的目的；“两步法”则是先将样品加入到反应孔中，待反应结束后再加入酶标记抗体，从而使待测样品的“捕获反应”和酶标记抗体的“酶联反应”分开进行，因而反应更加稳定、重复性也更好。

2.2 推荐方法

由于“一步法”存在产生“前带现象”的可能，故在本标准中不列为推荐方法；本标准推荐使用酶免疫“两步法”。

2.3 方法原理

本标准推荐使用酶免疫“两步法”检测HBsAg：将抗-HBs的单克隆抗体（简称单抗）或多克隆抗体（简称多抗）包被于聚苯乙烯微孔板等固相载体上，加入待测血清，如其中含有HBsAg，则可与固相上的包被抗体结合；洗板去除不参加反应的无关蛋白成分后，加入酶(如辣根过氧化物酶)标记的第二株抗体使之与血清中HBsAg反应，在固相载体上形成包被抗体-血清中HBsAg-酶标记抗体的复合物（即双抗体夹心）；再加入底物后，酶催化底物，产生显色反应，根据显色反应颜色的深浅可判定血清样品中HBsAg的有无及相对含量。

3 试剂和材料

国内目前已有成套的试剂盒供应。

显色反应底物液可选用邻苯二胺(o-phenylenediamine, OPD)-过氧化氢(H₂O₂)溶液(简称OPD)或3,3',5,5'-四甲基联苯胺(3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine, TMB)-H₂O₂溶液(简称TMB)。使用OPD时，可选用 2 mol/L的硫酸(H₂SO₄)作为终止液，比色时选用 492 nm 作为测定波长；使用 TMB 时，可用 2 mol/L的盐酸或 2 mol/L的硫酸溶液作为终止液，比色时选用 450 nm 作为测定波长。

注：国内市场目前亦有HBsAg检测的快速酶免疫试剂盒供应，该试剂盒系加有标本加速剂和酶标记抗体加速剂，可达到快速反应的目的，具体操作方法详见各生产厂家的试剂盒说明书。

中华人民共和国卫生部2002-04-20批准 2002-07-01实施