【其他行业标准】 日本血吸虫抗体检测 间接红细胞凝集试验

WS/T 628—2018 日本血吸虫抗体检测 间接红细胞凝集试验 Detection of antibody against Schistosoma japonicum - Indirect haemagglutination test ICS 11.020 C61 Ws 中华人民共和国卫生行业标准 发布：2018-09-26 实施：2019-04-01 发布单位：中华人民共和国国家卫生健康委员会 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家卫生标准委员会寄生虫病标准专业委员会提出。 本标准起草单位：安徽省血吸虫病防治研究所、中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、浙江省医学科学院寄生虫病研究所、江苏省血吸虫病防治研究所、江西省寄生虫病防治研究所。 本标准主要起草人：张世清、汪天平、许静、闻礼永、章乐生、郑彬、熊彦红、梁幼生、林丹丹。 1 范围 本标准规定了检测日本血吸虫抗体的间接红细胞凝集试验方法。 本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对人体血清中日本血吸虫抗体的检测。 2 术语和定义 2.1 血吸虫病 由血吸虫寄生于人和其他哺乳动物所引起的疾病，在我国特指日本血吸虫病。 2.2 间接红细胞凝集试验 将抗原包被于红细胞表面形成致敏载体，与相应抗体结合后通过抗体桥联产生肉眼可见凝集反应，用于检测样本中特异性抗体。常用红细胞为健康人“O”型红细胞。 2.3 可溶性虫卵抗原 血吸虫虫卵经匀浆、超声破碎等处理后离心所得上清液，含蛋白质、糖蛋白及多糖等成分的复合物。 3 仪器设备 3.1 台式低速离心机 最高转速≥2500 r/min，或最大相对离心力≥800 g。 3.2 平板微量振荡器 最高振动频率2800 r/min，最大振幅6 mm。 3.3 电热恒温水浴箱 控温范围室温+5℃～99.9℃，温度分辨率0.1℃，波动度±0.5℃。 3.4 微量移液器 量程10 μL～100 μL（增量1 μL），100 μL～1000 μL（增量5 μL）。 4 试剂材料 4.1 冻干致敏红细胞 主要成分为日本血吸虫可溶性虫卵抗原、健康人“O”型红细胞及蔗糖，制备方法见附录A。 4.2 阳性对照血清 感染日本血吸虫的兔混合血清，见附录A。 4.3 阴性对照血清 正常兔混合血清，见附录A。 4.4 稀释液 pH 7.2磷酸盐缓冲液（PBS），见附录A。 4.5 血凝反应板 建议使用“V”型微孔有机玻璃血凝板，操作见附录B。 5 检测步骤 5.1 样本准备 采集末梢血100 μL或静脉血2 mL，室温静置至血块收缩后，以800 g离心5 min，分离血清备用。 5.2 样本检测 将待测样本编号1～n号依次排列。 阴性及阳性对照血清各加100 μL稀释液溶解混匀备用。 取血凝反应板进行分孔加样与倍比稀释操作，血清稀释度依次为1:5、1:5、1:10、1:20。 加入致敏红细胞悬液25 μL后振荡1～2 min，封板并置37℃水浴30 min，在白色背景下观察结果。 6 结果判定 阴性对照不应出现凝集，阳性对照应出现凝集，否则试验无效。 以“+”及以上反应强度对应的最高稀释度作为效价，效价≥1:10判定为阳性。 附录A（资料性附录）主要试剂材料制备方法 A.1 冻干致敏红细胞制备 A.1.1 可溶性虫卵抗原制备：取冻干虫卵，加入0.01%硫柳汞生理盐水制备悬液，经组织匀浆研磨后反复冻融3次，在10000 g条件下离心30 min。