【GB国家标准】 纺织品抗真菌性能的测定第⒉部分:平皿计数法

GB/T 39104.2—2020 纺织品 抗真菌性能的测定 第2部分：平皿计数法 Textiles--Determination of antifungal activity of textile products-Part 2: Plate count method (ISO 13629-2:2014, MOD) 前言 GB/T 39104《纺织品抗真菌性能的测定》分为两个部分：第1部分：荧光法；第2部分：平皿计数法。本部分为 GB/T 39104 的第2部分。本部分按照 GB/T 1.1 的规则起草。 本部分采用重新起草法修改采用 ISO 13629-2:2014《纺织品抗真菌性能的测定 第2部分：平皿计数法》。本部分与 ISO 13629-2:2014 的主要技术性差异如下： 一 在规范性引用文件方面，本部分做了具有技术性差异的调整，以适应我国的技术条件，其调整集中反映在第2章“规范性引用文件”中； 一 删除了 ISO 105-F02 和 ISO 7218，增加了 GB/T 20944.2—2007； 一 补充了 3.1 注2中洗涤方法，删除了注1的内容； 一 将“冷冻柜：一个可调节至－70℃以下，另一个可调节至－20℃以下”调整为“冷冻柜：可调节至－80℃以下”； 一 将 8 标题修改为“含阴离子表面活性剂的无菌水”，并补充了含阴离子表面活性剂无菌水的配制方法； 一 将 10.5.3 中“在 10.5.2 中加入 5mL 表面活性剂”修改为“在 10.5.2 中加入 5mL 含阴离子表面活性剂的无菌水”； 一 将孢子悬液浓度单位由“1/ml”修订为“CFU/ml”；补充了孢子悬液的冷冻温度条件（见 10.7.1）； 一 将 11.1.2.1 和 11.1.3.1 中“必要时，可按 ISO 6330 或其他适当方法洗涤试样”修改为“必要时按 GB/T 20944.2—2007 的 10.1 方法洗涤试样”； 一 补充“抗真菌效果评价”（见 12.3）； 一 试验报告中增加“真菌菌株描述：菌株保藏号和菌株保藏机构”，其后列项编号顺延（见第 13 章），增加了对应真菌菌株的国内保藏机构（见附录 A）。 本部分由中国纺织工业联合会提出。本部分由全国纺织品标准化技术委员会 (SAC/TC209) 归口。 引言 GB/T 39104 的本部分采用平皿计数法作为抗真菌性能的定量分析方法。平皿计数法的特点如下： - 属于实验室容易操作的常规方法； - 无需使用特殊设备（如荧光光度计）； - 历史悠久且程序通用。 1 范围 GB/T 39104.2 的本部分规定了采用平皿计数法对纺织品抗真菌性能进行定量测定的方法。本部分适用于各类纺织品，如纤维、纱线、织物、服饰、床上用品、家居装饰用纺织品等。 2 规范性引用文件 下列文件对本文件的应用是必不可少的： GB/T 20944.2—2007 纺织品抗菌性能的评价 第2部分：吸收法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件： 3.1 control fabric 对照样：用验证试验真菌生长条件的织物。注：对照样可采用与试样材质相同但未经过抗真菌整理的纺织品。如果无法获得上述样品，可不含荧光增白剂及未经整理的 100% 棉织物作为对照样。使用前按 GB/T 8629 规定在 60℃、不添加任何洗涤剂或增白剂的条件下循环洗涤 19 次，每个循环洗涤 10 min，漂洗 2 次，共 40 min。 3.2 antifungal agent 抗真菌剂：抑制或缓和真菌生长或减少真菌数量的助剂。 3.3 antifungal treatment 抗真菌整理：抑制或缓和真菌生长或减少真菌数量的处理。 3.4 spore suspension 孢子悬液：在含阴离子表面活性剂的无菌水中均勻分散有真菌孢子的液体。 3.5 plate count method 平皿计数法：通过十倍稀释法计数菌落数来计算培养后存在的真菌数量的方法。注：菌落数用菌落形成单位 (CFU) 表示。 3.6 neutralizer 中和剂：用于灭活、中和或抑制抗真菌剂抗真菌性能的化学试剂。 4 原理 将试样和对照样分别用试验真菌孢子悬液接种，并在 30℃ 条件下培养 48h 后，计数琼脂板上可视菌落的数量（用菌落形成单位 CFU 表示），以计算真菌的增长和抑菌效果。对于吸水性试样，宜使用吸收法；对于不吸水的试样，建议使用转移法。 5 安全措施 本方法需要使用真菌，操作应由经过微生物学技术培训和具有经验的人员进行试验，应遵循国家有关的法律、条例以及与适当的安全预防措施相关的推荐性规范。 6 试验真菌 试验用真菌菌株应从附录 A 的表 A1 中选择。经有关方同意后，可使用加入国际菌种保藏联合会 (IFRC) 的其他菌种保藏机构提供的有效真菌菌株代替。真菌菌株保存编号和来源应在报告中说明。 7 仪器设备 实验室常规器及下列仪器，相关器具在使用前应进行灭菌： 7.1 纱布：经灭菌处理。 7.2 培养皿：玻璃或塑料材质，内径约 60mm 或 90mm。 7.3 高压灭菌锅：温度能保持在 (121±1)℃（压力大于 103kPa）。 7.4 铂接种环：环直径为 2mm~4mm（或等效的塑料装置）。 7.5 L 型铂接种钩（或等效的塑料装置）。 7.6 培养箱：温度能保持在 25℃~37℃，允差为 2℃。 7.7 螺口玻璃瓶：容量为 30mL，带有聚四氟乙烯或硅橡胶垫片和聚乙烯盖。应用中性或碱性洗涤剂小心洗涤、冲洗并干燥。 7.8 玻璃漏斗。 7.9 移液管：容量为 0.2mL、1mL、5mL 和 10mL，允差不超过 0.5%，具有玻璃或塑料吸头。 7.10 巴斯德吸管：用于微生物试验（或等效的塑料装置）。 7.11 锥形瓶：容量为 100mL~500mL。 7.12 盖子：由可消毒的材质制成。 7.13 离心机：离心加速度约为 2000×g。 7.14 离心管：用于离心分离。 7.15 血球计数板：能计数 1×10⁴ CFU/mL~3×10⁷ CFU/mL。 7.16 显微镜：放大倍数为 200 倍。 7.17 超声波清洗机：试验用紧凑型，频率约为 30kHz~50kHz。 7.18 pH 计：生化试验用，具有玻璃电极或用等效的 pH 试纸代替。 7.19 烧杯：容量为 100mL。 7.20 裁样器：不锈钢材质，直径为 (3.8±0.1)cm。 7.21 不锈钢柱：直径为 (3.5±0.1)cm，质量为 (200±10)g。 7.22 振荡器：具有旋涡振荡功能。 7.23 浆式搅拌器（角型）：速度为 6 拍/s~8 拍/s，具有相应的一次性容器。 7.24 湿度箱：热带气候箱或可保持较高湿度的其他容器。 7.25 冰箱：温度能保持在 2℃~8℃，允差为 ±2℃。 7.26 冷冻柜：可调节至 －80℃ 以下，允差为 ±2℃。 7.27 天平：称量能确保可读至 0.01g。 7.28 一次性均质袋：适用于收纳食物、洗脱样品时使用。 7.29 二级生物安全柜或其他等效设备。 7.30 水浴锅：一个温度可保持 (46±2)℃，另一个温度可保持 70℃~90℃。 8 试剂和培养基 8.1 通用 试验所用试剂应是分析纯的和/或是适用于微生物试验用的。宜使用现有商业化的脱水产品制备培养基，并严格按照相关产品制造商的使用说明进行操作。 8.2 纯水 用于制备微生物培养基和试剂的分析级纯水，用蒸馏、离子交换、超滤和/或反渗透装置过滤的方法制取，应无毒或无抑菌物质。 8.3 含阴离子表面活性剂的无菌水 将 50mg 阴离子表面活性剂琥珀辛酯磺酸钠溶解到纯水 (8.2) 中，定容至 1000mL，使用高压灭菌锅在 121℃ 条件下灭菌 20min，形成 50mg/L 的含阴离子表面活性剂的无菌水。 8.4 培养基 使用以下步骤制备各的培养基。经验证后可用商业培养基代替。对于制备后不立即使用的培养基，应在 5℃-10℃ 环境中储存，保质期 1 个月。 8.4.1 沙氏葡萄糖肉汤 (SDB) 成分：蛋白胨 10g、葡萄糖 20g、纯水 1000mL（最终定容至），灭菌后 pH 为 5.6±0.2。 8.4.2 马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA) 成分：马铃薯浸粉 20g、葡萄糖 20g、琼脂 15g、纯水 1000mL（最终定容至），灭菌后 pH 为 5.6±0.2。