【国家标准】 食品安全国家标准 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定

中华人民共和国国家标准
GB5009.8—2023
食品安全国家标准
食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定
2023-09-06发布
中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
2024-03-06实施
GB5009.8-—2023
本标准代替GB5009.8一2016《食品安全国家标准食品中果糖、葡萄糖、燕糖、麦芽糖、乳糖的测定》和GB5413.5-2010《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中乳糖、煎糖的测定》。本标准与GB5009.8—2016相比，主要变化如下：修改了第一法高效液相色谱法的适用范围：增加了离子色谱法为第二法；
修改了酸水解-莱因-埃农氏法为第三法；一增加了莱因-埃农氏法为第四法1范围
食品安全国家标准
食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定
本标准规定了食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定方法。GB5009.8—2023
第一法高效液相色谱法，适用于粮食及粮食制品、乳及乳制品、果蔬及果蔬制品、甜味料、糖果、饮料和婴幼儿食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定第二法离子色谱法，适用于食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定。第三法酸水解-莱因-埃农氏法，适用于食品中蔗糖的测定。第四法莱因-埃农氏法，适用于婴幼儿食品和乳品中乳糖的测定。第一法高效液相色谱法
2原理
试样中的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖经提取后，高效液相色谱柱分离，示差折光检测器或蒸发光散射检测器检测，外标法定量。试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂
3.1.1乙睛（CH,N)：色谱纯。
3.1.2乙酸锌[Zn(CH.COO)，·2H,O]。3.1.3
亚铁氰化钾［K,Fe(CN)。·3H.O]。冰乙酸（CH，COOH)。
试剂配制
乙酸锌溶液（1mol/L）：称取乙酸锌21.9g，加3mL冰乙酸，溶于水并稀释至100mL，混勾。亚铁氰化钾溶液（0.25mol/L）：称取亚铁氰化钾10.6g，溶于水并稀释至100mL，混勾。3.3
标准品
3.3.1果糖（CHz2O6，CAS号：57-48-7)：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.3.2
葡萄糖（CHO，CAS号：50-99-7）：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
3.3.3蔗糖（C2H22O，CAS号：57-50-1）：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
GB5009.8—2023
3.3.4麦芽糖（CzHz2Ou，CAS号：69-79-4)：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
3.3.5乳糖（CH22O1.CAS号：63-42-3）：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
3.4标准溶液配制
3.4.1混合标准储备液（20.0mg/mL）：分别称取经过90℃土2℃干燥2h的果糖和96℃土2℃干燥2h的葡萄糖、熊糖、麦芽糖和乳糖各1g（精确至0.001g）用水溶解后转移至50mL容量瓶中，加人2.5mL乙腈，用水定容至刻度。置于0℃～4℃密封，保存期3个月。3.4.2混合标准工作液：吸取0.100mL、1.00mL2.00mL、3.00mL和5.00mL混合标准储备液(20.0mg/mL）于10.0mL容量瓶中，用水定容至刻度，配得果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的质量浓度为0.200mg/mL、2.00mg/ml、4.00mg/mL6.00mg/mL和10.0mg/mL的混合标准工作液，可根据实际样品溶液的浓度适当调整混合标准工作液浓度。临用现配。5材料
3.5.10.45um水性滤膜针头过滤器（纤维素滤膜除外）。3.5.2注射器。
仪器和设备
高效液相色谱仪：配示差折光检测器或蒸发光散射检测器。分析天平：感量为1mg和10mg。
旋涡混合器
离心机：转速≥4.000r/min。
超声波清洗器。
样品粉碎设备：高速粉碎机。
恒温干燥箱。
恒温水浴装置。
5分析步骤
5.1样品前处理
5.1.1试样制备
取适量有代表性的样品，饮料等液态均匀样品直接摇匀：非均匀的样品需匀浆或粉碎均匀：冷冻饮品室温融化后充分搅拌均匀，必要时可采用30℃40℃水浴加热搅拌；巧克力采用50℃60℃水浴加热熔融，并趋热充分搅拌均匀。5.1.2试样提取
5.1.2.1胶基糖果和巧克力等难溶解试样称取试样2g（精确至0.001g）于100mL比色管中，加入约50ml.50℃～60℃热水，涡旋或搅拌，待样品充分溶解，再缓慢加人5mL乙酸锌溶液和5mL亚铁氰化钟钾溶液，涡旋混勺，超声30min，转移至100mL容量瓶中并用水定容至刻度，混匀，静置。2
含气体和酒精试样
GB5009.8—2023
称取混勾后的试样50g（精确至0.01g）于蒸发Ⅲ中，在水浴上微热搅拌去除气体和酒精，待冷却后移至100mL容量瓶中，缓慢加人5mL乙酸锌溶液和5mL亚铁氰化钾溶液，用水定容至刻度，混匀，静置。
糖浆和蜂蜜类试样
称取混勾后的试样1g～2g（精确至0.001g）于100mL比色管中，加入约50mL水，涡旋混至充分溶解，转移至100mL容量瓶中并用水定容至刻度，混匀，静置。5.1.2.4其他试样
称取粉碎或混勾后的试样1g~10g（精确至0.001g）（目标糖含量≤5%时称取10g：含量5%~10%时称取5g：含量10%~40%时称取2g：含量≥40%时称取1g）至100mL比色管中，加人约50mL水，再缓慢加人5mL乙酸锌溶液和5mL亚铁氰化钾溶液，涡旋混勾，超声30min，转移至100mL容量瓶中并用水定容至刻度，混匀，静置。5.1.3净化
上述试样提取液用滤纸过滤（弃去初滤液）或离心获取上清液后，用0.45um水性滤膜针头过滤器过滤至样品瓶，供高效液相色谱仪分析。5.2仪器参考条件
仪器参考条件如下：
色谱柱：氨基色谱柱（4.6mm×250mm，粒径5um，氨基硅烷键合硅胶为填充剂），或性能相当者；
流动相：乙+水=70+30（体积比）；b）
流速：1.0mL/min；
柱温：40℃；
进样量：10μL；
示差折光检测器条件：温度40℃：g）
蒸发光散射检测器条件：飘移管温度80℃90℃；氨气流速2.5L/min。5.3
标准曲线的制作
将混合标准工作液按浓度从低到高依次注人高效液相色谱仪，测定果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖相应的峰面积或峰高。示差折光检测器以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积或峰高为纵坐标绘制标准曲线：蒸发光散射检测器以标准工作液浓度的幂函数为横坐标，以峰面积或峰高的幂函数为纵坐标绘制标准曲线。果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖标准溶液的高效液相色谱图参见附录A5.4试样溶液的测定
将试样溶液注人高效液相色谱仪中，根据保留时间定性，记录目标物的峰面积或峰高，根据标准曲线得到试样溶液中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的浓度。5.5空白试验
除不加试样外，均按上述步骤进行。3
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分析结果的表述
试样中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的含量按公式(1)计算。X=(-p:)xvx
mx1000
式中：
试样中果糖、葡萄糖、熏糖、麦芽糖和乳糖的含量，单位为克每百克（g/100g）；...（1)
根据标准曲线得到的试样溶液中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的质量浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；
根据标准曲线得到的空白中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的质量浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；
定容体积，单位为毫升（mL）：稀释倍数；
试样的称样量，单位为克（g)；换算系数；
换算系数。
糖的含量≥10g/100g时，计算结果保留3位有效数字：糖的含量<10g/100g时，计算结果保留2位有效数字。
精密度
在重复条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。其他
当称样量为10g、定容体积为100mL时，果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的方法检出限均为0.2g/100g，定量限均为0.5g/100g。第二法
9原理
离子色谱法
试样中的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖经提取净化后，离子色谱柱分离，脉冲安培检测器检测，外标法定量。
试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。10.1试剂
氢氧化钠（NaOH）：色谱纯
10.1.2冰乙酸（CH.COOH)。
10.2试剂配制
GB5009.8—2023
氢氧化钠溶液（200mmol/L）：称取8.00g氢氧化钠，溶于水并稀释至1000mL，混匀。10.2.1
10.2.2乙酸溶液（3%，体积分数）：量取3mL冰乙酸，用水稀释至100mL，混匀。10.3标准品
10.3.1果
果糖（CH2O：CAS号：57-48-7）：纯度≥99%，或经国家认证并授于标准物质证书的标准物质。
物质。
葡萄糖（CHO，CAS号：50-99-7）：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准蔗糖（C2H22O，CAS号：57-50-1)：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准10.3.3万
物质。
麦芽糖（ClH22Ol，CAS号：69-79-4）：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
乳糖（C12H2O，CAS号：63-42-3）：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
10.4标准溶液的制备
混合标准储备液（10.0mg/mL）：分别称取经过90℃土2℃干燥2h的果糖和96℃土2℃干燥10.4.1
2h的葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖各1g（精确至0.001g），加水溶解后转移至100mL容量瓶中，加入2mL乙酸溶液，并用水定容至刻度。置于0℃～4℃密封，保存期3个月。10.4.2混合标准中间液（100mg/L）：吸取1.00mL果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖混合标准储备液（10.0mg/mL）于100mL容量瓶中，用水定容至刻度。置于0℃~4℃密封，保存期1个月。10.4.3混合标准工作液：分别吸取0.250mL、0.500mL、1.00mL、2.00ml和2.50mL混合标准中间液（100mg/L)于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，配得果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的质量浓度为2.50mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L和25.0mg/L的混合标准工作液，可根据实际样品溶液的浓度适当调整混合标准工作液浓度。临用现配。10.5材料
10.5.10.45um水性滤膜针头过滤器（纤维素滤膜除外）。10.5.2净化柱：Cs固相萃取小柱（1.0mL）或性能相当者。10.5.3注射器。
仪器和设备
离子色谱仪：配脉冲安培检测器样品粉碎设备：高速粉碎机。
超声波清洗器。
分析天平：感量为1mg。www.bzxz.net
旋涡混合器。
离心机：转速≥4000r/min。
恒温干燥箱。
GB5009.8—2023
恒温水浴装置。
12试验步骤
12.1样品前处理
12.1.1试样制备
取适量有代表性的样品，饮料等液态均匀样品直接摇匀：非均匀的样品需匀浆或粉碎均匀：冷冻饮品室温融化后充分搅拌均匀，必要时可采用30℃~40℃水浴加热搅拌：酱类等可以采用研磨或者均质混匀；巧克力采用50℃～60℃水浴中加热熔融，并趁热充分搅拌均匀。12.1.2试样提取
12.1.2.1胶基糖果和巧克力等难溶解试样准确称取试样2g（精确至0.001g）于100mL比色管中，加入约50mL50℃～60℃热水，涡旋或搅拌，待样品充分溶解，加入2mL乙酸溶液，涡旋混匀，超声30min，转移至100mL容量瓶中并用水定容至刻度，混匀.静置20min。12.1.2.2糖浆和蜂蜜类试样
称取混匀后的试样2g（精确至0.001g）于100mL比色管中，加人约50mL水，涡旋混匀至充分溶解，转移至100ml.容量瓶中并用水定容至刻度，混匀，静置20min。12.1.2.3含气体和酒精试样
准确称取试样10g（精确至0.001g）于蒸发Ⅲ中，在水浴上微热搅拌去除气体和酒精，待冷却后用水移至100mL容量瓶中，加人2mL乙酸溶液，用水定容至刻度，混匀，静置20min。12.1.2.4其他试样
称取固体试样2g（精确至0.001g），半固态或液态试样5g～10g（精确至0.001g）于100mL比色管中，加人约50mL水，涡旋混匀，再加人2mL乙酸溶液混匀后，超声30min，转移至100mL容量瓶中并用水定容至刻度，混匀.静置20min。12.1.3试样净化
试样提取溶液可根据试样中目标糖含量稀释适当的倍数，婴幼儿配方乳粉中的乳糖检测时，稀释1000倍后净化；蜂蜜和糖果中高含量糖检测时，稀释500倍后净化。上述试样提取溶液或稀释溶液采用滤纸过滤或离心获取上清液后，依次过0.45um水性滤膜针头过滤器和C18固相萃取小柱（1.0mL），弃去前3mL收集后续的洗脱液待测C固相萃取小柱（1.0mL）使用前依次用10mL甲醇、15mL水通过，静置活化30min。12.2仪器参考条件
仪器参考条件如下：
色谱柱：阴离子交换柱（4mm×250mm，粒径10μm，以季铵盐为功能基，聚苯乙烯/二乙烯基a)
苯聚合物树脂作为填料）（带保护柱4mm×50mm），或性能相当者；b）
流速：1.0mL/min；
c）进样量：10μL；
脉冲安培检测器：Au工作电极；糖检测波形参考条件见表1；GB5009.8—2023
淋洗液：淋洗液A：水：淋洗液B：氢氧化钠溶液（200mmol/L）：洗脱参考条件见表2。表1
标准工作曲线绘制
糖检测波形
梯度洗脱条件
淋洗液A
淋洗液B
将混合标准工作液按浓度从低到高依次注人离子色谱仪，测定果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖相应的峰面积，以标准工作液中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，分别绘制标准曲线。果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖标准溶液的离子色谱图参见附录B。12.4
试样溶液的测定
将试样溶液注人离子色谱仪中，根据保留时间定性记录峰面积，根据标准曲线得到试样溶液中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的浓度。12.5
空白试验
除不加试样外，均按上述步骤进行。13
分析结果的表述
试样中果糖、葡萄糖、燕糖、麦芽糖和乳糖的含量按公式(2)计算。(p-pa)xVx
mX1000×10
GB5009.8—2023
式中：
试样中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的含量，单位为克每百克（g/100g）；由标准曲线计算得到的试样溶液中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
由标准曲线计算得到的空白中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
定容的体积，单位为毫升（mL)；稀释倍数；
试样的称样量，单位为克（g)；换算系数；
换算系数。
糖的含量≥10g/100g时，计算结果保留3位有效数字：糖的含量<10g/100g时，计算结果保留2位有效数字。
精密度
在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。5其他
当称样量为2g、定容体积为100mL时，果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的方法检出限均为0.015g/100g.定量限均为0.050g/100g。酸水解-莱因-埃农氏法
第三法
16原理
试样除去蛋白质后，其中蔗糖经盐酸水解转化为还原糖，按还原糖测定，水解前后的差值乘以相应的系数即为薰糖含量。棉子糖、水苏糖、低聚半乳糖、果聚糖、聚葡萄糖和抗性糊精等会对薰糖的测定产生干扰。
7试剂和溶液
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。17.1试剂
乙酸锌[Zn(CH.COO)：2H,O]
亚铁氰化钾[K,Fe(CN)。·3H,O]。盐酸（HCI)。
氢氧化钠(NaOH)。
甲基红（CHNO）：指示剂。
亚甲基蓝(CHi.CIN.S·3H,O)：指示剂。17.1.7
7硫酸铜（CuSO，·5H.O)。
酒石酸钾钠（CH.OKNa·4HO)。
17.1.9冰乙酸（CHCOOH）。
乙醇（CHOH)：95%。
试剂配制
GB5009.8—2023
乙酸锌溶液（1mol/L）：称乙酸锌21.9g，加3mL冰乙酸，溶于水并稀释至100mL，混匀。17.2.2
业铁氰化钟溶液（0.25mol/L）：称取亚铁氰化钾10.6g，溶于水并稀释至100mL，混匀盐酸溶液（50%，体积分数）：量取盐酸50mL，缓慢加人50mL水中，冷却后混匀。17.2.3
17.2.4氢氧化钠溶液（40g/L）：称取氢氧化钠4.0g，加水溶解后，冷却，用水稀释至100mL，混匀。17.2.5
甲基红指示液（1g/L）：称取甲基红0.1g，用95%乙醇溶解并稀释至100mL，混匀。17.2.6
氢氧化钠溶液（200g/L）：称取氢氧化钠20.0g，加水溶解后，冷却.用水稀释至100mL，混勾。碱性酒石酸铜甲液：称取硫酸铜15.0g和亚甲基蓝0.05g，溶于水并稀释至1000mL混匀。17.2.7
碱性酒石酸铜乙液：称取酒石酸钾钠50.0g和氢氧化钠75.0g，溶于水中，再加人亚铁氰化钾17.2.8
4.0g，完全溶解后，用水稀释至1000mL，混勾，储存于橡胶塞玻璃瓶中。17.3标准品
葡萄糖（CH12O，CAS号：50-99-7）：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。17.4标准溶液配制
葡萄糖标准溶液（1.00mg/mL）：称取经过96℃土2℃烘箱中干燥2h的葡萄糖1g（精确至0.001g），加水溶解后转移至1000mL的容量瓶中，加人5mL盐酸，并用水定容至刻度。置于0℃~4℃密封保存。18
仪器和设备
分析天平：感量为1mg和10mg。
恒温水浴装置。
可调温电炉。
酸式滴定管：25mL。
样品粉碎设备：高速粉碎机、
恒温干燥箱。
分析步骤
19.1样品前处理
试样制备
取适量有代表性的样品饮料等液态均匀样品直接摇匀：非均的样品需匀浆或粉碎均匀：冷冻饮品室温融化后充分搅拌均匀，必要时可采用30℃~40℃水浴加热搅拌：酱类等可以采用研磨或者均质混匀：巧克力采用50℃60℃水浴中加热熔融：并趁热充分搅拌均匀。9
GB5009.8—2023
19.1.2试样处理
19.1.2.1胶基糖果和巧克力等难溶解试样称取试样2.5g~5g（精确至0.001g）于100mL烧杯中，加人约50mL50℃60℃热水搅拌溶解，再缓慢加人5mL乙酸锌溶液和5mL亚铁氰化钟溶液，混匀，放冷，转移至250mL容量瓶中并用水定容至刻度混匀·静置30min，用滤纸过滤，弃去初滤液，取后续滤液备用。19.1.2.2含淀粉试样
称取粉碎或混匀后的试样10g～20g（精确至0.001g），置于烧杯中，加入约200mL水，在45℃水浴中加热1h，并振摇，冷却后转移至250mL容量瓶中并定容，混匀，静置，沉淀。吸取200mL上清液于另一250mL容量瓶中，缓慢加入5mL乙酸锌溶液和5mL亚铁氰化钾溶液，用水定容至刻度，混匀，静置30min，用滤纸过滤，弃去初滤液，取后续滤液备用。19.1.2.3含气体和酒精试样
称取混匀后的试样100g（精确至0.01g），置于蒸发皿中，用氢氧化钠溶液（40g/L)中和至中性，在水浴上微热搅拌去除气体和酒精，待冷却后移至250mL容量瓶中，缓慢加入5mL乙酸锌落液和5mI亚铁氰化钾溶液，用水定容至刻度，混匀.静置30min，用滤纸过滤，弃去初滤液，取后续滤液备用。19.1.2.4其他试样
称取粉碎或混匀后的固体试样2.5g~5g（精确至0.001g）或液体试样5g~25g（精确至0.001g），置于烧杯中，加人约50mL水，缓慢加入5mL乙酸锌溶液和5mL亚铁氰化钾溶液，搅拌混匀转移至250mL容量瓶中并用水定容至刻度，混匀，静置30min，用滤纸过滤，弃去初滤液，取后续滤液备用。19.2酸水解
吸取2份试样处理液各50.0mL.分别置于100mL容量瓶中。19.2.1转化前：1份用水定容至刻度，混匀。19.2.2转化后：1份加5mL盐酸溶液，在68℃~70℃水浴中加热15min，冷却后加2滴甲基红指示液，用氢氧化钠溶液（200g/L)中和至中性，用水定容至刻度，混匀。19.3标定碱性酒石酸铜溶液
吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液和5.0mL碱性酒石酸铜乙液于150mL罐形瓶中，加入10mL水，加2粒~4粒玻璃珠，从滴定管中加药9mL葡萄糖标准溶液，控制在2min内加热至沸，趁热以1滴/2s的速度滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪尽为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液总体积，同时平行操作3份，取其平均值，计算每10mL碱性酒石酸铜溶液（碱性酒石酸甲、乙液各5mL）相当于葡萄糖的质量A（mg）。
注：也可以按上述方法标定4mL～20mL碱性酒石酸铜溶液（甲、乙液各半）来适应试样中还原糖的浓度变化。19.4试样溶液的测定
19.4.1预测滴定：吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液和5.0mL碱性酒石酸铜乙液于150mL锥形瓶中，加入10mL蒸馏水，加2粒～4粒玻璃珠，置于电炉上加热，使其在2min内沸腾，保持沸腾状态15s，滴人转化前样液（19.2.1）或转化后样液（19.2.2）至溶液蓝色刚好褪尽为终点，读取所用样液的体积19.4.2精确滴定：吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液和5.0mL碱性酒石酸铜乙液于150mL锥形瓶中，10
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