【GB国家标准】 饲料中异硫氰酸酯的测定方法

GB/T 13087—2020 代替 GB/T 13087—1991 饲料中异硫氰酸酯的测定方法 Determination of isothiocyanates in feeds 前言 本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 本标准代替 GB/T 13087—1991《饲料中异硫氰酸酯的测定方法》。本标准与 GB/T 13087—1991 相比，除编辑性修改外，主要技术变化如下：删除了银量法（见 1991 年版的第二篇）；增加了方法的检出限和定量限（见第 1 章）；修改了方法的适用范围（见第 1 章，1991 年版的第 1 章）；修改了白芥子酶的制备方法（见 4.10，1991 年版的 3.5）；修改了白芥子酶的用量（见 7.1，1991 年版的 6.1）；增加了异硫氰酸酯混合标准溶液的配制和应用（见 4.12、4.13、7.3 和第 8 章）；修改了气相色谱测定条件（见 7.2，1991 年版的 6.2）；修改了测定结果计算公式（见第 8 章，1991 年版的第 7 章）。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会 (SAC/TC76) 提出并归口。本标准起草单位：四川威尔检测技术股份有限公司、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、通威股份有限公司。 本标准主要起草人：张凤秤、佟建明、张艳红、李德祥、杨发树。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GB/T 13087—1991。 1 范围 本标准规定了饲料中异硫氰酸酯的气相色谱测定方法 GB/T 13087—2020。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和饲料原料中异硫氰酸酯的测定。本标准的检出限为 2 mg/kg，定量限为 5 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 5520 粮油检验发芽试验 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195 动物饲料试样的制备 3 原理 试样中的硫葡萄糖苷在 pH 7.0 缓冲液中，在白芥子酶作用下生成丙烯基异硫氰酸酯、丁烯基异硫氰酸酯和戊烯基异硫氰酸酯，用二氯甲烷提取，脱水、过滤后以气相色谱仪测定，内标法定量，结果以丙烯基异硫氰酸酯计。 4 试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.1 水：GB/T 6682，一级。 4.2 二氯甲烷。 4.3 石油醚（沸程 30℃～60℃）。 4.4 无水硫酸钠。 4.5 柠檬酸溶液 (0.1 mol/L)：准确称取 4.20 g 柠檬酸 ($C_6H_8O_7 cdot 2H_2O$) 溶解于水中，用水稀释并定容至 200 mL，混匀。临用现配。 4.6 磷酸氢二钠溶液 (0.2 mol/L)：准确称取 28.39 g 无水磷酸氢二钠 ($Na_2HPO_4$) 溶解于水中，用水稀释并定容至 1 L，混匀。临用现配。 4.7 盐酸溶液 (0.01 mol/L)：准确移取 0.9 mL 浓盐酸，用水稀释并定容至 1 L，混匀。 4.8 氢氧化钠溶液 (0.01 mol/L)：准确称取 0.40 g 氢氧化钠加水溶解，用水稀释并定容至 1 L，混匀。 4.9 pH 7.0 缓冲溶液：量取 176.5 mL 柠檬酸溶液 (4.5) 于 1000 mL 容量瓶中，用磷酸氢二钠溶液 (4.6) 稀释并定容至 1000 mL，混匀，用盐酸溶液 (4.7) 或氢氧化钠溶液 (4.8) 调整 pH 至 7.0。临用现配。 4.10 白芥子酶：称取 50 g 白芥 (*Sinapis alba* L.) 种子（按照 GB/T 5520 做发芽试验，72 h 内发芽率应大于 85%，保存期不超过两年）粉碎后，置于 500 mL 烧杯中，加入 100 mL 石油醚 (4.3)，搅拌 2 min，静置，弃去上层液体，重复脱脂 10 次，使脂肪含量低于 2%，置通风橱内使溶剂挥干，然后再粉碎一次，80% 通过 0.28 mm 试验筛，装在密闭容器中，置于 -18℃ 以下保存，有效期为 6 个月。为保证白芥子酶活性，制备过程中环境温度应保持在 30℃ 以下，两次粉碎注意少量多次，防止粉碎机过热。 4.11 丁基异硫氰酸酯内标溶液 (0.1 mg/mL)：准确称取 50 mg（精确至 0.00001 g）丁基异硫氰酸酯 ($C_4H_9NCS$，CAS 号：592-82-5，纯度 $ge$ 99%）于 500 mL 棕色容量瓶中，用二氯甲烷溶解并定容，混匀，于 -18℃ 以下保存，有效期为 3 个月。 4.12 异硫氰酸酯混合标准溶液 (1.0 mg/mL)：分别准确称取 10 mg（精确至 0.00001 g）丙烯基异硫氰酸酯 [$CH_2=CHCH_2NCS$]...