【GB国家标准】 植物代谢产物大豆凝集素测定酶联免疫吸附法

ICS07.080
CCSA40
中华人民共和国国家标准
GB/T40220—2021
植物代谢产物大豆凝集素测定
酶联免疫吸附法
Determination of soybean agglutinin of plant metaholitesEnzyme-linked imnunosorbent assay2021-05-21发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2021-12-01实施
中华人民共和国
国家标准
植物代谢产物大豆凝集素测定
酶联免疫吸附法
GB/T40220-2021
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书号：155066：1-67602
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GB/T40220—2021
第1部分，标准化文件的结构和起草规则》的规定本文件按照GB/T1.12020标准化工作导则起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任本文件由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387）提出并归口。本文件起草单位：江南大学、绿城农科检测技术有限公司，北京工商大学、北京萨姆伯科技有限公司。
本文件主要起草人：骨传来、王川丕、王珍、马爱进、王忠兴、郝帅、曾露、马伟，1
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1范围
植物代谢产物大豆凝集素测定
酶联免疫吸附法
本文件规定了植物代谢产物大豆凝集素的酚联免庭吸附测定方法。本文件适用于大豆及其制品中概物代谢产物人豆概集系的衡定2规范性引用文件
GB/T402202021
下列文件中的肉容通文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中注日期的引用文件，仅该日期对应的版适用于本文件，不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682
3术语和定义
析实验室用水规格和试验方法
本文件没有需要界定的术语和定义。4原理
样品经处理后伴液中的大豆凝集素与微礼板中包被的大豆凝集素抗体（捕获抗本）结合，洗板除去未结合的其他应分，开与大豆集素毒标抗体结合，加毒标底物显色，用海标仪在150工品波长下测定吸光度值，计算大豆凝集素含量。5试剂和材料
除非另有规定，木方法所用化学试剂均为分析纯水为GB/T6682规定的二级水。大豆凝集素检测试剂盒：见附录A5.1
大豆凝集素，纯度≥95%，CAS号为68513-95-1。5.2
应按照试剂盒说明书配制所需溶液。仪器设备
6.1小型粉碎机。
6.2分样筛：孔径0.9mm
6.3匀浆机。
6.4涡旋混合器。
6.5电子天平：感量0.01g。
具塞离心管：15mL。
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GB/T40220—2021
6.7微孔板酶标仪：带450nm滤光片。6.8试剂盒所要求的仪器
7样品的制备与保存
7.1固态样品制备
称取100g样品，用小型粉碎机进行粉碎，粉碎后的样本过孔径0.9mm分样筛。装人清活密封器，并加以标识，待测。
半固态样品制备
棕取100g样品，用匀浆机充分混匀后，装入清洁密封容器，加以标识，得测。7.3
液态样品制备
称取100g样品，用涡旋混合器充分混匀后，装入清洁密封容器，并加以标识，待测。8试验步骤
8.1样品前处理
称取1.00g制备的样品，置于15mL具塞离心管中，加入试剂盒所要求提取液，按照试剂盒说明书所述方法进行稀释和检测。
2测定
按照酶联免疫试剂盒所述操作步骤对待测试样（液）进行定量检测。8.3
3平行试验
按以上步骤，对同一标准溶液、同一样品溶液均应进行半行试验测定。8.4空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行5阳性质控
根据待测样本中人豆凝集素的含量，选择一个合适的质控标准，以确定试验过程的操作准确性。9试验数据处理
9.1酶联免疫试剂盒定量检测的标准工作曲线绘制按照试剂盒说明书提供的计算方法或者软件，根据标准品质量浓度与吸光度变化关系绘制标准工作曲线。
9.2待测液质量浓度计算
按照试剂盒说明书提供的计算方法以及计算机软件，将待测液吸光度代人9.1所获得标准工作曲线，计算待测液质量浓度（o）。rKaeerkAca-
9.3结果计算
样品中大豆集素的含量按式（1)计算：X-exVxax1000
mX1000
X—样品中大豆凝集素的含量，单位为微克每于克（ug/kg）：GB/T402202021
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从标准工作曲线上得到的样品中大豆晚集素质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)：V样本提取液体积，单位为毫升（mL)，a
在前处理过程中的稀释倍数；
试样的称样量，单位为克（g）。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留3位有效数学。10精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。11准确度
本方法供酶联免疫试剂盒测试的大豆凝集素溶液加标浓度为100ng/mL时，平均回收率为76.2%~120.9%，当供酶联免疫试剂盒测试的大豆凝集素溶液加标浓度为1000ng/mL时，平均回收率为82.7%~111.9%；当供酶联免疫试剂盒测试的大豆疑集素溶液加标浓度为5000ng/ml时，平均回收率为89.4%~107.6%。
12其他
当称取大豆、豆粘等固态和平周态样本1.00g时，大豆凝集素的检出限为300ug/kg，定量限为500μg/kg；当称取豆奶，豆浆等液态样木1.c0g时，大豆凝集素的检出限为30ug/kg，定量限为50μg/kg。
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GB/T40220-2021
附录A
(资料性）
大豆凝聚素检测试剂盒www.bzxz.net
A，1包被人豆凝集素抗体（捕获抗体）的酶标板，样品提取液：0.01mol/LpH7.4磷酸盐缓冲溶液。A.2
样本稀释液：0.01mol/LpH7.4磷酸盐缓冲溶液。A.3
大豆凝集素标准溶液，0ng/mL.20ng/mL50ng/mL100ng/mL.500ng/mL、1000ng/mL、A.4
2000ng/ml5000ng/ml.和10000ng/mLA5大豆集素的酶标抗体：大豆凝集素抗体-辣根过氧化物酶交联物。洗涤液浓缩液：可用水稀释后使用。A.6
底物溶液。
A.8反应终止液。
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书号：155066：1-87602
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