【国家标准】 食品安全国家标准 食品中丙酸钠、丙酸钙的测定

中华人民共和国国家标准
GB5009.120—2016
食品安全国家标准
食品中丙酸钠、丙酸钙的测定
2016-08-31发布
人民共和国
国家卫生和计划生育委员会
2017-03-01实施
GB5009.120—2016
本标准代替GB/T5009.120—2003《食品中丙酸钠、丙酸钙的测定》、GB/T23382—2009《食品中丙酸钠、丙酸钙的测定高效液相色谱法》。本标准与GB/T5009.120—2003相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准食品中丙酸钠、丙酸钙的测定”；增加了液相色谱法；
一气相色谱柱由填充柱改为毛细管柱，色谱条件也相应变动。I
1范围
食品安全国家标准
食品中丙酸钠、丙酸钙的测定
GB5009.120—2016
本标准规定了豆类制品、生湿面制品、面包、糕点、醋、酱油中丙酸钠、丙酸钙的测定方法。本标准适用于豆类制品、生湿面制品、面包、糕点、醋、酱油中丙酸钠、丙酸钙的测定。第一法液相色谱法
2原理
试样中的丙酸盐通过酸化转化为丙酸，经超声波水浴提取或水蒸汽蒸馏，收集后调pH，经高效液相色谱测定，外标法定量其中丙酸的含量。样品中的丙酸钠和丙酸钙以丙酸计，需要时可根据相应参数分别计算丙酸钠和丙酸钙的含量，3试剂与材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂
磷酸(H,PO,)。
3.1.2磷酸氢二铵[（NH),HPO]。3.1.3硅油。
试剂配制
磷酸溶液（1mol/L）：在50mL水中加人53.5mL磷酸，混匀后，加水定容至1000mL3.2.1
3.2.2磷酸氢二铵溶液（1.5g/L）：称取磷酸氢二铵1.5g，加水溶解定容至1000mL3.3标准品
丙酸标准品（C,H.O,），CAS：79-09-4.纯度≥97.0%3.3.1
3.3.2丙酸标准贮备液（10mg/mL）：精确称取250.0mg丙酸标准品于25mL容量瓶中，加水至刻度，4℃冰箱中保存，有效期为6个月。4仪器和设备
高效液相色谱（HPLC)仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。天平：感量0.0001g和0.01g。
超声波水浴。
4.4离心机：转速不低于4000r/min。组织捣碎机。
具塞塑料离心管：50mL。
水蒸汽蒸馏装置：500mL。
鼓风干燥箱。
pH计。
5分析步骤
样品制备
GB5009.120—2016
固体样品经组织捣碎机捣碎混匀后备用（面包样品需运用鼓风干燥箱，37℃下干燥2h3h进行风干，置于组织捣碎机中磨碎）：液体样品摇匀后备用。5.2试样处理
5.2.1蒸馏法（适用于豆类制品、生湿面制品、醋、酱油等样品）：样品均质后，准确称取25g（精确至0.01g），置于500mL蒸馏瓶中，加人100mL水，再用50mL水冲洗容器，转移到蒸馏瓶中，加1mol/L磷酸溶液20mL，2滴～3滴硅油，进行水蒸气蒸馏，将250mL容量瓶置于冰浴中作为吸收液装置，待蒸留至约240mL时取出，在室温下放置30min，用1mol/L磷酸溶液调pH为3左右，加水定容至刻度，摇匀，经0.45um微孔滤膜过滤后，待液相色谱测定。5.2.2直接浸提法（适用于面包、糕点）：准确称取5g（精确至0.01g）试样至100mL烧杯中.加水20mL，加人1mol/L磷酸溶液0.5mL，混匀，经超声浸提10min后，用1mol/L磷酸溶液调pH为3左右，转移试样至50mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。将试样全部转移至50mL具塞塑料离心管中，以不低于4000r/min离心10min，取上清液，经0.45μm微孔滤膜过滤后，待液相色谱测定6仪器参考条件
色谱柱：Cls柱，4.6mmX250mm，5μm或等效色谱柱6.1
流动相：1.5g/L磷酸氢二铵溶液，用1mol/L磷酸溶液调pH为2.7~3.5（使用时配制）；经6.2
0.45um微孔滤膜过滤。
6.3流速：1.0mL/min。
6.4柱温：25℃。
进样量：20L。
波长：214nm。
色谱柱清洗参考条件：实验结束后，用10%甲醇清洗1h，再用100%甲醇清洗1h。6.7
7标准曲线绘制
7.1蒸馏法：准确吸取标准储备液0.5mL、1.0mL、2.5mL、5.0mL、7.5mL、10.0mL、12.5mL置于500mL蒸馏瓶中，其他操作同5.2.1样品前处理，其丙酸标准溶液的最终浓度分别为0.02mg/mL、0.04mg/mL.0.1mg/mL0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL.0.5mg/mL.经0.45μm微孔滤膜过滤，浓度由低到高进样，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。7.2直接浸提法：准确吸取5.0mL标准储备液于50mL容量瓶中，用水稀释至刻度，配制成浓度为2
GB 5009.120—2016
1.0mg/mL标准工作液。再准确吸取标准工作液0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL至10mL容量瓶中，分别加入1mol/L磷酸0.2ml，用水定容至10mL，混匀。其丙酸标准溶液的最终浓度分别为0.02mg/mL.0.05mg/mL0.1mg/mL.0.2mg/mL.0.3mg/mL.0.4mg/mL、0.5mg/mL，经0.45um微孔滤膜过滤，浓度由低到高进样，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
8试样溶液的测定
处理后的样液同标准系列同样进机测试。根据标准曲线计算样品中的丙酸浓度待测样液中丙酸响应值应在标准曲线线性范围内，超出浓度线性范围则应稀释后再进样分析9分析结果的表述
样品中丙酸钠（钙)含量（以丙酸计），按式（1)计算：X=cXVX1000
mx1000
式中：
样品中丙酸钠（钙）含量（以丙酸计），单位为克每千克（g/kg）；———由标准曲线得出的样液中丙酸的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；C
V——样液最后定容体积，单位为毫升（mL）；m—样品质量，单位为克（g）；—稀释倍数
试样中测得的丙酸含量乘以换算系数1.2967，即得丙酸钠的含量；试样中测得的丙酸含量乘以换算系数1.2569，即得丙酸钙含量，计算结果保留三位有效数字。
精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。11其他
取样为25g定容体积为250mL时，丙酸的检出限为0.03g/kg，定量限为0.10g/kg。第二法气相色谱法
2原理
试样中的丙酸盐通过酸化转化为丙酸，经水蒸气蒸馏收集后直接进气相色谱，用氢火焰离子化检测器检测，以保留时间定性，外标法定量其中丙酸的含量。样品中的丙酸钠和丙酸钙以丙酸计，需要时，可根据相应参数分别计算丙酸钠和丙酸钙的含量3
3试剂和材料
注：除非另有说明，所用试剂均为分析纯水为GB/T6682规定的一级水。13.1试剂
磷酸（HPO）。
甲酸（CH,O）。
硅油。
13.2试剂配制
磷酸溶液（10+90）：取10mL磷酸加水至100mL。甲酸溶液（2+98）：取1mL甲酸加水至50mL。13.3标准品
丙酸标准品（CH.O2），CAS：79-09-4，纯度≥97.0%。13.4标准溶液配制
GB5009.120—2016
13.4.1丙酸标准贮备液（10mg/mL）：精确称取250.0mg丙酸标准品于25mL容量瓶中，加水至刻度，4℃冰箱中保存，有效期为6个月。13.4.2
2丙酸标准使用液：将贮备液用水稀释成10μg/mL~250uμg/mL的标准系列，临用现配。仪器和设备
14.1气相色谱仪：带氢火焰离子化检测器14.2天平：感量为0.0001g和感量为0.01g。14.3水蒸气蒸馏装置。
14.4鼓风干燥箱。
分析步骤
15.1样品制备
同5.1。
15.2试样处理
样品均质后.准确称取25g，（面包样品需运用鼓风干燥箱，37℃下干燥2h3h进行风干，置于研钵中磨碎），置于500mL蒸馏馅瓶中，加入100mL水，再用50mL水冲洗容器，转移到蒸馏瓶中，加10mL磷酸溶液.2滴~3滴硅油，进行水蒸气蒸馏，蒸馏速度为2滴/s～3滴/s，将250mL容量瓶置于冰浴中作为吸收液装置，待蒸馏近250mL时取出，在室温下放置30min，加水至刻度。混匀，供气相色谱分析用。
15.3仪器参考条件
色谱柱：聚乙二醇（PEG）石英毛细管柱，柱长30m，内径0.25mm，膜厚度0.5μm或同等性能4免费标准bzxz.net
的色谱柱。
载气：氮气，纯度>99.99%。
载气流速：1mL/min。
进样口温度：250℃。
分流比：10：1。
检测器温度：250℃。
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柱温箱温度：125℃保持5min.然后以15℃/min的速率升到180℃，保持3min。15.3.7
进样量：1μL
15.4标准曲线的制作
取标准系列中各种浓度的标准使用液10mL，加0.5mL甲酸溶液，混匀。将其分别注人气相色谱仪中，测定相应的峰面积或峰高，以标准工作液的浓度为横坐标，以响应值（峰面积或峰高）为纵坐标，绘制标准曲线。
15.5试样溶液的测定
吸取10mL制备的试样溶液（15.1）于试管中，加人0.5mL甲酸溶液，混匀，同标准系列同样进机测试。根据标准曲线计算样品中的丙酸浓度。6分析结果的表述
样品中内酸钠（钙）含量（以丙酸计），按式（2）计算：V
式中：
——样品中丙酸钠（钙）含量（以丙酸计），单位为克每千克（g/kg）；由标准曲线得出的样液中丙酸的浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）；样品质量，单位为克（g)；
样液最终定容体积，单位为毫升（mL)；1000——ug/g换算至g/kg的系数。试样中测得的丙酸含量乘以换算系数1.2967，即得丙酸钠的含量；试样中测得的丙酸含量乘以换算系数1.2569，即得丙酸钙含量。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示·结果保留三位有效数字7精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。3其他
取样为25g定容体积为250mL时.丙酸的检出限为0.03g/kg，定量限为0.10g/kg（2)
丙酸标准物质的气相色谱图
丙酸标准物质的气相色谱图见图A.1。m
A.2丙酸标准物质的液相色谱图
附录A
标准物质色谱图
丙酸标准物质的气相色谱图
丙酸标准物质的液相色谱图见图A.2。mAU
丙酸标准物质的液相色谱图
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