【行业标准】 农药登记用杀蚴剂药效试验方法及评价

ICS 65.100
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 2339--2013
农药登记用杀坳剂药效
试验方法及评价
Efficacy test methods and evaluation of cercaria-killing for pesticide registration2013-05-20发布
2013-08-01实施
中华人民共和国农业部发布
本标准按照GB/T1.1.-2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口，本标准起草单位：农业部农药检定所、汇苏省血吸虫病防治研究所本标准主要越草人：裁建荣、李贤宾、朱春雨、张住、王晓军张宏军、张文君。NY/T2339—2013
1范围
农药登记用杀剂药效试验方法及评价NY/T 2339—2013
本标准规定了口本血吸出（Schistisorjaponicun）尾蜘杀蜘剂室内和模拟现场药效试验方法和药效评价指标
本标准适用丁农药登记用杀蚜剂的效果评价2术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。2.1
日本血吸虫尾蝴
cercarie
日本血吸虫生活史的-个阶段，由体部和尾部组成：尾蚜感染终宿主质发育成熟为日本血吸虫成虫。
感染性钉螺infectedOmcomelania snail这里仅指能逸山日木前吸虫尾的钉螺。2.3
worm burden
虫负荷
小鼠体内感染日本血吸虫成虫的数量。3仪器设备
3.1体式显微镜：放大倍数不低于10倍，3.2塑料杯：直径7cm-10cm，高10cm圆柱形带盖塑料杯，杯盖开有直径0.5cm的通气孔3个-~5个。
3.3玻璃缸T50cm×25cm×25cm矩形玻璃缸，3.4铁丝笼：用铁丝制作成长方体网格型鼠笼，鼠笼规格为45cm×7cm×7cm，隔成5格周边网格孔径1cm。鼠笼的两端有可谢挂钩，使测定鼠笼可挂于坡璃缸E，让小鼠腹部和尾部接触到缸中水面。3.5培养板：24孔或16孔培养板。3.6移液器或微量移液管：0.1±1.200μ1.。3.7医用乳胶手套
4试剂与材料
4.1生物试材
4.1.1口木血吸虫尾蜘：将30只~-50！只H本血吸盅感染性钉螺，放入10Cml.的烧杯巾，[:盖尼龙沙网，倒人28℃脱氯水至海没沙网，在白炽灯下逸蝴2h、获得尾蜘备。4.1.2实验小鼠：选取体重（20二2)清洁级小鼠，在卫生纸为热料的饲养盒中饲养1d以上，去除小鼠皮肤可能清有的松油后备用。
4.1.3感染性钉螺：获取50只以上口本血吸虫感染性钉螺.在钉螺饲养盘中28℃饲养7以上待用。1
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4.2试验药剂
原药与制剂。bzxz.net
4.3对照药剂
选择已登记的常用药剂。
4.4空白对照
脱氯H米水，
5试验条件与方法
5.1试验条件
温度为（25士1)%.对湿度为（60+5)%5.2杀蝴活性测定
根据药剂特性，水溶性药物直接用脱氯水稀释，非水溶性药物选用适当的助剂近行稀释，将试验药剂配制成5个~7个等比浓度。在培养极的各孔中加人2mL脱氯水，用接种环吊取新逸出的日本血吸出尾10条~30条激人培养孔中，然后在各孔中分别滴入工迷各凝度药液10L，段刘照药剂组租空白对照组，每浓度组处理3孔以上，用针剌法观察尾蚜的死亡情况.记录5min和30min尾坳死亡数，计算1C值、试验不少于3次重复。
5.3杀蜘感染试验
设3个待测药剂剂量组，1个对照药剂组和1个空H对照组。将30ml.脱氟水倒人圆柱形带盖塑料杯，移入200条刚逸出的日本血吸直尾蝴，分别将上述各剂量组药液施于水体表面、在用药后0.51，每个杯内放人1只实验小鼠并加盖，0.5h后，将小鼠移人饲养盒内，分组常规饲养，35d后按鼠解部法解剖收集血吸虫出体，计数检获成出数，计算感绑率下降率和虫负荷下降率。每个剂量组10只鼠，试验不少于3次重复。
5.4模拟现场试验
设3个待测药剂剂量组，1个对照药剂组和1个空白对照组。取50cm×25cm×25cm矩形坡璃缸10只，分别注人28%脱氯水20L然后在齐缸中放置10只~20只感染性钉螺.1h后分别将上述务剂量组药液施于水体表面，在用药后0.5h和2h，分别将装有10只小鼠的铁丝笼悬浮于水体衣面，使得小鼠腹部和尾部接触水面0.5h后将小鼠移人饲养盒内分组常规饲养35d后按鼠解剖法解剖收集血吸出虫体，计数检获成虫数，计算感染率下降率和出负荷下降率。试验不少于3次重复6数据统计与分析
6.1将试验数据按式(1)和式(2)计算各处理的死亡率或校止死率。计算结果均保留到小数点后两位。
式中：
死亡率，单位为百分率（路)；
K；——表示死亡尾蜘数，单位为只；EK,
N：——表示处理总尾蜘数，单位为以。X1co
PP。x100
武中：
校正死亡率，单位为百分率（%)；处理死亡率，单位为百分率（%)；空白对照死亡率,单位为百分率(%)AY/T2339—2013
若空对照死亡率5%，无需校正；空自对照死亡率在5%～10%，应按式（2)进行校正：空凹对照死亡率>10%,试验需重新进行，
6.2感染率按照式（3)计算
感染率，单位为白分率(%)；
G×100
实际观察到感染血吸出的小鼠数量,单位为只；实际观察的小鼠总数，单位为只。6.3感染率下降率按照式(4)计算。P-P
式中：
感染率下降率,单位为而分率(%)，P
观察期内空白对照组小鼠感染率；观察期内用药组小鼠感染率。
6.4平均虫负荷按照式(3)计算。EK
式巾：
学均虫负荷；
表示观察组收集日本血吸虫总虫数，单位为只；表示观察组小鼠总数,单位为只，6.5史负荷下降率按照式(G)计算Po
式中：
m=n×100
虫负荷下降率，单位为百分率（%)：观察期内空凹对照组平均虫负荷；…．·观察期内用药组平均虫负荷。(3)
采用几率值分析的方法对数据进行处理。可来用SAS统计分析系统、PI.)等软件进行统计分析，求出IC%值及其95%置信区间。药效评价指标
测试药物推荐成用剂量各试验结果均达到评价指标的为合格产品（衣1)。表1药效评价指标
杀勋感染试验
评价指练
推菩应用剂壁感染率下降28片
推格应用剂量业负荷1降含95%
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模拟现场试验(0.5h和2h）
结果与报告编写
表1(续）
评价指标
推萨应用剂虽感染率下降≥80元推族应川剂量虫负荷下降2003%
根据IC、感染率、感染率下降率、止负荷下降率统计结果进行分析评价：写出正式试验报告，并列出原始数据
A.1针刺法
附录A
（规范性附录）
杀蝴剂药效调查方法
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试验时将尾嫩置于解剖镜下观察，用解剖针轻刺尾坳.尾坳活动良好者为活蜘，不活动或有软体肿胀，断尾透明化的为蛇亡尾蜘或变火人侵能力的尾蜥A.2鼠解剖法
用镊子将处死后的小鼠腹部皮肤提起，用剪刀剪开胶壁，打川腹腔.观察小鼠肝脏在无口本血吸虫虫卵沉着引起的肉芽肿，观察肝门静脉、肠系膜静脉有儿血吸虫成虫，若发现成虫，则将内脏取山放入平皿中,加人生理盐水，分离检出所有血吸虫成虫，解剖镜下观察并计数。a
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