【国家标准】 婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定

中华人民共和国国家标准
GB29989—2013Www.bzxZ.net
食品安全国家标准
婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定2013-11-29发布
中华人民共和国
国家卫儿和划业育委员会
2014-06-01实施
1范围
食品安全国家标准
婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定本标准规定了婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定方法。本标准适用手婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定2原理
GB29989—2013
试样经过水提取，用高氯酸沉淀蛋白质后过滤。滤液经碱皂化后使溶液中结合态的左旋肉碱游离出来。左旋肉碱与乙酰辅酶A在乙酰肉碱转移酶的催化下反应生成乙酰肉碱和游离的辅酶A。游离的辅酶A和2-硝基苯甲酸反应生成黄色物质，其颜色深浅与游离的辅酶A含量成正比。因游离的辅酶A与左旋肉碱是等摩尔反应关系，可间接求出试样中左旋肉碱含量3试剂和材料
注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。3.1试剂
高氯酸(HCIO4)。
3.1.2氢氧化钠(NaOH)。
3氢氧化钾(KOH）。
3.1.42-硝基苯甲酸(C14HsN2O.S2)。3.1.5N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸(CgH18N2O4S)。3.1.6乙二胺四乙酸二钠（C1oH14N2Na2-2H2O）3.1.7乙酰辅酶A（AcetylCoA）：在2℃~8℃保存。3.1.8乙酰肉碱转移酶(CAT)：在2℃~8℃保存。3.2试剂配制
3.2.1高氯酸溶液（13%）：13mL高氯酸稀释至100mL。3.2.2氢氧化钠溶液（10mol/L）：称取40g氢氧化钠用水溶解，冷却后稀释至100mL。3.2.3氢氧化钾溶液（4.0mol/L）：称取22.4g氢氧化钾用水溶解，冷却后稀释至100mL。3.2.4显色储备液：分别称取50mg2-硝基苯甲酸、5.96gN-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸、185mg乙二胺四乙酸二钠溶于30mL去离子水中，用10mol/LNaOH溶液调pH至7.4～7.6，然后用水定容至50mL。此液置于4℃冰箱中可保存3个月。3.2.5显色工作液：吸取5.0mL显色储备液用水定容至25mL。3.2.6乙酰辅酶A（AcetylCoA）溶液：称取20.0mg乙酰辅酶A溶于2.0mL水中。临用时配制。1
GB29989—2013
3.2.7乙酰肉碱转移酶(CAT)溶液：吸取100μL乙酰肉碱转移酶悬浮液，经1500r/min离心10min，弃去上层清液，沉淀用2mL水溶解。临用时配制。3.3标准品
左旋肉碱标准品（CHisNO3）：纯度≥98%。3.4标准溶液配制
3.4.1左旋肉碱标准储备液（80μg/mL）：准确称取20mg（精确0.0001g）于102℃土2℃烘箱中烘2h的左旋肉碱，用水定容至250mL容量瓶中。此液置于4℃冰箱中可保存1个月。3.4.2左旋肉碱标准工作液：分别吸取左旋肉碱标准储备液0.5mL、1mL、2mL、3mL、5mL于25mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。此溶液仅限于当天使用。4仪器和设备
4.1分析天平：感量0.1mg。
4.2pH计：精度0.01。
4.3离心机：转速1500r/min。
4.4恒温水浴锅：温度可控制在40℃土2℃。4.5分光光度计。
5分析步骤
5.1试样处理
准确称取5g（精确0.0001g）混合均匀的试样于烧杯中，用30mL40℃温水溶解，转入100mL容量瓶中。加入10mL13%高氯酸溶液，混合均匀后静正20min。用蒸馏水定容至刻度，混匀，用定量滤纸过滤。
取滤液20mL，用4mol/L氢氧化钾溶液调pH为12.513.0后，置于40C水浴60min。冷却后用13%高氯酸调pH为7.0~7.5。将样液转入50mL容量瓶中，用蒸馏水定容。混匀后置于4℃冰箱中过夜。将试样处理液从冰箱中取出放置至室温，取上清液用0.45μm滤膜过滤后备用5.2标准曲线的绘制
吸取左旋肉碱标准工作液2.0mL于1cm比色皿中，加入0.8mL显色工作液和100μL乙酰辅酶A溶液，盖上比色皿盖，混合均匀后放入分光光度计中，分光光度计的波长调为412nm，5min后归零。迅速加入100L乙酰肉碱转移酶溶液，混合均匀后放入分光光度计中，反应10min后记录吸光值。以左旋肉碱标准工作液的浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，制作标准曲线。5.3试样测定
取2.0mL试样处理液按5.2的步骤测定其吸光值。在标准曲线上查得试样待测液的浓度。6分析结果的表述
试样中的左旋肉碱的含量X，以质量分数mg/100g表示，按式（1）计算：2
式中：
+100........
mxV×10
X样品中左旋肉碱含量，单位为毫克每百克（mg/100g）；c-—从标准曲线上查得的试样处理液浓度，单位为微克每毫升（μug/mL）：V滤液的体积，单位为毫升（mL)：m试样的质量，单位为克（g）。GB29989—2013
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留小数点后一位。精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%其他
方法检出限0.6mg/100g，定量限为2mg/100g
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