【商检行业标准(SN)】 进出口食品中丙线磷残留量 检测方法 中华人民共和国 进出口食品中丙线磷残留量 检测方法 $%

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T0351—2009
代替SN0351—1995免费标准bzxz.net
进出口食品中丙线磷残留量
检测方法
Determinationof ethoprophosresiduesinfoodsforimportandexport
2009-07-07发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2010-01-16实施
本标准代替SN0351一1995《出口粮谷中丙线磷残留检测方法》。本标准与SN0351一1995相比，主要变化如下：扩大了使用范围；
-增加了液相色谱-质谱/质谱确证方法；取消了SN0351--1995的\2抽样和制样”，增加了试样制备与保存”；改进了样品前处理技术路线。
本标准附录A和附录B均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T0351—2009
本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局，中华人民共和国浙江出人境检验检疫局、中华人民共和国北京出人境检验检疫局、中华人民共和国河北出入境检验检疫局。本标准主要起草人：陈捷、谢建军、王岚、吴映旋、林海丹、郑自强、徐超一、王凤池。本标准于1995年首次发布，本次为第一次修订。1范围
进出口食品中丙线磷残留量
检测方法
SN/T0351—2009
本标准规定了进出口食品中丙线磷残留量检测的气相色谱测定和液相色谱-质谱/质谱确证方法。本标准适用于大米、绿豆、菠菜、荷兰豆、柑橘、葡萄、板栗、茶叶、猪肉、鸡肉、猪肝、罗非鱼、蜂蜜中丙线磷残留量的测定和确证。
2方法提要
样品经乙睛或乙酸乙酯提取后，通过固相萃取小柱净化，采用气相色谱（火焰光度检测器）测定，外标法定量。液相色谱-质谱/质谱确证。3试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯水为去离子水3.1丙酮。
3.2乙酸乙酯。
正己烷。
乙睛：色谱纯。
甲醇。
无水硫酸钠：650℃灼烧4h，在
干燥器内冷却至室温，储于密闭干燥器中备用。氯化钠。
正己烷-丙酮(2十1，体积比）：取正己烷100L，加人50mL丙酮，混匀。丙线磷标准物质(CgH1902PS2，CAS编号{3194-48-4)：纯度大于等于99.0%。3.9
丙线磷标准储备液；准确称取适量丙线磷，用乙酸乙酯配制成浓度为1.00mg/mL的标准储备3.10
液，于-18℃保存。
丙线磷标准中间溶液：准确吸取适量标准储备液，用乙酸乙酯稀释至浓度为100.0ug/mL的标3.11
准中间溶液，于18℃保存。
丙线磷标准工作液：使用前根据需要将标准中间溶液用乙酸乙酯稀释成适当浓度的标准工作液。石墨化碳黑固相萃取柱：250mg，3mL，或相当者。3.14
氟罗里硅土固相萃取柱：1000mg，3mL,或相当者。氨基固相萃取柱：200mg，3mL，或相当者。CHROMABONDXTR固相取杜：3000mg，15mL，或相当者。微孔滤膜：0.45um，有机系。
仪器和设备
气相色谱仪：配有火焰光度(FPD-P)检测器。液相色谱-质谐/质谱联用仪：配有电喷募离子源。天平：感量0.1mg和0.01g。
食品捣碎机。
SN/T 0351-2009
4.5高速均质机。
4.6离心机6000z/min.
4.7旋转蒸发仪。
4.8氮气吹干仪。
旋涡振荡器。
振荡器。
固相萃取装置。
容量瓶：25mL。
具塞塑料离心管：50mL，聚丙烯。浓缩瓶：25mL。
具塞玻璃刻度试管：5mL。
样品制备与保存
5.1样品制备
5.1.1菠菜、荷兰豆、柑橘、葡萄取有代表性样品约500，将其可食用部分切碎后，用捣碎机加工成浆状。混匀，装人洁净容器，密闭，标明标记。
5.1.2大米、绿豆、板栗、茶叶
取有代表性样品约500g，用粉碎机粉碎并通过孔径2.0mm圆孔筛。混匀，装入洁净容器，密闭，标明标记。
5.1.3猪肉、鸡肉、猪肝、罗非鱼取有代表性样品约500g，剔骨去皮，用绞肉机绞碎，混匀，装入洁净容器，密闭，标明标记5.1.4蜂蜜
取代表性样品约500g，对无结晶的蜂蜜样品将其搅拌均匀；对有结晶析出的蜂蜜样品，在密闭情况下，将样品瓶置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温，在融化时必须注意防止水分挥发。装人洁净容器，密封，标明标记。5.2试样保存
茶叶、蜂蜜、粮谷及坚果类等试样于0℃～4℃保存；水果蔬菜类和动物源性食品等试样于一18℃以下冷冻保存。
在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。6测定步骤
6.1提取
6.1.1大米、绿豆、板栗
称取5g试样（精确至0.01g）于50ml.离心管中.加2g无水硫酸钠（3.6），加15mL乙酸乙酯（3.2），匀质提取1min，振荡提取20min，4000r/min离心5min，移取上清液于试管中，再分别用10mL乙酸乙酯洗涤残渣两次，合并提取液，45℃以下氮吹至约2mL，待净化。6.1.2菠菜、荷兰豆、柑橘、葡萄称取10g试样（精确至0.01g)于50mL离心管中，加10g无水硫酸钠，加15mL乙酸乙酯，匀质提取1min4000r/min离心5min，移取上清液于25mL容量瓶中，再用10mL乙酸乙酯洗涤残渣一次，涡旋振荡1min，4000r/min离心5min，合并提取液于容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度。取12.5mL提取液待净化。
6.1.3猪肉、鸡肉、猪肝、罗非鱼肉SN/T0351—2009
称取试样5g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加人10g无水硫酸钠，15mL乙睛，匀质提取1min，6000r/min离心5min，移取上清液于25mL容量瓶中，再用10mL乙腈萃取残渣一次，合并提取液于容量瓶中，用乙睛定容至刻度，移取10mL提取液待净化。6.1.4茶叶
称取1.0g试样（精确至0.01g)于10mL离心管中，加3mL水，浸泡20min，加0.5g无水硫酸钠，振荡混匀，再分别用2ml.乙酸乙酯提取3次，旋涡振荡提取1min，4000r/min离心3min，合并提取液，待净化。
6.1.5蜂蜜
称取2g试样（精确至0.01g)于50mL离心管中，加3mL水，0.5g氯化钠（3.7），振荡混匀，过固相萃取柱（3.16），保持5min后，用35mL乙酸乙酯淋洗，流速控制为1mL/min，滤液过无水硫酸钠收集于50mL浓缩瓶中，在45℃以下旋转浓缩至约1mL，待净化。6.2净化
6.2.1大米、绿豆、菠菜、荷兰豆、柑橘、葡萄石墨化碳黑固相萃取柱（3.13)用2×2mL乙酸乙酯活化，充去流出液。将待净化溶液过石墨化碳黑固相萃取柱，再用2×2mL乙酸乙酯洗脱，流速控制为1mL/min，收集全部流出液于试管中，在45℃以下氮吹至近干，用乙酸乙酯定容至1.0mL，待测。6.2.2猪肉、鸡肉、猪肝、罗非鱼、板栗在氟罗里硅土固相萃取柱(3.14)上填装0.5g无水硫酸钠，用2×2mL乙腈（3.4)活化，弃去流出液。取10mL待净化液过柱，用3mL乙睛洗脱，收集全部流出液于25mL浓缩瓶，在45C以下旋转浓缩至约2mL；再过石墨化碳黑固相萃取柱，在柱上填装0.5g无水硫酸钠，用2X2mL乙腈活化。将浓缩液过石墨化碳黑固相萃取柱，再用3X1mL正已烷-丙酮（3.8)洗脱，流速控制为1mL/min，收集流出液于试管中，在45℃以下氮吹至约0.5mL，用乙酸乙酯定容至2.0mL，过0.45μm滤膜（3.17)后，待测。6.2.3茶叶
在石墨化碳黑固相萃取柱上填装0.5g无水硫酸钠，用2×2mL乙酸乙酯活化，弃去流出液。将待净化液过柱，用2×2ml.乙酸乙酯洗脱，流速控制为1mL/min，收集全部过柱溶液，在45℃下吹氮浓缩至约1mL。氨基柱（3.15)先用2×2mL正已烷-丙酮活化，将浓缩液过氮基柱后，3×1mL正已烷-丙酮洗脱，流速控制为1mL/min，收集全部流出液于试管中，在45℃以下氮吹至约0.5mL，用乙酸乙酯定容至1.0mL,待测。
6.2.4蜂蜜
在石化碳黑固相萃取柱上填装0.5g无水硫酸钠，用2×2mL乙酸乙酯活化，弃去流出液。将待净化浓缩液过石墨化碳黑固相萃取柱后，用2×2mL乙酸乙酯洗脱，流速控制为1mL/min，收集全部过柱溶液于试管中，在45℃下吹氮浓缩至约0.5mL，用乙酸乙酯定容至2.0mL，待测。6.3测定
6.3.1气相色谱条件
色谱柱：HP-5毛细管柱，30mX0.32mm(内径），0.25μm，或性能相当者；)20/nm-140 0/m160 (6 min)25 ℃/m-270 C(5 min);b)
升温程序：80℃(0.5min)
进样口温度：220℃；
检测器温度：245℃；
载气：氮气（纯度99.999%），流量7.0mL/min进样模式：无分流进样；
进样量：1.0μL。
SN/T0351—2009
气相色请测定
根据样液中丙线磷含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中丙线磷响应值均应在仪器检测线性范围内。标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，丙线磷的保留时间约为6.8min。标准品的色谱图参见附录A中图A.1.6.4定性确证
6.4.1LC/MS-MS质谱条件
液相色谱参考条件
色谱柱：DiscoveryCis柱，150mm×2.1mm(内径），5μum，或相当者；杜温：40℃；
流动相：甲醇-水（50十50，体积比）；流速：0.30mL/min；
进样量：10L，
梯度洗脱：见表1。
表1流动相梯度表
时间/min
质谱参考条件
流速/(mL/min）
离子源：电喷雾离子源(ESI)；
扫描方式：负离子扫描；
检测方式：多反应选择离子检测(MRM)；水/%
甲醇/%
电喷雾电压（IS）：45boV：
雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；辅助气温度（TEM)：350℃；
g）定性离子对、定量离子对、采集时间、去簇电压及碰撞能量见表2。注：非商业性声明，质谱条件是在API3000液相色谱-质谱/质谱联用仪上完成，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。表2丙线磷定性离子对、去簇电压及碰撞能被测物名称
丙线磷
定性离子对(m/2)
243.1/97.2
243.1/130.8
采集时间
去籍电压
碰撞能量
6.4.2液相色谱-质谱/质谱法定性确证当进行GC样品测定时，检出试样中丙线磷残留量大于方法检测限时，取0.5mL气相色谱上机测定溶液，用氮气吹干，用甲醇稀释到适当浓度，以LC-MS/MS法定性确证。被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，如果样品中待检测物质与标准溶液中对应的保留时间偏差在土2.5%之内；且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液谱图中对应的定性离子4
SN/T0351—2009
的相对丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围，被确证的样品可判定为丙线磷阳性检出。丙线磷标准品的子离子全扫描质谱图和多反应监测(MRM)色谱图参见附录B中图B.1、图B.2。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
6.5空白试验
除不加试样外，按上述测定步骤进行。7
结果计算和表述
>20~50
>10～~20
用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中丙线磷的残留含量，计算结果需扣除空白值。X
式中：
试样中丙线磷含量，单位为微克每千克（μg/kg）；A
样液中丙线磷的峰面积；
-标准工作溶液中丙线磷浓度，单位为微克每升（μg/L)；最终样液的定容体积，单位为毫升（mL)；标准工作溶液中丙线磷的峰面积；最终样液所代表试样质量，单位为克（g）。m
测定低限和回收率
测定低限
+（1）
丙线磷在大米、绿豆、菠菜、荷兰豆柑橘、葡萄、板栗和茶叶中的测定低限均为5.0 ug/kg、在猪肉、鸡肉、猪肝、罗非鱼和蜂蜜中测定低限均为1bμg/kg。8.2回收率
丙线磷添加浓度及回收率的数据见表/4。一表4丙线磷的回收率
样品名称
荷兰豆
添加浓度/（μg/kg）
回收率范围/%
80.0~81.5
88.6~99.7
89.0~-104
101.0~112
86.0~90.0
88.5~92.5
SN/T0351—2009
样品名称
罗非鱼
表4（续）
添加浓度/(μg/kg）
回收率范围/%
80.0~88.0
80.5~92.5
87.0~99.1
82.0~90.0
85.0~95.5
82.4~83.6
80.0~94.8
79.8--99.3
81.4~92.8
100~104
82.7~89.9
84.2~91.8
80.1~92.0
80.3~81.5
80.8~87.0
80.0~88.9
76.2~83.6
79.8~90.5
附录A
（资料性附录）
丙线磷的标准物质气相色谱图
X-8189
丙线磷的标准物质的气相色谱图（GC-FPD)12
SN/T0351-—2009
SN/T0351—2009
量9.0e5-
附录B
（资料性附录）
丙线磷标准物质LC-MS/MS质谱图和色谱图97.0
809010011012013014015016017018019020021022023024025010203040506070
(m/2)/amu
243.1/97.2
丙线磷标准物质子离子全扫描质谱图9/min
243,1/130.8
丙线磷标准物质多反应监测(MRM)色谱图（5μg/L）6.99
9t/min
Foreword
SN/T0351—2009
This standard substituted SN 0351-1995method for determination of ethoprophos residues in cerealsforexport》.
ThedifferencesbetweenthisstandardandSN0351-1995areasfollows:-Enlarged scope about applyed-Addedmethodof confirmation byGaschromatographyand liquid mass spectrometry-Removed“2SamplingandSamplePreparaoftestsample\
ninSN0351~1995,added“PreparationandstorageImprovedontechnical lineaboutextractionofsampleAnnex A and B of this standard are informative annexs.This standard was proposed by and is under the charged of the Certification and Accreditation Ad-ministration of thePeople's Repubiicof China.This standard was drafted by Guangdong Entry/Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People'sRepublic of China,Zhejang Entry-Exit Inspectjon and Quarantine Bureau of the People's Republic ofChina,Beijing Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of hhe Pedple's Republic of China and He-bei Entry-Exit Inspection and QuarantineBufeau of the People's Republic of China.The main drafters of this standard are Chen Jie,Xie Jianjun,Wanig Lan,Wu Yingxuan, Lin Haidan,Zheng ziqiang,Xu Chaoyi and Wang Fengchi.This standard is published for the first time in 1995. The standard is modified for the first time.
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