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- GB 4789.15-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验 霉菌和酵母计数

【国家标准】 食品安全国家标准食品微生物学检验 霉菌和酵母计数
本网站 发布时间:
2024-06-20 06:37:27
- GB4789.15-2010
- 现行
标准号:
GB 4789.15-2010
标准名称:
食品安全国家标准食品微生物学检验 霉菌和酵母计数
标准类别:
国家标准(GB)
标准状态:
现行出版语种:
简体中文下载格式:
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部分标准内容:
中华人民共和国国家标准
GB4789.152010
食品安全国家标准
食品微生物学检验霉菌和酵母计数National food safety standardFood microbiological examination: Enumeration of moulds and yeasts2010-03-26发布
中华人民共和国卫生部
2010-06-01实施
GB4789.15—2010
本标准自实施之日起代替GB/T4789.15-2003《食品卫生微生物学检验霉菌和酵母计数》本标准与GB/T4789.15-2003相比,主要修改如下:-修改了范围;
修改了检验程序和操作步骤;
-修改了培养基和试剂;
一修改了设备和材料;
-修改了附录。
本标准的附录A为规范性附录,附录B为资料性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:GB4789.15-1984、GB4789.15-1994、GB/T4789.15-2003。
1范围
食品安全国家标准
食品微生物学检验
霉菌和酵计数
本标准规定了食品中霉菌和酵母菌(mouldsandyeasts)的计数方法。本标准适用于各类食品中霉菌和酵母菌的计数。2
设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:2.1冰箱:2℃~5℃。
恒温培养箱:28℃±1℃。
均质器。
恒温振荡器。
显微镜:10×~100×。
电子天平:感量0.1g。
无菌锥形瓶:容量500mL、250mL。2.8
无菌广口瓶:500mL。
2.9无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)。2.10无菌平皿:直径90mm。
2.11无菌试管:10mm×75mm
2.12无菌牛皮纸袋、塑料袋。
3培养基和试剂
3.1马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基:见附录A中A.1。3.2孟加拉红培养基:见附录A中A.2。检验程序
霉菌和酵母计数的检验程序见图1。GB4789.15—2010
5操作步骤
5.1样品的稀释
25g(mL)样品+225mL无菌蒸馏水,均质10倍系列稀释
选择2个~3个适宜稀释度的样品勾液,各取1mL分别加入无菌培养血内每皿中加入15mL~20mL马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基28℃±1℃
菌落计数
图1霉菌和酵母计数的检验程序
GB4789.15—2010
5.1.1固体和半固体样品:称取25g样品至盛有225mL灭菌蒸馏水的锥形瓶中,充分振摇,即为1:10稀释液。或放入盛有225mL无菌蒸馏水的均质袋中,用拍击式均质器拍打2min,制成1:10的样品勾液。
5.1.2液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL无菌蒸馏水的锥形瓶(可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品勾液。5.1.3取1mL1:10稀释液注入含有9mL无菌水的试管中,另换一支1mL无菌吸管反复吹吸,此液为1:100稀释液。
5.1.4按5.1.3操作程序,制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1次1mL无菌吸管。5.1.5根据对样品污染状况的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释的同时,每个稀释度分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平血内。同时分别取1mL样品稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。5.1.6.及时将15mL~20mL冷却至46℃C的马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平血,并转动平血使其混合均匀。5.2培养
待琼脂凝固后,将平板倒置,28℃±1℃培养5d,观察并记录。5.3菌落计数
GB4789.15—2010
肉眼观察,必要时可用放大镜,记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。以菌落形成单位(colonyformingunits,CFU)表示。
选取菌落数在10CFU~150CFU的平板,根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。菌落数应采用两个平板的平均数。6结果与报告
6.1计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数计算。6.1.2若所有平板上菌落数均大于150CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。6.1.3若所有平板上菌落数均小于10CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.1.4若所有稀释度平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算:如为原液,则以小于1计数。下载标准就来标准下载网
6.2报告
6.2.1菌落数在100以内时,按“四舍五入”原则修约,采用两位有效数字报告。6.2.2菌落数大于或等于100时,前3位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前2位数字,后面用0代替位数来表示结果;也可用10的指数形式来表示,此时也按“四舍五入原则修约,采用两位有效数字。
6.2.3称重取样以CFU/g为单位报告,体积取样以CFU/mL为单位报告,报告或分别报告霉菌和/或酵母数。
A.1马铃薯-葡萄糖-琼脂
A.1.1成分
马铃薯(去皮切块)
葡萄糖
氯霉素
蒸馏水
附录A
(规范性附录)
培养基和试剂
1000mL
GB4789.15—2010
将马铃薯去皮切块,加1000mL蒸馏水,煮沸10min~20min。用纱布过滤,补加蒸馏水至1000mL。加入葡萄糖和琼脂,加热溶化,分装后,121℃灭菌20min。倾注平板前,用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中
孟加拉红培养基
A.2.1成分
蛋白陈
葡萄糖
磷酸二氢钾
硫酸镁(无水)
孟加拉红
氯霉素
蒸馏水
1000mL
上述各成分加入蒸馏水中,加热溶化,补足蒸馏水至1000mL,分装后,121℃灭菌20min。倾注平板前,用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。4
附录B
(资料性附录)
霉菌直接镜检计数法
常用的为郝氏霉菌计测法,本方法适用于番茄酱罐头。B.1设备和材料
B.1.1折光仪。
显微镜。
郝氏计测玻片:具有标准计测室的特制玻片。B.1.3
B.1.4盖玻片。
测微器:具标准刻度的玻片。
B.2操作步骤
备用。
GB4789.15—2010
检样的制备:取定量检样,加蒸馏水稀释至折光指数为1.3447~1.3460(即浓度为7.9%~8.8%)2显微镜标准视野的校正:将显微镜按放大率90~125倍调节标准视野,使其直径为1.382mm。B.2.2
B.2.3涂片:洗净郝氏计测玻片,将制好的标准液,用玻璃棒均匀的摊布于计测室,以备观察B.2.4观测:将制好之载玻片放于显微镜标准视野下进行霉菌观测,一般每一检样观察50个视野,同检样应由两人进行观察。
B.2.5结果与计算:在标准视野下,发现有霉菌菌丝其长度超过标准视野(1.382mm)的1/6或三根菌丝总长度超过标准视野的1/6(即测微器的一格)时即为阳性(+),否则为阴性(-),按100个视野计,其中发现有霉菌菌丝体存在的视野数,即为霉菌的视野百分数。5
小提示:此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容,若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。
GB4789.152010
食品安全国家标准
食品微生物学检验霉菌和酵母计数National food safety standardFood microbiological examination: Enumeration of moulds and yeasts2010-03-26发布
中华人民共和国卫生部
2010-06-01实施
GB4789.15—2010
本标准自实施之日起代替GB/T4789.15-2003《食品卫生微生物学检验霉菌和酵母计数》本标准与GB/T4789.15-2003相比,主要修改如下:-修改了范围;
修改了检验程序和操作步骤;
-修改了培养基和试剂;
一修改了设备和材料;
-修改了附录。
本标准的附录A为规范性附录,附录B为资料性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:GB4789.15-1984、GB4789.15-1994、GB/T4789.15-2003。
1范围
食品安全国家标准
食品微生物学检验
霉菌和酵计数
本标准规定了食品中霉菌和酵母菌(mouldsandyeasts)的计数方法。本标准适用于各类食品中霉菌和酵母菌的计数。2
设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:2.1冰箱:2℃~5℃。
恒温培养箱:28℃±1℃。
均质器。
恒温振荡器。
显微镜:10×~100×。
电子天平:感量0.1g。
无菌锥形瓶:容量500mL、250mL。2.8
无菌广口瓶:500mL。
2.9无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)。2.10无菌平皿:直径90mm。
2.11无菌试管:10mm×75mm
2.12无菌牛皮纸袋、塑料袋。
3培养基和试剂
3.1马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基:见附录A中A.1。3.2孟加拉红培养基:见附录A中A.2。检验程序
霉菌和酵母计数的检验程序见图1。GB4789.15—2010
5操作步骤
5.1样品的稀释
25g(mL)样品+225mL无菌蒸馏水,均质10倍系列稀释
选择2个~3个适宜稀释度的样品勾液,各取1mL分别加入无菌培养血内每皿中加入15mL~20mL马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基28℃±1℃
菌落计数
图1霉菌和酵母计数的检验程序
GB4789.15—2010
5.1.1固体和半固体样品:称取25g样品至盛有225mL灭菌蒸馏水的锥形瓶中,充分振摇,即为1:10稀释液。或放入盛有225mL无菌蒸馏水的均质袋中,用拍击式均质器拍打2min,制成1:10的样品勾液。
5.1.2液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL无菌蒸馏水的锥形瓶(可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品勾液。5.1.3取1mL1:10稀释液注入含有9mL无菌水的试管中,另换一支1mL无菌吸管反复吹吸,此液为1:100稀释液。
5.1.4按5.1.3操作程序,制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1次1mL无菌吸管。5.1.5根据对样品污染状况的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释的同时,每个稀释度分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平血内。同时分别取1mL样品稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。5.1.6.及时将15mL~20mL冷却至46℃C的马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平血,并转动平血使其混合均匀。5.2培养
待琼脂凝固后,将平板倒置,28℃±1℃培养5d,观察并记录。5.3菌落计数
GB4789.15—2010
肉眼观察,必要时可用放大镜,记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。以菌落形成单位(colonyformingunits,CFU)表示。
选取菌落数在10CFU~150CFU的平板,根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。菌落数应采用两个平板的平均数。6结果与报告
6.1计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数计算。6.1.2若所有平板上菌落数均大于150CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。6.1.3若所有平板上菌落数均小于10CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.1.4若所有稀释度平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算:如为原液,则以小于1计数。下载标准就来标准下载网
6.2报告
6.2.1菌落数在100以内时,按“四舍五入”原则修约,采用两位有效数字报告。6.2.2菌落数大于或等于100时,前3位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前2位数字,后面用0代替位数来表示结果;也可用10的指数形式来表示,此时也按“四舍五入原则修约,采用两位有效数字。
6.2.3称重取样以CFU/g为单位报告,体积取样以CFU/mL为单位报告,报告或分别报告霉菌和/或酵母数。
A.1马铃薯-葡萄糖-琼脂
A.1.1成分
马铃薯(去皮切块)
葡萄糖
氯霉素
蒸馏水
附录A
(规范性附录)
培养基和试剂
1000mL
GB4789.15—2010
将马铃薯去皮切块,加1000mL蒸馏水,煮沸10min~20min。用纱布过滤,补加蒸馏水至1000mL。加入葡萄糖和琼脂,加热溶化,分装后,121℃灭菌20min。倾注平板前,用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中
孟加拉红培养基
A.2.1成分
蛋白陈
葡萄糖
磷酸二氢钾
硫酸镁(无水)
孟加拉红
氯霉素
蒸馏水
1000mL
上述各成分加入蒸馏水中,加热溶化,补足蒸馏水至1000mL,分装后,121℃灭菌20min。倾注平板前,用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。4
附录B
(资料性附录)
霉菌直接镜检计数法
常用的为郝氏霉菌计测法,本方法适用于番茄酱罐头。B.1设备和材料
B.1.1折光仪。
显微镜。
郝氏计测玻片:具有标准计测室的特制玻片。B.1.3
B.1.4盖玻片。
测微器:具标准刻度的玻片。
B.2操作步骤
备用。
GB4789.15—2010
检样的制备:取定量检样,加蒸馏水稀释至折光指数为1.3447~1.3460(即浓度为7.9%~8.8%)2显微镜标准视野的校正:将显微镜按放大率90~125倍调节标准视野,使其直径为1.382mm。B.2.2
B.2.3涂片:洗净郝氏计测玻片,将制好的标准液,用玻璃棒均匀的摊布于计测室,以备观察B.2.4观测:将制好之载玻片放于显微镜标准视野下进行霉菌观测,一般每一检样观察50个视野,同检样应由两人进行观察。
B.2.5结果与计算:在标准视野下,发现有霉菌菌丝其长度超过标准视野(1.382mm)的1/6或三根菌丝总长度超过标准视野的1/6(即测微器的一格)时即为阳性(+),否则为阴性(-),按100个视野计,其中发现有霉菌菌丝体存在的视野数,即为霉菌的视野百分数。5
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