【国家标准(GB)】 蜂蜜中19种喹诺酮类药物残留量的测定方法 液相色谱-质谱/质谱法

1CS 67.050
中华人民共和国国家标准
CB/T23412—2009
蜂蜜中19种喹诺酮类药物残留量的测定方法
液相色谱-质谱/质谱法
Determination of residues of 19 quinolones in honey-LC-MS/MS method
2009-03-28发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总周中国国家标准化管理委员会
2009-07-01实施
本标准的附录A.附录B、附录C和附录D为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局。GB/T 23412--2009
本标准主要起草人：沈崇铄、陈恋兰、丁涛、张晓燕、刘艳、张婧、黄姆，蒋原、陶宏锦、沈东旭。http://foodmate.net1范围
蜂蜜中19种喹诺酮类药物残留量的测定方法液相色谱-质谱/质谱法GB/T23412--2009
本标准规定了蜂蜜中恩诺沙星（简称ENR，下同），环丙沙星（简称CIP，下同），诺氟沙星（简称NOR，下同），氧氟沙星（简称OFL，下同），双氟沙星（简称DIF，下同），嗯喹酸（简称OXO，下同），氟甲唑（简称FLU，下同），沙拉沙星（简称SAR，下同），司帕沙星（简称SPA，下间），丹瓶沙星（简称DAN，下同），氟罗沙星（简称FLE，下同），马波沙星（简称MAR，下向），伊诺沙星（简称ENO，下同），奥比沙星（简称ORB，下向），吡哌酸（简称PIP，下同），培氟沙星（简称PEF，下同），洛美沙星（简称LOM，卜同），西诺沙星（简称CIN，下同）和萘啶酸（简称NAI，下同）19种唑诺酮残留量的液相色谱-质谱/质谱的测定方法。上述19种唑诺酮类药物中英文名称、结构式、CAS号和相对分子质量参见附录A：本标准适用于蜂蜜中喹诺酮类残留量的测定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注且期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682--2008,1SO3696：1987,MOD）3方法提要
试样加入内标后，氢氧化钠溶液溶解蜂蜜样品，离子化的喹诺酮类残留物经过阴离子交换固相萃取柱富集净化，用液相色谱-质谱/质谱法测定，梯度洗脱，内标法定量。4试剂和材料
除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一缴水。4.1甲醇：IIPLC级。
4.2氢氧化钠。
4.3甲酸(85%)。
4.4阴离子交换柱(PAX):60 mg，3tnL，或相当若。4.5同位素内标：NOR-D：纯度≥98%。4.6 ENR,CIP,NOR,OFL,DIF · HCI,SAR - HCI,SPA,DAN、OXO,FLU,FLE,MAR,ENO.ORB、PIP、PEF、I.OM、CIN和NAL.标准品：纯度99%。4.7诺稿类标准储备溶：1m/mL。雅确称敢适量的唑诺酮类棕雅品（4.6），用甲醇（4.1)配成1,0m/mL的标准诺备液，储备液必存在4冰箱中，可保存6个月，4.8东礼诺氟秒尾（V0R-D）内标储备薇：100以g/mL：你敢适量的NOR-L内标物（4.5），用中醇(4.1)配成100μg/mL储备被，储备被存在4℃冰箱中。4. 9 尔代诺氟沙星(NO)R-TD),)内标T作溶液;1 \g/miI.。取适量内标储备液(4. 8)用甲醇(4. 1)稀释成1 μg/mL工作溶液，内标工作溶液在4 ℃保存。4.10喹诺酮类标准工作溶：用甲醇-水(2十8,体积比)分别配成浓度范围为1ng/mL～60ng/mL标1
！
GB/T 23412—2009
准工作溶液，其中内标溶液浓度为50ng/ml，现配。4.11氢氧化钠溶液(0.1mo1/L)：取4g氢氧化钠.溶解于11.水中。4.12甲酸-甲醇溶液（5+95,体积比）：取5mL甲酸（4.3），溶解于95ml.甲醇（4.1)中。4.13中醇-水（2+8,体积比）：最取20tnL甲醇（1.1)丁80mL水中，混合均匀：5仪器和设备
5.1液相色谱-中联质谱仪：配有电喷雾离子源。5. 2分析天平-:感量 0. 0l g和 0. 1 mg各一台。5.3旋转蒸发仪。
5.4固相萃取装置。
5.5涡旋混匀器。
5. 6真空录:真空度不低于 80 kPa。5.7滤膜：有机系,0.15um。
5. 8 离心管:50 mL,具塞。
6试样的制备与保存
6.1试样的制备
将实验室样品搅拌均勾，分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品袋中，密封，并做[标记。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留含量变化。6.2试样的保存
将试样于冷状态下保存(4℃)。
7测定步骤
7.1提取
推确称取5 g(精确到0.01g)试样，置于50 mL.具塞离心管中,推确加入1 μg/mL内标溶液（4.9)50μL.加人5mL氢氢化钠溶液（4.11)，于涡旋混勾器上快速混合至蜂蜜完全溶解。依次用3mL甲醇和3mI水活化固相萃敢小柱（4.4），将梓品溶液转穆到小上，依次用水、甲醇淋洗，弃去上述滤液，用甲酸-甲醇溶（4.12)3ml洗脱。40℃水浴族转蒸发牟干，用中醇-水（4.13)定容1.0mL，过0.45μm的滤膜到进样瓶中，供液相色谱-质谱仪测定。7.2测定
7.2.1参考液相色谱条件
色谱柱：Cis.3μm,150mm×2.0mm(内径)或相当者；a）
b）流动相：甲醇十0.1%甲酸水溶液；流速：0.20mL/min;
梯度洗脱序;参见附录阝;
c）柱温：室温；
f）进样量：25mL.
7.2.2串联质谱条件
参见附录C，
7.3液相色谱-质谱/质谱测定
7.3.1定性测定
进行样品测定时，如果检出的质量色谱峰保留时间与标准样品致，并且在扣除背景后的样品谱图中，各定性离子的相对卡度与浓度接近的同样条件下得到的标谁溶液谱图相比，最大允许相对偏差不超2

过表1中规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表 1定性确证时相对离子丰度的最大允许相对偏差相对离子丰度
允许的机对假差
7. 3. 2定量测定
>20%～50%
210%~20%
GB/T234122009
标准工作溶液（4.10)在液相色谱-串联质谱设定条件下分别进样，以标准与内标物峰面积比值为纵坐标,工作溶液浓度(ng/mL)为横坐标,绘制标准工作曲线(1 ng/ml~60 ng/mL),用标准.作曲线对样品进行定量，样品溶液响应值均在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，其相应的标准物质和内标离子流色谱图参见附录D。
7.4空白试验
除不加入试样外,按上述(7.1~~7.3)步骤进行。8结果计募
结果按式(1)计算：
-样品中诺酮的浓度，单位为微克每下克(μg/kg)；c
样品中喹诺酮的峰面积与相应内标峰面积比值；喹诺酮的质量，单位为纳克（ng)；标准品中唑诺酮的峰面积与相应内标峰面积比值；样品质量，单位为克（g）。
9检测低限、回收率范围和精密度本标准中 19种唑诺酮类检测低限均为 1.0 ug/kg。蜂蜜中喹诺酮添加浓度及回收率范围(内标校正)的试验数据(n一10）：添加水半为1.0/kg,19种喹诺酮回收率范围为71%～118%添水平为2.0#g/kg，19种喹诺酮间收率范围为71%~117%：添水平为 5.0 ±g/kg,19种喹诺酮问收率范为 70%～117%在1.0μg/kg、2.0μg/kg和5.0μg/kg添加水平上，相对标准偏差（RSD)为4.2%~~10.9%。（1）
CB/T23412—2009
附录A
（资料性附录）
喹诺酮类药物及其代谢物中英文名称、化学结构式、CAS号和相对分子质量表A.1喹诺酮类药物及其代谢物中英文名称、化学结构式,CAS号和相对分子质量序号
中文名称/
英文名称/简称
愚诸沙星
EnrulloxHcin
环内沙星
Ciprafloxncin
诺氟沙垦
Norflaxacin
氧氟沙犀
Oflaxacin
Flumequine
噻噬酸
Oxolinic acit!
化学结构式
合品伴网httn：
相对分子
CAS号
93106-60-6
85721.33 1
70458 96-7
82419-36-1
42835·25-6
14698-29-4
中文名称/
英文名称/简称
双氟沙革盐酸盐
Diflaxacin HCl
砂拉钞星盐酸盐
Sarafloxacin HCl
司帕沙垦
Sparloxacin
丹诺莎墓
Danufluxacir
氟罗沙垦
Fleroxcain
马波沙垦
Marbulloxarin
表A.1（续）
化学结构式
http:/
wuwfoodmate.net
GB/T 23412—2009
相对分子
CAS号
98106 17 3
98105-99-8
110871-86-8
112398-08-0
79660-72-3bzxz.net
115550-35-1
GB/T 23412—2009
中文名称
英文名称/简称
伊诺沙革
Enoxacin
奥比莎星
Orbifloxacin
吡哌酸
Pipemnidic acid
培氟沙垦
Pefloxacin
洛美钞基
Lomefloxacin
西诺沙望
Cinoxucin
萘啶酸
Nalidixic acid
表A.1（续）
化学结构式
http:
rungfood
相对分子
CAS号
74011-58-8
113617-63-3
51940-41-4
70458-$2-3
98079-51-7
28657-850
389-08-2
时间/min
附录B
(资料性附录)
流动相梯度洗脱程序
流动相梯度洗脱程序
甲酶/%
http：//foodmate.netGB/T 23412—2009
0.1%甲酸水溶液/%
GB/T 23412—2009
附录C
（资料性谢录）
质谐/质谱条件及选择离子鑫数设定表离子源：电喷雾离子化电离源(ESI)：正离子监测；扫描方式：选择离子检测（SRM)：雾化气、鞘气为高纯氮气，碰接气为高纯氢气：喷雾电压：4100 V:
加热毛细管温度：350C。
选择离子参数设定表
测定物质
NOR-D,
母离子
定性离子
合品成伴网httn：/
Fonmatono
硅撞电压/
定蚤离子
ENR 360>316
CIP332>231
NOR 320>276
OF[,362>261
0XQ 262>216
FLU262>202
DF 400299
附蒙D
（资料性附录）
噻诺酮类药物及其内标离子流色谱图o
SAR 386>299
SPA 393>292
DAN 358>340
FLE370-326
MAK 363>72
FNO321>22
ORB 396>352
T/inint
图 D. 1喹诺酮类药物及其内标离子流色谱图http
GB/T 23412—2009
rEF 334>233
NAL 233>187
PIP 304>[89
1.MO 352>308
GN 263>217
NOR-D: 325>281
GB/T23412-2009
打印日期：2009年10月19月
中华人民共和
国家标雅
蜂蜜中19种喹诺酮类药物残留量的测定方法液相色谱-质谱/质谱法G/T 23412—2009
中国标准出版社出版发行
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