【国家标准(GB)】 蜂蜜中大环内酯类药物残留量测定 液相色谱-质谱/质谱法

1CS67.050
中华人民共和家标准
GB/T23408—2009
蜂蜜中大环内酯类药物残留量测定液相色谱-质谱/质谱法
Determination of macrolides residues in honeyLC-MS/MS method
2009-03-28发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-07-01实施
本标准的附录 A,附录 13 和附水C 为资料性附录本标准由中华人民共利[国国家质量监督检验检疫总局提出并归口，本标准起草单位：中华人民共和内江苏出人境检验检疫局。本标雅主要起草人：吴斌、徐锦忠、陈恋兰、刘艳、黄娟、魏云计、蒋原、間宏锦。全品伙伴网
GB/T23408—2009
1范围
蜂蜜中大环内酯类药物残留量测定液相色谱-质谱/质谱法
本标催规定了蜂蜜中大环内酯类药物残留量羧相色谱-质谱/质谱测定方法。GB/T23408—2009
木标准适用下蜂蜜中罗红霉素、替米考翠、泰乐菌素.北里猎素、交沙霉素,竹桃爵素、螺旋霉素I、红葬索残留量的测定：
2现范性引用文件
下列文件中的款道过本标准的引用们成为本标准的条款，凡是注旧提的引用文件，其随后所有的修改单（不化括韧误的内容或修订版均不适底于本标准，然而，鼓励根据本标谁透成协设的各方排究是否可使用这些文件的最新版木，从是不注日期的引用文件，其最新版本适用了-本标雅，6B/T6682分析实验室用水规格利试验方法（GB/T66822008，IS03696：1387，M0D）3方法提要
试格用融落液收-经固相获最柱净化，洗脱液浓缩定容层，用液相色谱质语/质谱仪测定，外湛定
4试剂和材料
除另有说明.所有试剂均为分析纯，水为GL/T6682规定的一级水，4. 1用醇:色谱纯
4.2碳酸钠，
4.3碳酸翁钠。
4.4甲醇-水（2+8，体积比）：景取20ml.甲醇（41.1)与80ml.水混泥仓。4.5甲醇-水(1+6,体积比):取10 mI. 醇(4.1)与60 ml.水混合。4.6桦米考星（Tilmicosin,(A号：108050 540)、螺璇素-I（Spiramycin-I,t.As号.8025 81 8)、竹桃等素（.endomyein，CAS号：7060-74-4）、红霉素（Erythuromycin，CAS号：111-07-8）、罗红莓素(Roxithromyein,CAS号：8021-831）泰乐菌素（Tylusin,CAS号：1405545）、北里蒋素（Kitaserycin，CAS号：805995-8)和交沙霉素(JosamyeiCAS号：16i846-24-5)标准物：纯度292%4.7大环内酷类药物标雅储备济液;l.Cmg/mL，准确称最(精确至0.1 mg)适尾的大环内酪类药物标准物质（4.6)，用中醇（4.1)配成1.0 g/mIl.的标准储备波。储务液贮行在1 冰箱中，叫使月2个月，
4.8空白样品提取液：用不含药物娥留的样晶，按照7.！制备空样品溶液。4.9大环内酯类药物标准工作济：而空兰样品提取液分别配成大坏内酯类药物浓度为5g/IIL10ng/mL、20ng/mL,50ng/ml.,100ng/mL，200ng/mL的标准工作溶液，现用现配4 100. 1 mal/1. 碳酸钠碳酸氢钠(pl19, 3)缓冲溶液:秘取5. 3g磁酸(4,2)和4. 2 g碳酸氢钠(4.3)溶于800 mL 水中,用稀氢氧化钠或稀盐酸调节 pH 为9.3,川水释至1000 ml-s4.11聚苯乙烯吡略烷酮填料固柑苯取柱或树当若：601g，3mL，使用前分别用3ml.醇租5tr:L水须处理，保持柱体湿润。
GB/T 23408—2009
4.12滤膜：0.45ut，水相
5仪器
5.1液相色潜-质谱仪（联四极杆）：配有电喷雾离了源，5.？分析天平：感量分别为.1ng和0.0lg。5.3自动浓缩仪或相当者。
5.4液体混匀器。
5.5真空泵：真空度大于或等下80 kPa。5.6离心律: ml其塞。
5.7度离心管：10 ml.。
6试样的制备与保存
6.1试样的制备
对无结昂的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置子不超过6℃的水浴中退热，振荡，待样品全部融化后锁勾，冷却至室温。分出0.5kg作为战样。制备好的试样置于样品瓶中，出密挝并标明标记。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化，6.2试样的保存
将试样了-常温状态下保存，
7测定步骤
7.1提取
称瑕g试样（精确到0.0l g)，置于50 ml.具塞离心管中,加人15 ml.0.1 tmol/l.碳酸钠-碳酸氢钠缓证溶液(4.lc)，士液体退均器l快速混台1 min.便诚样完全解，将溶以1ml/min在右的流速适过剧萃收柱（.11），待溶完全流出后，用！水洗离心誉并过，然后再用5tL中型-水(4. 1)洗柱,弃去全部淋出液。在 65 kPa 的负压下,减压抽于 10 min,最后而 InL 甲醇(4.1)洗脱,收洗脱液于: 10 m1.刻度离心管(5,7)中,于50 它用氮气吹干仪吹于,用甲醇-水(1. 5)定容至 1. 0 tmL,过0.45um的滤膜(4.12)到进样瓶中，供液相色谱-质谱仪测定。7.2测定
7.2.1液相色谱条件
a）色谱柱;Cia-μm,15C nim×2.lmrm(内径)或相当者；h)
流动相:0.1为甲酸+平醇.梯度参见附录A：c）流速：0.25nil/min；
d）柱温:室温：
e）进样量:2 μL.
7.2.2质谱条件
亨联四级杆质谱条件参见附录13。7.2.3液相色谐-质谱测定
大环内类药物标准工作溶液(4.9)在液相色谱质谱设定条件下分别逊样，以样品峰面积为纵坐标，工作落液浓度（ng/mI.)为横尘标，绘制点标准工作性线-用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中大环内醛类药物的响应值因碰在疫器测定的线范国内。在述色谱条件下，大环内药物参考保时间如表1所示。大环内瞪类药物标推物质色谱图参见附录（：2
h
7.2.4定性测定
药物名称
替米考早
竹桃霖素
泰乐菌索
北里霉素
红霉素
交沙暴Www.bzxZ.net
罗红霉蔡
表1儿种大环内醋类药物参保留时间保留折间/min
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进行样品测定时，如果检出的质量色谱峰保留时间与标准样品一致，并且在打除背景房的样品谱图中，各定性离·于的相对丰度与淤度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比，最大允许相对编差不超过表2中规定的范[,则可判断样品中存在对应的被测物。表 2 定性确证时相对离子丰度的最大允许相对偏差相对离子半度
允许的相对偏差
7.3平行试验
>20%~50%
-- 25%
按以1(7.1-~7.2)步骤，对向一试样过行平行试验测定，7.4空白试验
除不称取试释外,均按上述(7.1～7.2)步骤选行8结果计算
结果按式(1)计算：
(c,-m) XV
试样中被测组分残留罩，单位为微克每克（g/kg）；10~20%
回标雅曲线饰得的样液中药物的含量，单位为纳克每毫升（g/mL）；白标准曲线而得的空户试验中药物的含最,单位为纳克每离Ⅱ（ng/mL)；→一样品溶液定容体积，单位为毫升（IL)：m
样品溶液所代表试样的质量，单位为克（）。测定低限和回收率
9.1测定低限
本标准测定低限：罗红雍素。弊米考星、泰乐菌素、北里霉素、交沙霉紫为0.2g/kg.竹桃霉素、螺旋霉素-I为0.5 μg/kg,红霉素为0.1 μg/kg,9.2回收率
大环内酯类药物回收率数据见表3，3
GB/T 23408-2009
药物之恐
样米考异
螺旋醇素1
竹桃翠索
罗红指素
泰乐菌素
北甲霖業
交砂要素
表 3 大环内荫类药物的回收率数据恭加浓度/(μg/kg）
http:
回收率范率/兴
72. 3-- 10c. 5
75. 4--95.4
77.2--91.8
$4. 4~-1(11, 4
$4. 8~-109. 6
83. 8~-101. 0
81. 2-~ 16. 2
85. 1--1r1. 2
81. 1--1c6.0
62. 0--105.0
94. 2-~107. 6
75,0.~95. 1
97 0--110, c
86. 6 ~-98. 2
85. 3~-1(:1. 7
80. 3 -- 917. 7
77.2--.89.1
95. 6--204. 4
82, 0.~98.0
75. 6-~95.8
21. 3-~101. 9
91. 5~. 5
76. 6-- 100. F
83.2--110,2
时间/mn
附录A
（资料性附录）
液相色谱-质谱/质谱法与高效液相色谱法梯度洗脱条件表A. 1
液相色谱梯度洗脱程序
流速/(rrl./min)
http:/
rwwfood
甲醇/%
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5.1%而酸%
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附录Ｒ
(资料性附录）
液相色谱-质谱/质谱法仪器参数与监测离子表B.1
商了模式
源温度
气帝气
碰撞气
资雾电际
数据采集参数
质谱参数
ES1，正商子
鼠,0.C60 MPa
氮气.5. 0 1 /h
氯气.0.2Fa(t.5mror)
45co y
2八种大环内酷的定性离子对、定量离子对及碰撞气能量表B.2
替米考星
蝶凝舞紫-[
竹桃素
红市察
双红霉茶
泰乐菌素
北思群蔡
交沙霉款
定址离予对(m/z)
869. $/17.1
869. 5/656, 3
8-13. 5,171
843.5/540.1
688.1/:53
688.17541
734.3/:58
731.3/575
837.57.58
837.5/675.1
916.57.74
916. 5/772, 2
772.3/174
772.3/108
828.4/174
828.1/645.2
全品体伴网
定密于对(m/)
843.5/174
683.1/1:8
731. 3/1-8
837. 5/138
916.5/174
772. 3/174
8E8. 1/171
雌撞能垫
（资料性附录）
大环内酯类药物标准物质
选择离子流色谱图
保能时间：7.22
辞表游职
保询时：8.5
竹跳素
径国时：9.09
泰点素
保部时血：9.6
北限解素
保超所制：9.%
GB/T 23408—2009
保证时间：10. 13
交沙据素
保西时间：[052
罗红紫
大环内酯类药物标准物质选择离子流色谱图图C.1
http:
GB/T 23408-2009
F印H期：2009年7上241
合品伙伴网
华人民共和国
科家标雅
蜂密中大环内酯类药物残留量测定液相色谱-质谱/质谱法
GB/T 234282C09
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20C9年6月第版
又2009年6月第一次印刷
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