【国家标准(GB)】 饲料中氨苄青霉素的测定 高效液相色谱法

ICS 65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T23385—2009
饲料中氨芙青霉素的测定
高效液相色谱法
Determination of ampicillin in feed-High performance liquid chromatography2009-03-26发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会wwW.bzxz.Net
2009-07-01实施
本标准的附录A为资料性附录。
本标推由全国何料工业标推化技术委员会(SAC/TC 76)提出并归口。本标准起草单位：黑龙江省兽药饲料监察所本标准主要起草人：金慧然、叶建敏、范锅龙、郭文欣、陶娅江森、李春辉。CHINA
GB/T23385—2009
1范围
饲料中氨芙箐囊素的测定
高效液相色谱法
本标准规定了用高效液相色谱(HPLC)法测定饲料中氨青霉素的含量。GB/T 23385--2009
本标准适用于配合简料，浓缩简料和添加剂预混合饲料中氨芋书毒素含母的测定。本标准检山限为1.0mg/kg定量限为5.0mg/kg2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用永规格和试验方法（GB/T6682-2008IS03696.1987MODGB/T14699.1恂料采样(GB/T14699.1—2005,1SO 6497:2002,IDT)GB/T20195动物饲料试样的制备（GB/T20195—2006,ISO64981998,IDT）3原理
用磷酸盐缓冲液提取试样中的氮苄青霉索，高效液相色谱仪反相色谱系统分离，紫外检测器或二被管矩阵检测器在波长220 nm处进行定性、定量测定。4试剂和溶液
除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯试剂和符合GB/T6682规定的一级水。4.1乙腈：色谱纯。
4.2磷酸二氢钾溶液,c(KHzPO4)=0.02mol/L:准确称取2.72g磷酸二氢钾于1000mL容量瓶中，加水溶解稀释至刻度。
4.3提取液：磷酸二氢钾溶液（4.2)十乙腈（4.1)=19+1。4.4HPLC流动相：取920mL磷酸二氢钾溶液（4.2)和80mL乙睛（4.1)，混合均匀，通过0.45μm的溶剂微孔过滤膜过滤，使用前用超声波脱气。4.5氨苄青霉素标准贮备液：准确称取氨芒青霉素标准品（含量不少于86.5%)50mg（精确至0.00001g)，于50ml容量瓶中，用超纯水溶解并定容至刻魔，摇匀。淇溶液浓度为1.0mg/ml，贮于4℃~6℃冰箱中,有效期 2 d。
4.6氨卡青霉素标准工作液：准确移取氨节青霉素标准贮备液(4.5)适量，用水稀释成浓度分别为1.0μg/mL，5.0g/mL10.0μg/mL，25.0μg/mL.50.0μg/mL.100.0μg/mL，现用现配。5仪器和设备
5.1分析天平：感量为0.00001g和0.0001g各1台。5.2高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管矩阵检测器。5.3超声波清洗机。
5.4振荡器。
GB/T 23385—2009
离心机。
涡旋混合器。
微孔谜膜:0.45m。
试样制备
6.1按 GB/T 11699. 1 采样
6.2选取有代表性样品至少500g，按G13/T20195进行样品制备，粉碎，全部通过孔径为0.45mm的孔筛，充分混句，装入密闭容器中，避光保存，备用。7
分析步骤
样糖的1 于 10三中,人,取(. ),于娠7.1
试样溶液的制备
荡器上振荡提取 5 min/包2传入离心管中以 5 000 r/min 离心 10 mim取上清液过 0. 45 mm 的微孔滤膜，供高效液相色谱仪测
7.2色谱条件
色谱柱：C柱（心/250mm-内径为4.6mm，载度为5m）或类似分析生。柱温：室温.
抢测普或二极管矩阵检测器，检测波长220检测器：紫外
流动相：磷酸
甲溶液（4.2）
+乙腩（4
流速：1.0m
进样量：20吨
7.3HPLC 测定
按高效液相色谱仪说明书调整仅器参数。问高效被相色谱仪中注人氮芋青拿素标准工作液（1.6）及试液（7.1)，得到色增降面积响应值用标准系列进行单点或多点校准。8结果的计算与表
试料中氨青霉有
量X以质量分数
式中：
武样提取液测得的色的峰面积；A
为旁克每干克（mg/1），按式（1）计算：X,X
A，—氨下青霉素标准工作液测得的色谱峰面和标准工作液中氮毕青霉素含量单位为微克每毫升(/mL）V
加到试样中的提取液体积，单位为毫开m试样质量，单位为克（g）。
平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。9重复性
同一分析者对同-试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于10%。1)
附录A
（斑料性录）
氨芙素需囊标准样品色谢图
图A.1给出了氨青霉素高效液相色谱图，mAU
糖关膏零紊高效液相色满条件下标准样品色谱围GB/T23385--2009
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