【国家标准(GB)】 实验动物 配合饲料氨基酸的测定

GB/T 14924.10
本标准的全部技术内容为推荐性的。言
本标准从GB14924---1994《实验动物全价营养饲料》中分离出来，形成独立的标准，本标准规定了实验动物配合饲料中三种色氨酸的测定方法：第一法高效液相法：第二法荧光分光光度法；第法分光光度法。第一法为仲裁法。本标准及其配套标准白实施之日起，代替GB14924-1994
本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。本标准起草单位：中国实验动物学会。本标准主要起草人：张瑜、周瑞华、贾建斌、王国栋、刘素梅、郑陶、刘秀梅。本标准由国家科学技术部委托技术归口单位中国实验动物学会负责解释。本标准于1994年1月首次发布。
1范围
中华人民共和国国家标准
实验动物
配合饲料
氨基酸的测定
Laboratory animals-Formula feeds-Determination of amino acids本标准规定了实验动物配合饲料中氨基酸的测定方法。GB/T14924.10-2001
代替G13119241994
本标准适用于实验动物小鼠、大鼠、兔、豚鼠、地鼠、犬和猴的配合饲料及其原料中氨基酸的测定。2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。G3/T14965-1994食物中氨基酸的测定方法（G13/T15400-1994饲料中色氨酸的测定方法分光光度法GB3/T182462000饲料中氨基酸的测定3测定方法
3.1配合饲料中氨基酸的测定
按GB/T18246、GB/T14965中相关规定执行。3.2配含饲料中色氨酸的测定
3.2.1第一法色氨酸的测定
按GB/T15400-1994中的规定执行。3.2.2第二法荧光分光光度法
3.2.2.1原理
饲料中蛋白质在酸水解过程中，其色氨酸极易被水解。本法用碱水解蛋白质直接测定色氨酸的大然炭光。在蛋自质水解液中，只有色氨酸和氨酸可以检测到荧光。在pH为11时，色氨酸的荧光强度比酪氮酸大100倍，且两种氨基酸的荧光峰相差40nm以上。根据该特点，可在有大量酪氨酸存在下，检测色氨酸的含量。
3.2.2.2试剂
3.2.2.2.1氢氧化钠溶液（5mol/l.）：将20g氢氧化钠用0.5%可溶性淀粉溶解并定容至100ml-，临用前配制。
3.2.2.2.2尿素溶液（4mol/1.):调pH到11。3.2.2.2.350%盐酸：1份浓盐酸（优级纯）加1份重蒸水。3. 2. 2. 2. 4
溴百里酚蓝水溶液（0.5g/1)：0.1g溴百墨酚蓝指示剂，加0.1mo1/1.氢氧化钠溶液中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2001-08-29批准512
2002-05-01实施
GB/T 14924. 10.--2001
1.6mI..配成终浓度为0.5g/L的水溶液3.2.2.2.5高纯氮（含量99.99%）。3.2.2.2.6辛醇甲苯溶液：含1%辛醇。3.2.2.2.7色氨酸标准备液（1mg/ml）：准确称取色氨酸100mg.用0.005mol/l氮氧化钠溶液溶解并定容至100ml.
3.2.2.2.8色氨酸标准应用液（0.2mg/ml）：准确吸取色氨酸标准贮备液10ml于50ml.容量瓶中用水稀释至刻度，使用时现配。3.2.2.3仪器
荧光分光光度计、减压蒸发器、聚四氟乙烯管（5mL）。3.2.2.4样品处理
植物性样品粉碎后，贮于样品瓶中备用。3.2.2.5分析步骤bzxZ.net
3.2.2.5.1样品制备：准确称取含粗蛋白质约5mg的样品，置于聚四氟乙烯管中。加含可溶性淀粉5mol/I.氢氧化钠溶液1mI，加人一滴辛醇，将样品管放在一容器内。该容器外加冰、盐降温，抽真空1.3kFa（10mmHg）以下，保持15min。充氮气再减压，反复进行三次。将充氮减压容器密封，放人110C烘箱中、碱水解样品22h。样品冷却后加（1：1)盐酸0.7mL，用重馏水将样品分别洗人25ml.容量瓶中，用溴百里酚蓝作指示剂调pH至中性，用重蒸馏水定容至刻度。3.2.2.5.2测定：吸取样品液1ml，于10ml.带塞刻度试管中，加4mol/1.尿素溶液（pHl1）稀释至10ml。于激发波长280nm，发射波长360nm下测定荧光强度，从标准曲线上查出该样品中色氨酸的含鼠。
3.2.2.5.3标准曲线的绘制：取双份聚四氟乙烯试管分别取色氨酸标准应用液0.00.5，1.5.2.0ml.，1\于色氨酸含量0.0,0.1,0.3,0.4mg。按样品制备的同样步骤进行碱水解（3.3.1.5.1).以测出的标准系列的荧光强度为纵坐标，以色氨酸标准含量为横坐标，绘制标推曲线。3.2.2.6计算
见武(1)。
色氨酸含量，mg/100g；
从标准曲线查色氨酸含量，mg;；、稀释倍数；
m-样品质量.g。
3.2.2.7充许差
室内重复测定相对标准偏差≤10%。3.2.3第三法分光光度法
按GB/T15400规定执行。
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