【国家标准(GB)】 肉制品 胭脂红着色剂测定

中华人民共和国国家标准
GB/T9695.6-2008
代替GB/T9695.6—1988
肉制品
胭脂红着色剂测定
Meat products-Determination of artificial colour ponceau 4R2008-06-25发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
粒码防伪
2009-01-01实施
GB/T9695由以下部分组成：
GB/T9695.1《肉与肉制品
GB/T9695.2《肉与肉制品
-GB/T9695.3《肉与肉制品
-GB/T9695.4《肉与肉制品
-GB/T9695.5《肉与肉制品
游离脂肪含量的测定》；
脂肪酸测定》；
铁含量测定》；
总磷含量测定》；
pH测定》；
-GB/T9695.6《肉制品
脑脂红着色剂测定》；
GB/T9695.7《肉与肉制品
GB/T9695.8《肉与肉制品
GB/T9695.9《肉与肉制品
GB/T9695.10《肉与肉制品
GB/T9695.11《肉与肉制品
GB/T9695.13《肉与肉制品
GB/T9695.14《肉制品
总脂肪含量测定》；
氯化物含量测定》；
聚磷酸盐测定》；
六六六、滴滴递残留量测定》；氮含量测定》；
钙含量测定》；
淀粉含量测定》；
-GB/T9695.15《肉与肉制品
GB/T9695.17《肉与肉制品
GB/T9695.18《肉与肉制品
GB/T9695.19《肉与肉制品
-GB/T9695.20《肉与肉制品
GB/T9695.21《肉与肉制品
GB/T.9695.22《肉与肉制品
GB/T9695.23《肉与肉制品
GB/T9695.24《肉与肉制品
-GB/T9695.25《肉与肉制品
GB/T9695.26《肉与肉制品
GB/T9695.27《肉与肉制品
GB/T9695.28《肉与肉制品
水分含量测定》；
葡糖酸-8-内酯含量的测定》；
灰分测定》；
取样方法》；
锌的测定》；
镁含量测定》；
铜含量测定》；
L(-)-羟脯氨酸含量测定》；
胆固醇含量测定》；
维生素PP含量测定》；
维生素A含量测定》；
维生素B,含量测定》；
维生素B，含量测定》；
维生素C含量测定》；
GB/T9695.29《肉制品
-GB/T9695.30肉与肉制品
维生素E含量测定》；
GB/T9695.31《肉制品总糖含量测定》。本部分为GB/T9695的第6部分。
本部分代替GB/T9695.6—1988《肉制品胭脂红着色剂测定》。本部分与GB/T9695.6-1988相比主要变化如下：按照GB/T1.1--2000《标准化工作导则GB/T9695.6-2008
第1部分：标准的结构和编写规则》和GB/T20001.4—2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》进行了结构调整和文字修改；
一增加了规范性引用文件；
增加了方法的检出限；
GB/T9695.6—2008
用高效液相色谱法作为第一法、比色法作为第二法测定肉制品中的胭脂红着色剂；试剂、仪器设备、分析步骤、结果计算作相应的改动；“纯化”步骤中用无水乙醇十氨水十水溶液代替氨溶液作为解吸液；-用第10章“精密度”及其内容代替GB/T9695.6—1988的第9章“允许差”及其内容，增加了“试验报告”一章；
增加了资料性附录A。
本部分的附录A为资料性附录。
本部分由全国食品工业标准化技术委员会肉禽蛋制品分技术委员会提出并归口。本部分起草单位：中国商业联合会商业标准中心、国家加工食品质量监督检验中心（广州）、广州市产品质量监督检验所。
本部分主要起草人：侯向昶、王强、郭新东、罗海英、陈晓珍、黄孟基、吴玉鎏。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：GB/T9695.6—1988。
1范围
肉制品
胭脂红着色剂测定
GB/T9695的本部分规定了肉制品中胭脂红着色剂的测定方法GB/T9695.6--2008
本部分的第一法适用于肉制品中胭脂红着色剂的测定，第二法适用于仅含胭脂红着色剂的肉制品中胭脂红的测定。
本方法的检出限：高效液相色谱法：0.05mg/kg；比色法：0.4mg/kg。规范性引用文件
下列文件中的条款通过GB/T9695的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用引用文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。
GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法（neqISO3696:1987）第一法高效液相色谱法
3原理
试样中的胭脂红经试样脱脂、碱性溶液提取、沉淀蛋白质、聚酰胺粉吸附、无水乙醇十氨水十水解吸后，制成水溶液，过滤后用高效液相色谱仪测定。根据保留时间定性，外标法定量。4试剂和材料
如无特别说明，所用试剂均为分析纯。4.1水：符合GB/T6682—1992规定的二级水。4.2甲醇：色谱纯。
4.3甲酸。
4.4石油醚：沸程为30℃~60℃。4.5无水乙醇。
4.6钨酸钠。
4.7柠檬酸。
4.8乙酸铵。
4.9海砂：化学纯。先用盐酸溶液（1十10)煮沸15min，用水（4.1)洗至中性，再用50g/L氢氧化钠溶液煮15min，用水（4.1)洗至中性，于105℃干燥，贮于具塞瓶中。4.10硫酸溶液[1+9（体积比)]：量取10mL浓硫酸，在搅拌的同时缓慢加人到90mL水中。4.11钨酸钠溶液（c=100g/L）：称取10g钨酸钠，加水溶解，稀释至100mL。4.12乙酸铵溶液（c=0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵，加水溶解，稀释至1000mL。经0.45μm滤膜过滤。
4.13柠檬酸浴液(c=200g/L)：称取20g柠檬酸（C,H.O，·HO)，加水解，稀释至100mL4.14甲醇+甲酸[3+2（体积比）)]：量取60mL甲醇、40mL甲酸，混匀。4.15无水乙醇十氨水+水[7+2+1（体积比)]：量取70mL无水乙醇、20mL氨水、10mL水，混勾。1
GB/T9695.6—-2008
4.16pH=5的水：取100mL水，用柠檬酸溶液（4.13）调pH到5。4.17聚酰胺粉（尼龙6)：过200目筛。4.18脑脂红标准品：含量≥95%。4.19胭脂红标准储备液（c=1mg/mL）：称取按其纯度折算为100%质量的胭脂红标准品0.100g，置于100mL容量瓶中，用pH=5的水（4.16）溶解，并稀释至刻度。或使用有证标准溶液用水稀释而成。4.20胭脂红标准工作液：临用时将胭脂红标准储备液（4.19）用水稀释至所需浓度，经0.45μm滤膜过滤。
5仪器和设备
实验室常规仪器及下列仪器
5.1机械设备：用于试样的均质化。售包括高速旋转的切割机，或多孔板的乳径不超过4mm的绞肉机。素外检测器或二极管阵列检测器）。5.2高效液相色谱仪（配有）
5.3G3砂芯漏斗。
5.4恒温水浴锅。
5.5分析天平：可推
6取样
本部分不规定取样方法。取样境实验室所收到
至少取有代表
7试样制备
使用适当的机
少通过该仪器两次
将试样装入密
24h。
8分析步骤
8.1提取
品应具有代
样品200g。
械设备（5.1)将试
器里，防
GB/T9695.1
费或发生变化
过25℃。着使用绞肉机，试样至快进行分析购质化后最迟不超过称取试样5.0g~10.0
實入研体中，加海砂（4.9）少许，研磨混等，吹冷风使试样略为干燥，加人石油醚(4.4)50mL，搅拌，放置片，弃去石油醚，如此重复处理3次，除考脂肪，吹干。加人无水乙醇十氨水十水（4.15)溶液提取脂纸，通过砂芯漏头（5.3）抽滤提取液，反复多次，至提取液无色为止。收集全部提取液于250mL锥形瓶中。8.2沉淀蛋白质
在70℃水浴上浓缩提取液至10mL以下，依次加入1.0mL硫酸溶液（4.10)和1.0mL钨酸钠溶液（4.11)，混匀，继续70℃水浴加热5min，沉淀蛋白质。取下锥形瓶，冷却至室温，用滤纸过滤，用少量水洗涤滤纸，滤液收集于100mL烧杯中。8.3纯化
将上述滤液加热至70℃，将1.0g～1.5g聚酰胺粉（4.17)加少许水调成粥状，倒人试样溶液中，使色素完全被吸附。将吸附色素的聚酰胺粉全部转移到漏斗（5.3）中，抽滤，用70℃柠檬酸溶液（4.13)洗涤3次～5次，然后用甲醇+甲酸（4.14)洗涤3次5次，至洗出液无色为止，再用水洗至流出液呈中性。以上洗涤过程要搅拌。用无水乙醇+氨水十水（4.15)解吸3次～5次，每次5mL，收集解吸液，蒸发至近干，加水溶解并定容至10mL，经0.45μm滤膜过滤，滤液待测。2
8.4测定
液相色谱参考条件
色谱柱：Cig柱，150mm×4.6m（内径），5μmb)
流动相：甲醇和0.02mol/L乙酸铵溶液，梯度洗脱参数见表1；c
流速：1.0mL/min，
柱温：30℃；
检测波长：508nm；
进样量：20μ。
液相色谱梯度洗脱条件
时间/min
8:4.2液相色谱测定
根据试样溶液
标准工作液用产
内，参见附录A
8.5平行试验
脑脂红的含
相色谱仪测
果醇7%
选定峰面积相近的
活保留时间定维，标法
按以上步骤厨同
8.6空白试验
除不称取试
9计算
一试样进行平
的按上述步媒
按式(1)计算试箱
式中：
色剂的
一试样中胭脂红的合
GB/T9695.6—2008
02mol/L乙酸铵溶液/%
作液。分别將待测试样溶液（8.3)和金作维
红的响应值均应在的检测线性范围CXAXVX1000
AsXmX1000
，单位为毫克每千克（mg/ksgy；一标准工作液中胭脂红的浓度（8.4.2)，单位为毫克每升(mg/L)；A-一试样溶液中胭脂红的峰面积试样溶液最终定容的体积（8.3),单位为毫升（mL)；V
As—标准工作液中脑脂红的峰面积；一试样质量，单位为克（g）。
结果扣除空白值，
结果保留两位有效数字。
10精密度
（1）
同一分析者在同一实验室、采用相同的方法和相同的仪器、在短时间间隔内对同一样品独立测定两次。两次测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。3
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11，试验报告
试验报告应说明：
所有与识别样品有关的必需信息；取样方法；
依据本部分所采用的方法；
本部分未规定或未列为可选的所有操作，以及可能影响测试结果的其他因素；测试结果：
一如果检验了重复性，列出最终结果。第二法比色法
12原理
试样中的胭脂红经试样脱脂、碱性溶液提取、沉淀蛋白质、聚酰胺粉吸附、无水乙醇十氨水十水解吸后，制成水溶液，过滤后用分光光度计测定吸光度，外标法定量。13试剂和材料
13.1胭脂红标准工作液（c=100mg/L)：吸取胭脂红标准储备液（4.19）10.00mL，用水定容至100mL
13.2其他试剂和材料：同4.1～4.19。14
仪器和设备
实验室常规仪器及下列仪器。
14.1分光光度计。
14.2其他仪器和设备：同5.2～5.5。15取样
同第6章。
16试样制备
同第7章。www.bzxz.net
17分析步骤
17.1提取
同8.1。
17.2沉淀蛋白质
同8.2。
17.3纯化
同8.3。
18测定
吸取0mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL，8.00mL、10.00mL胭脂红标准工作液（13.1），分别置于50mL容量瓶中，用水定容，配制成浓度分别为0mg/L、4mg/L、8mg/L、12mg/L、16mg/L、20mg/L7
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的胭脂红标准工作液。用1cm比色杯，以标准空白调节零点，于波长510nm处测定标准工作液的吸光度。以脂红标准工作液的浓度为横坐标、相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。用1cm比色杯，以试剂空白调节零点，于波长510 nm处测定试样溶液的吸光度。根据试样溶液的吸光度，从标准曲线上查出胭脂红的相应浓度。
19分析结果的计算
试样中胭脂红的含量按式(2)计算：式中：
CxVx1000
mx1000
试样中胭脂红的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；一从标准曲线上查得的试样溶液中胭脂红的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V
一试样溶液最终定容的体积（8.3），单位为毫升（mL）；m—试样质量，单位为克（g)。
结果保留两位有效数字。
20精密度
同第10章。
试验报告
同第11章。
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响应值/μv
20000-
附录A
（资料性附录）
胭脂红标准溶液的液相色谱图
胭脂红标准溶液的液相色谱图
参考文献
[1]GB/T9695.19肉与肉制品取样方法GB/T9695.6-2008
GB/T9695.6-2008
中华人民共和
国家标准
肉制品胭脂红着色剂测定
GB/T9695.6-2008
中国标准出版社出版发行
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开本880×12301/16印张0.75字数14千字2008年9月第一版2008年9月第一次印刷*
书号：1550661-33232定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究
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