【国家标准(GB)】 饲料中硝基咪唑类药物的测定 液相色谱 串联质谱法

[CS 65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T21995—2008
饲料中硝基咪唑类药物的测定
液相色谱-串联质谱法
Delermination of nitroimidazoles in feeds-Liquid chromalography-tandem mass spectrometry method2008-06-17发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局数烈伪
中国国家标准化管理委员会
2008-10-01实施
本标雅的附录A为资料性附录。
本标准由中华人民共利国农业部提出，前言
本标准由全国饲料工业标雅化技术委员会归口。本标准起草单位：中国农业大学动物医学院本标证主要起草人：沈建忠、张素霞、程林丽、肖希龙、李晓薇、曹兴元、工战辉GB/T 21995—2008
1范围
饲料中硝基咪唑类药物的测定
液相色谱-串联质谱法
本标准规楚了饲料力硝其咪唑类药物含量的液相色潜-联质潜测定方法GB/T 21995—2008
本标雁适用于配介饲料、浓缩饲料和预泥合饲料中甲唑、济硝哒唑、二甲硝唑和帮硝唑含的测。
本标准的检测限：饲料中中硝唑、洛硝哒唑，一甲硝些利替硝唑沟为8Pg/kg。本标准的定量限：饲料中甲硝唑、洛醋哒唑、一甲硝噬和替硝唑均为25产g/kg。2规范性引用文件
下列义件中的条款通过本标谁的引用而成为本标准的条款。凡是注H期的引用文件,其随后所有的修教（不包插勤误的内容或修订版阅不适用于本标准，然而，鼓励根婚本标维这成卧改的各研究是香可使用这些文件的敏新版本。凡是不活山期的用文件，其最新版本适用上本标谁。（G13/T6682分析实验室用水规格和试验方法（(13/T66821992，ncnIS）3695：1987）GB/T4699.1何料采伴
GB/T2C195动物词糕试样哟制备
3方法原理
用乙酸乙酷提取战样中的硝基咪噬类药物,浓缩牟近干后，溶艇下0.1o1/磷酸中，经正己烷液液分配和MCX湖相萃取柱净化，用液相色谱-中联质谱法测定，以色谱保智时间和质谱碎片离子非同定性、外标法定量。
4试剂和材料
除非势有说明，在分析市设使用确认为分析纯的试剂和GB/工6682巾规定的级水4.1甲醇:色谱纯。
4.2乙脂：色谱纯。
4.3乙酸乙，
4.4磷酸。免费标准bzxz.net
4.5正已烧。
4.6甲酸：色谱纯、
MCx同相萃取柱：规格为65mg
微孔滤膜：规格为0.2μm1
甲硝唑（metruridazole）：纯度%4.9
格硝哒唑（ronidazole）：纯度含93%，—甲硝唑(dimetridazole)：纯度含98为替硝唑（tinidazole）：纯度984. 13
磷酸溶液（0.1 mal/1.）:取 3.4mL磷酸于1 L容量瓶中.用水定容至刻度，混勾，4. 14
固柏萃取杜淋洗液：氨水十水十甲醇=C.2十10十0,2。1
GB/T21995--2008
4.15固相萃坂柱洗脱液:氨水→水「甲醇=C,212+8,4.16硝其咪类药物混合标准贮备滋（1000 μg/mL）：称收甲硝（1.9）、咯硝哒唑（1、[C)、二甲硝唑(4.11)和替确唑(1,12)齐 C.1 乌(精确到0.0C0 1 g)于1C0 mI.容底瓶中用乙晴获解定容，一20 ℃:可保行3个H，
4.17硝基咪类药物混合标雅备液（200μg/mL）：移取1000μg/ml.硝基咪降类药物混合标雅购备液（4. 16)[C mL 于 50 nL容量矩r1,厢乙睛稀释定容。4 ℃可保存 1个月。4. 18标准T.作液;移取适量200) μg/rmL硝基迷碳类药物混合标准必备液（4.17).用Z睛稀释定容,配制成 6.6i,0. 05,0.1,0.5,1,5、16 μg/mL的标准工作液，4 ℃可保存 1 周，5仪器和设备
5.1实验室常用仪器、设备。
5.2筱柘色谱-嵌质谱联用仅：配电喷雾离子源：5.3分析天平：感量为0.01g和0.0001g。5. 4旋涡混合器，
5.5离心机。
5.6振荡器。
5.7旋转蒸发仪。
5.8周相萃取装罩。
6菜样与试样制备
按GB/T14699.1规定采集试样后，按（FB/T20195规定，取有代表性的样品！7. 1提取
称收 2 g(精确到0.0i g)试样于50 ml.离心管中，加 15 ml. Z酸乙酯,鸿动1 min，300 r/min 振荡30min,3 800 r/min离心10 min。收上清液丁=100 ml 鸡心瓶中，下层残渣用15 ml乙酸Z.酯重复提取一饮。合并两次上消液、为样品提取液。7.2净化
将样品提取液丁-35 ℃浓缩至近干，加 3G0 μL 乙酸乙醋,涡动 10 s,再加 4 mL 正已烷,涡动 30 s个部转移至10mL离心管中，往鸡心瓶再加1.5m磷酸溶液（4.13），满站1i=1.全部转移至间一离心筐中。盖密,手摇混合,5 00 I/min离心l0 min，吸取下层水柜于5 ml.试管，上层机相层1.5麟酸溶液（1.13)重复萃取-次，合并两次水相作为固相萃取上样液。将 MCX固相萃取杜安装于固相萃取装置上,依次用 2 ml.乙睛,2 mL磷酸游液(1. 13)活化。将固相萃取上样液加载到固相萃取柱上。依次用1mL磷酸溶液（4.13).2mL固相萃取柱洗涤液（1.14)淋洗,抽真率1 min，用2ml.固相萃收杜洗脱(1.15)洗脱，上样溶液和洗脱液的流速均控制在不超过1 mL/min，往洗脱液加20 μL 甲酸,混勺。50 ℃氮吹干后.用2 mL乙腈复溶,过0.2μm滤膜,供液相色谱-中联质谱仪测定。
7.3测定
7.3.1液相色谱条件
色谱托;x柱，长150 mm,内径2,1 mm,粒径5 μm，或相当者。2
流动栅：中醇一水，梯度洗脱,梯度洗脱条件见表1，表 1梯度洗脱条件
时间/min
流速:0. 2 mL/min。
柱温：室温。
进样量：1
7.3.2串联质谱条件
离子化模式：电喷雾电两，正离子扫描（ESI+）。离子源喷雾电压:1.5kV。
肉子源溢度：80。
脱溶剂温度.30C℃
毛细管电压:3V。
碰撞气：氟气。
监测模式:多反应监测
GB/T 21995—2008
甲醇/%
1种硝基咪唑类药物的定性离子对,定壁离子对、锥孔电压和碰撞能量，见表2，表 24 种硝基咪唑类药物的定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能称
落硝哒唑
二甲销
定性离了对(m/z)
201/140
201/55
172/128
172/82
142/96
248/120.7
7.3.3液相色谱-串联质谱测定
7.3.3.1定性测定
定趾高F对(m/2)
2C1/140
1/2/128
142/96
245/120.7
锥孔t压/V
邵撞能量/eV
根据试样液中药物的含量，选释峰而积相近的标准工作利样品溶液等体积参插进样，通过液相色谱保留时间与质谱选择离了洪同定性。样品中待测药物与标准物质的保留时间柜对偏差不大了2. 5为,而儿其选择离了的相对干度的差异不人于[C%。1种药物的标准溶液选择离了色谱图参见图A.1.
7. 3.3.2定量测定
分别取适量试择溶液和相应浓度的标准工作液，作单点校准或多点校推，以色谱峰面积积分值定量。标准工作液及试样液中药物的响应值均应在仪器检测的线性范围内，试样液进样过程中应参插标推丁作液，以使准确定量。
GH/T21995—2008
8结果计算
饲料中硝基咪唑类药物的含量X,以质量分数计让,数值以毫克每干克(mg/kg)表示，按式(1)算：X=rxVxn
—试样液中对应的硝基迷唑类药物的浓度，单位为微克每毫升(ug/mI);V.-试样总体积，单位为毫升(mL);n
稀释倍数；
试样质量最，单位为克（g）)。测定结果用平行测定后的算术平均值表示，保留三位有效数字。精密度
在重复性条件下完成的两个平行测定结果的相对偏差不人子20为。.-.(1 3
甲硝喉：
洛硝啮唑；
二甲懈噬：
荠硝唑。
附录A
（资料性附录）
标准溶液选择离子色谱阁
GB/T 21995-2008
15.0020.0.0m
25 ng/mL 硝基咪唑类药物标准溶液选择离子色谱图图A1
GB/T 21995-2008
华人民共园
国家标雅
饲料中硝基咪唑类药物的测定
液相色谱-串联质谱法
G3/T 210952008
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网址 spe. net. cn
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字数 15 千字
2008年8月第版
2008年8川第
次印别
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