【国家标准(GB)】 食品中沙门氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌O157及单核细胞增生李斯特氏菌的快速筛选检验 酶联免疫法

ICS 07. 100. 30
中华人民共和国国家标准
GB/T22429—2008
食品中沙门氏菌、
肠出血性大肠埃希氏菌0157及
单核细胞增生季斯特氏菌的
快速筛选检验
酶联免疫法
Rapid screening for Salmonella,Escherichia coli O157 and Listeria monocytogenes in foods-Enzyme-linked immunoassay method2008-10-19发布
中华入民共和国国家质量监督检验检疫总局防件
中国国家标准化管理委员会
2009-02-01实施
中华人民共
国家标准
食品中沙门氏菌
肠出血性大肠埃希氏菌0157及
单核细胞增生李斯特氏菌的
快速筛选检验酶联免疫法
GB/T 22429—2008
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学数 8 千学
2009年1月第·版
2009年1月第---次印刷
书号：155066-1-35221
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本标准的附录A为资料性附录。
本标推由全国食品工业标准化技术委员会提出并归口。GB/T22429—2008
本标准起草单位：杭州市质量技术监督检测院、中华人民共和国.1海出人境检验检疫局、上海食品药品检验所。
本标准主要起草人：肖海龙、顾鸣、芮昶、韩伟、徐伟东、鲍英、王颜。1范圈
食品中沙门氏菌、
肠出血性大肠埃希氏菌0157及
单核细胞增生李斯特氏菌的
快速筛选检验酶联免疫法
GB/T 22429—2008
本标准规定了食品中沙门氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌0157及单核细胞增生李斯特氏菌的酶联免疫法的检验步骤和判断原。
本标准适用于各种食品中沙门氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌0157及单核细胞增生李斯特氏荫的定性检验：
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过术标摊的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不他括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T4789.4食品.卫牛微牛物学检验沙门氏菌检验GB/T1789.6食品卫生微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验GB/T1789.282003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂GB/T1789.30食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验3方法提要
样品作增菌处理，增菌液经加热处现后移入包被特异性抗体(一抗)的固相容器内，使目标菌与一抗结合，洗去未结合的其他成分；加人特异性酶标抗体（二抗)，再次洗去米结合的其他成分；加人特定底物与之反应，生戒荧光化合物或有色化合物，通过检测荧光强度或暇光度，与参照值比较，得出检验结果。4设备和材料
4.1酶联免疫分析仪（VIDAS仪或类似产品\）。4.2冰箱:2℃~8℃。
4.3 恒温培养箱:30 ℃±1 ℃,36℃±1℃,42 ℃±1 ℃。4.4均质器。
4.5电子天平：量程0g~500g，感量0.1g。4.6旋涡混合器。
4.7恒溢水浴锅。
4.8灭菌设备。
5培养基、试剂和试剂盒
5.1缓冲蛋白陈水（RP）：按GB/T4789.28---2003中4.12的规定配制。1）VII)AS仪尽由法国梅里埃公提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标谁的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他产品其有相同的效果，则可使用这些等效的产品。1
CB/T22429--2008
5.2氯化镁孔雀绿增菌液（MM)：按GB/T4789.28·-2003中1.13的规定配制。5.3四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB)：按GB/T4789.282003中4.11的规定配制。5.4亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC)：按CB/T4789.28--2003中4.16的规定配制5.5改良肠道菌新生案素增菌液(mEC十n)：测法参见第A.1章。5.6Fraser「增菌液：制法参见 A.2.2.5。5.7Frascr 且增菌液:制法参见 A. 2. 2. 6。5.8盐酸吖啶黄溶液：制法参见A,2.2.1.5.9萘啶酮酸钠盐溶液:制法参见A.2.2.2。5.10沙门氏菌酶联免疫试剂盆
5.11肠出血性大肠埃希氏菌0157酶联免疫试剂盒。5.12单核细胞增生李斯特氏菌酶联免疫试剂盒。6检验
6.1沙门氏菌的检验
6.t.1前增菌和增菌：按GB/T4789.4中的规笼处理6.1.2增菌后处理：移取1mL增菌液到灭菌小试管中，于沸水中加热15min。剩余的增菌液于4℃保存，以便用于阳性确认，
6. 1.3取沙门底菌的酶联免疫试剂盒，于15℃~30℃的环境中放置30min。6.1.4取适量加热处理后的增菌液到试剂盒测试凡中，通过自动或手动操作，经过酶联免疫反应过程后，检测反应强度（荧光强度或吸光度），与参照值比较，得出检验结果。注：详细操作需根据所用仪器及试剂盒的说朗迹行。6. 2肠出血性大肠埃希氏菌 0157 的检验6.2. 1增菌：无菌操作取 25 g(mL)样品到均质装中,并向其中加人 225 ml. mFC十n,充分均质，了41 ℃±1 ℃培养 24 h±1 h，
6.2.2增菌后处理：按6.1.2给出的步骤处理。6. 2. 3 取肠出血性大肠埃希氏菌 0157 的酶联免疫试剂盒,于 15 ℃ ～ 30 ℃的环境中放置 30 min。6.2.4检验步按6.1.4给出的步骤处理。6.3单核细胞增生李斯特氏菌的检验6.3.1前增菌：无菌操作取25g(ml.)样品到均质袋中，并向其中加人225mLFraserI增菌液，充分均质,于 30 ℃±1 ℃ 培养 24 h±1 h。6.3.2增菌：移取1mLFrascrI增菌液(6.3.1)到9 ml.FrasetI增菌液中，于 30℃±1℃培养24 h±1 h。
6.3.3增菌后处理：按6.1.2给出的步骤处理。6.3.4取单核细胞增生李斯特氏菌的酶联免疫试剂盒，于15℃～30℃的环境中放置30min。6.3.5检验步骤接 6.1.4给山的步骤处理。7试剂盒控制
7.1选用新批号试剂盒时，应验证试剂盒的质量指标；使用时应严格按照试剂盒的要求设立试验对照。7.2选用试剂盒检验不同月标菌期间，应不定期选用相应的可溯源标准菌株进行过程控制。8结果报告
检验结果为阴性时，报告为末检出。检验结果为阳性时，应按GB/T4789.4.GB/T4789.6，GR/T4789.30或其他标准进行确证。2
附录A
(资料性附录）
培养基
A，1改良肠道菌新生霉素增菌液（mEC+n）A. 1.1成分
胰蛋白陈
3号肥盐
无水磷酸氢二钾
无水磷酸二氢钾
氯化钠
蒸馏水
A, 1,2制法
1 000 mL
GB/T 22429—2008
将上述成分溶于水后校正pII至6.9士1,分装后置121℃高压灭菌15min，取出后冷却至窄温，加人过滤的新牛霉素溶液，使其终浓度为20mg/L。A.2Fraser 增菌液
A.2.1成分
酪蛋白海消化物
动物组织酶消化物
牛肉浸膏
酵母浸膏
氯化钠
磷酸氨二钠
磷酸氢二钾
氯化锂
蒸馏水
A.2.2制法
1 000 mL
将上述成分置于50℃水浴中充分溶解，冷却后调pH至7.0～7.4，分装，121℃灭菌15minA, 2.2. 1盐酸吖啶黄溶液
盐酸吖啶黄
灭菌蒸馏水
振摇滤，充分溶解后过滤除菌，避光保存。A.2.2.2蒸啶酮酸钠盐溶液
禁魔酮酸
0.05mol/L氢氧化钠溶液
振摇混匀，充分溶解后过滤除菌。A.2.2.30.05mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠
GB/T22429-—2008
灭菌蒸馏水
振摇混勾，充分溶解后过滤除菌。A.2.2.4柠檬酸铁铵溶液
柠檬酸铁铵
灭菌蒸馏水
掠摇混勾，充分溶解后过滤除荫。A, 2,2. 5Fraser I 增菌液
在1000mLFrascr增菌液（A2.2)中加入：盐酸吖啶黄溶液
萘啶酮酸钠盐溶液
柠檬酸铁铵溶液
A. 2.2. 6Fraser I增菌液
在 1 000 mL Fraser 增凿液(A, 2. 2)中加人:盐酸吖啶黄溶液
萘啶酮酸钠盐溶液
无菊分装于 10 ml 大试管中 。GB/T 22429-2008
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