【国家标准(GB)】 大豆制品中尿素酶活性测定方法

1适用范围
中华人民共和国国家标准
大豆制品中尿素酶活性测定方法Method for the determination of ureaseactivity in soyabeanproductsGB/T8622—88
本标准适用于由大豆制得的产品和副产品中尿素酶活性的测定。本法可确认大豆制品的湿热处理程度。
2定义
本标准所指尿素酶活性定义如下：在30士0.5℃和pH7的条件下，每分钟每克大豆制品分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。3原理
将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合,在30℃保持30min,尿素酶催化尿素水解产生
氨的反应。用过量盐酸中和所产生的氨,再用氢氧化钠标准溶液回滴。4仪器设备免费标准下载网bzxz
4.1样品筛：孔径200um；
4.2酸度计：精度0.02pH,附有磁力搅拌器和滴定装置；4.3恒温水浴：可控温30士0.5℃：4.4试管：直径18mm，长150mm，有磨口塞子；4.5精密计时器；
4.6粉碎机：粉碎时应不生强热(例如球磨机);4.7分析天平：感量0.1mg:
4.8移液管：10mL。
5试剂和溶液
5.1尿素(GB696—77):分析纯
5.2磷酸氢二钠(GB1263—77):分析纯；5.3磷酸二氢钾GB1274—77):分析纯；5.4尿素缓冲溶液(pH6.9至7.0)：4.45g磷酸氢二钠(5.2)和3.40g磷酸二氢钾(5.3)溶于水并稀释至1000mL,再将30g尿素(5.1)溶在此缓冲溶液中,可保存1个月。5.5盐酸(GB622—77)：分析纯,0.1M溶液；5.6氢氧化钠(GB629—77)：分析纯,0.1M标准溶液,按GB601标准溶液制备方法的规定配制。
6试样的制备
用粉碎机(4.6)将10g试样粉碎，使之全部通过样品筛(4.1)。对特殊试样(水分或挥发物含量较高而无法粉碎的产品)应先在实验室温度下进行预干燥，再进行粉碎，当计算结果时应将干燥失重计算在内。
测定步骤
称取约0.2g已粉碎的试样，称准至0.1mg,转入试管(4.4)中（如活性很高只称0.05g试样）,移入10mL尿素缓冲溶液（5.4),立即盖好试管并剧烈摇动，马上置于30土0.5℃恒温水浴(4.3)中,准确计时保持30min。即刻移入10mL盐酸溶液(5.5),迅速冷却到20℃。将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，立即用氢氧化钠标准溶液(5.3)滴定至pH4.70。另取试管作空白试验.移入10mL尿素缓冲液（5.4）10mL盐酸溶液（5.5)。称取与上述试样量相当的试样,也称准至0.1mg,迅速加入此试管中。立即盖好试管并剧烈摇动。将试管置于30士0.5℃的恒温水浴，同样准确保持30min冷却至20℃,将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，并用氢氧化钠标准溶液(5.3)滴定至pH4.70。8测定结果的计算
8.1计算方法
以每分钟每克大豆制品释放氮的毫克量表示的尿素酶活性U,按下式计算：14×c(V0-V)
式中：C氢氧化钠标准溶液摩尔浓度,mol/L；-空白试验消耗氢氧化钠溶液体积，mL；VO
V—测定试样消耗氢氧化钠溶液的体积,mL；m试样质量，g。
注：若试样经粉碎前的预干燥处理时,则14×C(V0-V)
式中：S——预干燥时试样失重的百分率。8.2重复性
×(1 -S)
同一分析人员用相同方法，同时或连续两次测定结果之差不超过平均值的10%，以其算术平均值报告结果。
附加说明：
本标准由中国兽药监察所负责起草。中华人民共和国农牧渔业部1987—08—20批准1988—08—01实施
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