【国家标准(GB)】 饲料中盐酸多巴胺的测定高效液相色谱法

ICS65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T21036—2007
饲料中盐酸多巴胺的测定
高效液相色谱法
Determination of dopamine hydrochloride in feeds-High performance liquid chromatography2007-06-21发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2007-09-01实施
1范区
饲料中盐酸多巴胺的测定
高效液相色谱法
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GBT21036-2007
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GB/T21036——2007
5仪器和设备
5.1实验室常用仪器、设备。
5.2高效液相色谱仪（配有荧光检测器）。5.3分析天平。
5.4旋涡混合器。
5.5离心机。
5.6酸性氧化铝固相萃取柱500mg/根。6试样制备
按GB/T14699.1规定，取有代表性的样品1kg，四分法缩减取约200g，经粉碎，全部过0.45mm孔筛，混勾装人磨口瓶中备用。7分析步骤
7.1提取
称取一定量的试样（配合饲料2g，浓缩饲料1g，预混合饲料1g，准确至0.001g）置于50mL离心管中，加人10mL试样提取液（4.5），涡动1min，3500r/min离心5min。将上清液转人另一个50mL离心管中，再分别用5mL试样提取液重复提取两次，合并三次试样提取液。7.2配合饲料和浓缩饲料的净化
提取后立即将试样提取液置4℃冰箱中冷却。将酸性氧化铝固相萃取柱用5mL固相萃取柱活化液（4.6）活化。从4℃冰箱中取出试样提取液，全部加于固相萃取柱上，自然流过小柱。用10mL乙酸乙酯洗涤小柱，吹干。最后用20mL洗脱液（4.7）洗脱，保持流速不超过1mL/min，收集洗脱液，并尽可能吹干小柱。洗脱液经0.45μm滤膜过滤后用高效液相色谱分析。7.3预混合伺料的净化
立即向试样提取液中加人硫化钠溶液（4.3)2mL，涡动10s，3500r/min离心5min。上清液转移至另一离心管中。固相萃取柱净化方法同7.2。7.4测定
7.4.1液相色谱条件
色谱柱：Cs柱，长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或相当者。柱温：室温。
流动相：0.02%甲酸溶液(4.9)与甲醇(4.1)进行梯度洗脱，梯度洗脱条件详见表1。激发波长：290nm。
发射波长：330nm。
进样体积：10μL。
表1梯度洗脱条件
时间/
流速/
(mL/min)
0.02%甲酸/
甲醇/
7.4.2液相色谱测定
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GB/T21036—2007
分别取适量的标准工作液和试样溶液，按7.4.1列出的条件进行液相色谱分析测定。以标准工作液作单点或多点校准，并用色谱峰面积积分值定量。测定中应注意调整试样溶液的浓度，使盐酸多巴胺的积分值落在标准曲线的相应范围内，并在试样溶液分析间适当穿插标准工作液，以确保定量的准确性。所得盐酸多巴胺的色谱图见图1。400.00
2.004.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.0026.0028.0030.00(min)图15μg/mL标准溶液色谱图（保留时间3.5min）8结果计算与表述
饲料中盐酸多巴胺的含量X，以质量分数(mg/kg)表示，按式(1)计算：X-cVn
式中：
-试样液中对应的盐酸多巴胺的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；试样液总体积，单位为毫升(mL)；稀释倍数；
一饲料样品质量，单位为克（g）)。测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9精密度
（1）
同一实验室由同一操作人员使用同一台仪器完成的两个平行测定结果的相对偏差不大于15%。
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