【国家标准(GB)】 粮、油、菜中西维因残留量的测定方法

GB/T5009.21—1996
中华人民共和国国家标准
粮、油、菜中西维因残留量的测定方法Method for determination ofcarbarye (1-naphthyl N-methylcarbamate)residues incereals,oils and vegetablesGB/T5009.21—1996
1主题内容与适用范围
本标准规定了粮食、油、油料及蔬菜中西维因残留量的测定方法。本标准适用于粮食、油、油料及蔬菜中西维因残留量的测定。最低检测浓度：高效液相色谱法为0.5mg/kg。第一篇高效液相色谱法（第一法）2原理
含有西维因的粮食经提取、弗罗里硅土净化后，浓缩，定容作为测定溶液，取一定量注入高效准相色谱仪，经分离用紫外280nm检测器检测，与标准系列比较定量。
3试剂
3.1苯。
3.2乙睛。
3.3甲醇。
3.4二氯甲烷。
3.5无水硫酸钠：120℃干燥4h。3.6弗罗里硅土：120℃干燥4h，加入6%（m/m）蒸馅水，摇勺，放置过夜后使用。
3.7西维因标准溶液的配制：准确称取西维因标准品（99.3%），用甲醇溶解并配制成10.0mg/mL的标准储备液，贮于冰箱中，使用时用甲醇稀释成10μg/mL的标准使用液。
4仪器此内容来自标准下载网
4.1高效液相色谱仪：带紫外检测器。4.2溶剂过滤器。
4.3超声波仪：用于流动相脱气。4.4KD浓缩器或旋转式蒸发器。
5分析步骤
5.1提取
称取20.00g经粉碎过20目筛的粮食试样于250mL具塞锥形瓶中，准确加入50mL苯，浸泡过夜，次日振荡提取1h，提取液过滤。5.2净化
取直径1.5cm层析柱，先装脱脂棉少许（柱两头装2cm高无水硫酸钠，中间装6g弗罗时硅土），装好的柱先用20mL二氯甲烷预淋，弃去预淋液，然后将5～10mL样品提取液倒入层析柱，用70mL二氯甲烷少量多次淋洗，收集全中华人民共和国卫生部1996—076—19批准1996—09—01实施
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部淋洗液，用KD浓缩器进行浓缩至近干（水浴温度30℃），然后用甲醇溶解残余物，并定容至5mL。定容后用0.5μm滤纸借助于注射器过滤，取10μL滤液注入高效色谱进行分离、检测。5.3液相色谱测定参考条件
5.3.1色谱柱：不锈钢柱BONAPAKC183.9mm×30cm。5.3.2检测器：紫外检测器波长280Hm，灵敏度0.010.02。5.3.3流动相：乙睛-水（55+45）混合溶剂，流速1mL/min。5.3.4温度：柱温，检测器均为室温。5.4测定
吸取10μL标准使用液及样品液注入色谱仪，以保留时间定性，用标准曲线法定量。
6计算
A×1000
m,×V,/V×1000
式中：X
7其他
-粮食中西维因的含量，mg/kg；-从标准曲线求出样液中西维因的含量，ug：-样液定容的体积，mL；
-注入色谱的体积，mL；
-样品的质量，g。
西维因的液相色谱图，见下图。西维因
西维因标准色谱图
第二篇比色法
8原理
中华人民共和国卫生部1996—076—19批准（1）
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在碱性条件下，西维因水解成1-萘酚、二氧化碳和甲胺。在酸性条件下，1-萘酚和对硝基苯偶氮氟硼酸盐呈橙黄色，与标准系列比较定量。最低检出量10μg，测定样品相当于2g时，最低检出浓度为5mg/kg。9试剂
9.1二氯甲烷。
9.2丙酮。
乙醇（95%)。
冰乙酸。
无水硫酸钠。
石油醚：沸程30～60℃。
二甲基亚砜。
氯化钠。
硅藻土。
一缩二乙二醇溶液：一缩二乙二醇和二氯甲烷等体积混合。9. 11
丙酮（10%）。
凝固液：称取0.5g氯化铵，溶于400mL水中，加1mL磷酸（85%）。9.13
氢氧化钾-乙醇溶液（56g/L）：称取5.6g氢氧化钾，溶于10mL水中，加95%乙醇稀释在100mL，临用时配制。9.14氯化钠溶液（100g/L）。
9.15氢氧化钠溶液（20g/L）：称取2g氢氧化钠，加水溶解并稀释至100mL。9.16显色剂：称取50mg对硝基苯偶氮氟硼酸盐，溶于50mL冰乙酸-乙醇溶液（20%）中，临用时配制，过滤后使用。9.17西维因标准溶液：西维因结晶经无水乙醇两次重结晶纯化。熔点142~145℃。准确称取50.00mg西维因精制品，加二氯甲烷溶解，移入100mL容量瓶中，加二氯甲烷至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于西维因0.50mg。9.18西维因标准使用液：吸取西维因标准溶液1.0mL或2.0mL，置于100mL容量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0μg或10.0μg西维因。
10仪器
10.1分光光度计。
抽气泵。
10.3恒温水浴锅。
电动振荡器。
10.5脂肪提取器。
10.6离心机。
11操作方法
11.1提取
11.1.1粮食：样品经脱壳、磨粉，过20目筛并混匀。称取粮食试样10.00g，置150mL具塞锥形瓶中，加10g无水硫酸钠，混匀，加40mL二氯甲烷，在振荡器振摇0.5h，浸泡过夜，用滤纸过滤，弃去2～3mL初滤液，量取20.0ml滤液，置于50mL烧杯中，加3滴一缩二乙二醇溶液，放热水浴上挥干，如不太干，用吸耳球吹干。
11.1.2油及油料：
11.1.2.1比较纯净的油：称取5.00g混匀的样品，用50mL丙酮分次溶解中华人民共和国卫生部1996—076—19批准1996—09—01实施
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并洗入100mL分液漏斗中。
11.1.2.2毛油：称取2.00～5.00混匀的样品，用40mL石油醚分次溶解并洗入100mL分液漏斗中。
11.1.2.3棉籽：样品经脱壳、磨碎、混匀。称取10.00g试料装入滤纸筒中，置于60mL脂肪提取器中，用40mL石油醚提取8h，将提取液移入100mL分液漏斗中。
11.1.3蔬菜、水果：取可食部分洗净、晾干、切碎、混匀。称取25.00g试料加20g无水硫酸钠后，在乳钵中用力研碎，至植物组织全部研成泥状，再加10g无水硫酸钠继续研磨至干粉状，移至250mL具塞锥形瓶中，再用约5g无水硫酸钠将乳钵研洗干净，一并移入具塞锥形瓶中，用二氯甲烷将乳钵研洗二次，每次50mL，洗净粘在乳钵上的残物，洗液并入具塞锥形瓶中，在振荡器上振摇0.5h，浸泡过夜，用滤纸过滤，弃去23mL初滤液，吸取50.00mL滤液，置脂肪提取器的接收瓶内，加3滴一缩二乙二醇溶液，在水浴上蒸干溶剂至虹吸节内，弃去蒸出的二氯甲烷，直至蒸干，取下接收瓶，用吸耳球吹干残留溶剂。
11.2净化
11.2.1粮食：沿上述含提取物的烧杯壁，加入3mL丙酮，使残渣完全溶解后，加15mL凝固液，放置15min，并时时摇动。将垂熔漏斗下接抽滤器（或抽滤瓶），先铺一张滤纸，再铺一薄层约1g的硅藻土作为助滤剂，用丙酮（10%）洗涤多次后备用；弃去洗涤液。将样品凝固液倾入准备好的垂熔漏斗中，放置10min以上，慢速抽滤于下面的抽滤管内，抽干后，用滴管滴加约2mL丙酮（10%），洗净烧杯内壁，洗液倾入垂融漏斗中，浸泡1～2min后，再行抽干，如此重复2～3次。将滤液移至25mL容量瓶中，用少量丙酮（10%）洗涤抽滤管，洗液并入容量瓶中稀释至刻度，混匀。11.2.2油及油料：
11.2.2.1比较纯净的油：在上述含有油样的丙酮溶液的分液漏斗中，加10mL水，轻轻摇匀，静置1h，弃去分出的油层，将丙酮提取液放入离心管中，以2500r/min离心0.5h，用滴管吸取上层澄清丙酮提取液，置于另一分液漏斗中，加30mL二氯甲烷，振摇提取1min，放置1h，二氯甲烷层经盛有约10g无水硫酸钠的漏斗滤入脂肪提取器的接收瓶中。在二氯甲烷溶液内加3滴一缩二乙二醇溶液，在水浴上将二氯甲烷蒸发至虹吸节内，弃去蒸出的二氯甲烷。分液漏斗内的水层用10mL二氯甲烷振摇洗涤一次，经原无水硫酸钠漏斗滤入接收接收瓶中，继续蒸发至干，取下接收瓶，用吸耳球吹干残留溶剂。沿瓶壁加入3mL丙酮溶解残渣，以下按11.2.1自“加15mL凝固液”起依法操作。11.2.2.2毛油：在上述含有油样的石油醚溶液的分液漏斗中，加10mL二甲基亚砜，振摇1min，放置分层后，将二甲基亚分入另一分液漏斗中，石油醚层再用10mL二甲基亚砜振援一次，合并二次提取液，加10mL石油醚振摇洗涤二甲基亚砜提取液一次。将二甲基亚砜层移入盛有2g氯化钠和150mL水的分液漏斗中，弃去石油醚层。二甲基亚砜水溶液用二氯甲烷提取四次，每次25mL，合并二氯甲烷提取液，用7.5，5mL氢氧化钠溶液（20g/L）振摇提取二次，以洗去植物中的天然酚类物质，弃去洗涤液，二氯甲烷层再用氯化钠溶液（100g/L）洗涤二次，每次15mL，最后用15mL水洗涤一次。二氯甲烷层经无水硫酸钠脱水滤入脂肪提取器的接收瓶中，以下按11.2.2.1自“在二氯甲烷溶液内加3滴一缩二乙二醇溶液”起依法操作。中华人民共和国卫生部1996—076—19批准1996—09—01实施
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11.2.2.3棉籽：按11.2.2.2毛油中的方法净化。11.2.3蔬菜、水果：沿上述含有提取物的接收瓶瓶壁加入3mL丙酮，并转动以溶解瓶中提取物，加入10mL凝固液，再转动接收瓶，使凝固液布满内壁放置10min，并时时转动。以下按11.2.1自“将垂熔漏斗下接抽滤器（或抽滤瓶），先铺一张滤纸，再铺一薄层约1g的硅藻土作为助滤剂”起依法操作。12测定
吸取5.0mL西维因标准使用液（相当50μg西维因）或1.0mL西维因标准使用液（相当1.0Hg西维因，接近样品量），置于50mL烧杯中，加3滴一缩二乙二醇溶液，在热水浴上挥干，加3mL丙酮溶解，并加15mL凝固液，混匀，移入25mL容量瓶中，用丙酮（10%）洗涤烧杯，洗液并入容量瓶中并稀释至刻度，作为比色时的标准对照溶液。吸取上述定容后的试样溶液和标准溶液各5.0mL，分别置于具塞刻度试管中，各加2mL氢氧化钾-乙醇溶液（56g/L），混匀，放置2min后再各加1ml显色剂，混匀。以水调整零点，用1cm比色杯，于波长475nm处测吸光度。同时，另取两个试管，一管加入5mL定容后的标准溶液，另一管加入5mL定容后的样品溶液，用2mL乙醇代替氢氧化钾-乙醇溶液，按上述方法同样操作，于波长475nm处分别测吸光度，作为试剂空白和样品空白。13计算
X,=4-4x—C
A4-Asmz×5/251000
式中：X2-
-样品中西维因的含量，mg/kg；样品管的吸光度的读数；
-样品空白管的吸光度读数；
-标准溶液管的吸光度读数；
试剂空白管的吸光度读数；
-标准溶液中西维因含量，μg
-样品质量，g。
14允许差
粮食取样10g时，相对相差≤5%；油取样2～5g时，相对相差≤15%棉籽取样10g时，相对相差≤10%；水果、蔬菜取样25g时，相对相差≤5%。附加说明：
本标准由卫生部卫生监督司提出。…(2)
本标准第一法由浙江省粮食科学研究所负责起草：第二法由卫生部食品卫生监督检验所、中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所负责起草。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释，中华人民共和国卫生部1996—076—19批准1996—09—01实施
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