【地方标准】 草莓拟盘根腐病抗性鉴定评价技术规程

DB32/T5303—2025
草莓拟盘根腐病抗性鉴定评价技术规程
Technical code of practice for resistance identification of Neopestalotiopsis crown rot in strawberry

前言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意，本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江苏省农业农村厅提出并组织实施。本文件由江苏省园艺标准化技术委员会归口。本文件起草单位：江苏省农业科学院。本文件主要起草人：吴娥娇、庞夫花、陈晓东、乔玉山、耿中元、关玲、袁华招、王庆莲、蔡伟建、许林林、梁佳惠、赵密珍、王静、夏瑾。

1 范围
本文件规定了草莓拟盘根腐病抗性鉴定中的室内鉴定、田间鉴定、抗性结果、档案记录的技术要求。本文件适用于草莓种质资源拟盘根腐病抗性的鉴定与评价。

2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性的引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
NY/T2931 草莓种质资源描述规范
NY/T4519 热带作物种质资源抗病虫鉴定技术规程 咖啡炭疽病

3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件
3.1 草莓拟盘根腐病 (strawberry Neopestalotiopsis crown rot)
由新拟盘多毛孢属（Neopestalotiopsis spp.）病原真菌侵染所致，主要危害草莓根颈部、叶片及萼片等部位，受害植株矮化瘦弱、新叶失绿不对称、叶片现褐色或红褐色病斑等症状的病害。

4 室内鉴定
4.1 病原菌分离与纯化
田间采集典型发病植株，记录采集地点、品种、时间及病害症状。采用常规组织分离法从发病植株的根领部、叶片等病健交界处分离病原菌，对分离物进行单孢分离纯化和致病性测定，经形态学和分子鉴定，确认为草莓拟盘根腐病菌。
4.2 病原菌回接
将纯化培养7d～10d且经镜检后的病原菌制成浓度为1×10⁶个/mL的孢子悬浮液，回接到草莓离体叶片上，开展致病性测定与科赫氏法则验证。叶片和接种体的制备分别按照NY/T2931和NY/T4519的规定进行。
4.3 病原菌保存
纯化后的病原菌采用滤纸片干燥法，于-40℃低温冰箱中长期保存。
4.4 病原菌活化
将保存的病原菌接种至PDA培养基中，在26℃恒温避光条件下培养7d，待菌落长至培养面积的80%时，用无菌打孔器在菌落边缘制取直径5mm的菌饼，将菌饼（菌丝面朝下）接种于PDA培养基中央，培养备用。
4.5 离体叶片接种
取大小、叶龄（约2周）一致的新鲜健康草莓叶片，置于含1%琼脂培养基的培养皿中，每皿放2片（叶背朝上），用昆虫针在叶背刺一直径约0.5mm的孔。从活化7d的菌落边缘取直径5mm菌饼，倒置接种于伤孔处，每处理3皿（共6片叶），以无菌PDA菌饼为对照。于温度26℃、相对湿度95%、光16h/暗8h条件下培养48h后将叶片翻为正面，用刻度尺采用十字交叉法测量病斑与叶片面积。
4.6 抗性水平分析
基于病斑面积占叶片面积的百分比，将离体叶片拟盘根腐病抗性水平划分为6个等级，如表1所示。
表1 离体叶片拟盘根腐病抗性评价
抗性等级 | 抗性描述 | 病斑面积占叶片面积%
免疫(D) | 免疫 | 叶片无病斑
高抗(HR) | 高抗 | 0 < 病斑面积 $le$ 10%
抗病(R) | 抗病 | 10% < 病斑面积 $le$ 25%
中抗(MR) | 中抗 | 25% < 病斑面积 $le$ 50%
感病(S) | 感病 | 50% < 病斑面积 $le$ 75%
高感(HS) | 高感 | 病斑面积 > 75%

5 田间鉴定
5.1 病情调查
5.1.1 调查时间
草莓拟盘根腐病离体叶片抗性评价从草莓定植2周后开始至结果后期结束，每2周调查一次。
5.1.2 调查地选择
选择当地曾有该病发生的典型田块1个～3个，定为系统调查点。自首次发现该病发生后，至结果后期结束，可进行2次～3次调查，每个调查田块所在区域至少调查20个小区（面积 $ge$ 10m²，草莓植株30株以上)。