【地方标准】 白菜品种纯度及真实性分子检测方法

DB11/T829-2011 白菜品种纯度及真实性分子检测方法 前言 本标准按照B/T 1.1-2009的规则起草，由北京市农业局提出，由北京市农业标准化技术委员会归口组织实施，起草单位为北京市种子管理站。主要起草人包括田雷、赵山普、贾希海、赵青春、彭瑞迪、王辉、福德平、高勇、张连平、黄寰。 1 范围 本标准规定了结球白菜和不结球白菜种子品种纯度及真实性的SSR、ISSR分子标记检测方法及检测结果判定标准，适用于常规种子、杂交种子及其亲本的品种纯度和真实性鉴定。 2 规范性引用文件 - GB/T 3543.4 农作物种子检验规程 发芽试验 - GB/T 3543.5 农作物种子检验规程 真实性和品种纯度鉴定 3 术语和定义 3.1 SSR标记（Simple Sequence Repeat Marker）：SSR简单重复序列，又称短串联重复序列或微卫星序列，由1~5bp短核苷酸序列串联组成，分布于基因组内的重复序列。 3.2 ISSR标记（Inter Simple Sequence Repeat Marker）：内部简单重复序列，利用包含重复序列并在3'或5'端锚定的单寡聚核苷酸引物对基因组进行扩增的标记系统。 3.3 聚合酶链式反应（PCR）：在体外扩增DNA序列的技术，模板DNA经高温变性为单链，在DNA聚合酶作用下，通过引物退火与延伸循环实现目标片段的几何倍数扩增。 3.4 引物（Primer）：DNA合成反应中提供3'端起点的多核苷酸单链，可特异结合DNA模板的特定区域。 4 原理 SSR和ISSR广泛分布于白菜基因组的不同位置，不同品种的重复序列存在遗传差异，通过设计相应的SSR和ISSR引物，利用PCR技术扩增，并通过电泳和染色形成品种指纹图谱，用于品种纯度和真实性鉴定。 5 仪器设备及耗材 5.1 仪器设备 5.1.1 天平（感量0.0001g、0.001g、0.01g、0.1g） 5.1.2 水浴锅（0℃~100℃） 5.1.3 微波炉（额定功率800W） 5.1.4 酸度计 5.1.5 磁力搅拌器 5.1.6 高速台式离心机（12000 r/min） 5.1.7 高压灭菌锅 5.1.8 冰箱（最低温度-20℃） 5.1.9 微量加样枪（0.5μL~10μL，20μL~200μL，100μL~1000μL） 5.1.10 PCR扩增仪 5.1.11 紫外成像仪 5.1.12 紫外分光光度计