【地方标准】 食用菌菌种活力检测技术规范

ICS 65.020 B60 DB35 福建省地方标准 DB35/T 1233—2011 食用菌菌种活力检测技术规范 Measurement technical regulation of mushroom spawn activity 2011-12-31 发布 福建省质量技术监督局 发布 2012-03-15 实施 前言 DB35/T 1233—2011 本标准按照 GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》的起草规则编写。 本标准由福建省农业厅提出并归口。 本标准起草单位：福建农林大学、福建省食用菌技术推广总站、福建省农业科学院。 本标准主要起草人：邓优锦、廖剑华、江玉姬、上官舟建、朱坚、肖淑霞、黄志龙、张金文、阮淑珊、吴小平、温志强、谢宝贵。 1 范围 本标准规定了食用菌菌种活力检测技术规范的感官评定、细胞核数量检测、温度胁迫萌发检测、菌丝再生能力检测等评价菌种活力的方法。 本标准适用于香菇、毛木耳、黑木耳、金针菇、杏鲍菇、真姬菇、双孢蘑菇、草菇、鸡腿菇的母种、原种和栽培种。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 12728-2006 食用菌术语 GB/T 19171 双孢蘑菇菌种 GB/T 23599 草菇菌种 NY/T 1846-2010 食用菌菌种检验规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 菌种活力 菌种的生长、繁殖能力。 3.2 高温胁迫 过高温度对生物体所处的生存状态产生的生理机能代谢下降。 3.3 插片法 采用平皿培养菌丝，在菌丝尚未萌发时，将灭菌的盖玻片与培养基表面成30°角倾斜插入距菌种块约1 cm处的培养基中，待菌丝生长至盖玻片约1/3处时，拔出盖玻片，反面放置于载玻片上观察，从而获得可在显微镜下观察菌丝生长脉络的一种真菌菌丝显微制片方法。 3.4 高温抑制线 食用菌菌种在生产过程中受高温不良影响，培养物部分区域出现发黄、发暗或菌丝变稀弱的现象，与正常菌丝之间形成的明显界线。 3.5 壁料分离 菌种培养基因收缩而导致与试管壁、菌种瓶或塑料袋等容器壁分开的现象。 3.6 最高温度 食（药）用菌生长发育温度范围的上限。 4 方法与步骤 4.1 抽样 按 NY/T 1846-2010 中 5.1 和 5.2 的规定进行抽样。 4.2 感官评定 4.2.1 母种 母种出现下列情况之一，判定菌种活力已减弱： a）斜面培养基干缩，出现质壁分离； b）菌丝明显变色或出现暗斑。 4.2.2 原种与栽培种 原种与栽培种出现下列情况之一，判定菌种活力已减弱： a）菌丝明显变色，菌种变软、大量吐黄水； b）出现壁料分离； c）产生高温抑制线； d）菌种明显失水变轻。 4.3 细胞核数量检测 4.3.1 适宜的食用菌品种 本检测适用于草菇。 4.3.2 细胞核数量测定 采用插片法培养获取待观察菌丝。在无菌条件下，在距待测母种接种块1 cm～2 cm处，或原种、栽培种的中央位置，挑取大小约0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm的菌丝块，转接至PDA培养基中央（当待测菌种为母种时，接种块的菌丝面朝上），于菌种最适宜温度下培养。取出带菌丝的盖玻片，滴加DAPI（4,6-联咪-2-苯基吲哚二盐酸盐）染料于载玻片上，并反向盖上盖玻片，在荧光显微镜下随机选取50个视野观察，每个视野随机选取1个完整细胞进行细胞核数量测定，并做好记录。 4.3.3 活力评价 4.3.3.1 测定正常菌种菌丝细胞的平均细胞核数量，作为参考值。 4.3.3.2 重复计数3次，并与正常菌种进行统计分析，如待测菌种菌丝细胞的平均细胞核数量显著低于正常菌种，则说明该菌种活力减弱。 4.4 高温胁迫萌发检测 4.4.1 处理温度的设定 处理温度为最高温度减去2 ℃。 4.4.2 实验步骤 4.4.2.1 取待测菌种，挑取大小约0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm的菌丝块，转接至PDA平板培养基中央，于处理温度下放置1小时。 4.4.2.2 母种取样位置为距接种块1 cm～2 cm处，原种或栽培种为菌种瓶中央位置；若为母种，接种块的菌丝面朝上。 4.4.2.3 将处理后的平板置于菌株最适培养温度下培养，每隔2小时～3小时观察一次。 4.4.3 活力评价 对待测菌种测定3次，每次3个重复，若萌发时间比正常菌种延长2倍以上，则判定待测菌种活力减弱。 4.5 菌丝再生能力检测 4.5.1 栽培基质中菌丝再生能力检测 （原文后续内容缺失）