【地方标准】 几丁寡糖含量的测定 液相色谱法

ICS 71.040.01 A43 DB21 辽宁省地方标准 DB21/T 2752—2017 几丁寡糖含量的测定 液相色谱法 2017-02-23 发布 辽宁省质量技术监督局 2017-03-23 实施 前言 本标准依据 GB/T 1.1—2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由中国科学院大连化学物理研究所提出。 本标准由大连市质量技术监督局归口。 本标准起草单位：中国科学院大连化学物理研究所。 本标准主要起草人：陈玮、赵勇、尹恒。 1 范围 本标准规定了用液相色谱法测定几丁寡糖含量的原理、仪器和设备、试剂和材料、测定步骤、结果计算和重复性。 本标准适用于几丁寡糖含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 原理 几丁寡糖溶液在波长195 nm处有最大吸收峰，在一定范围内，其峰面积与几丁寡糖浓度成正比关系。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。 4.2 分析天平：感量0.0001 g。 4.3 滤膜：聚四氟乙烯膜，0.2 μm。 4.4 恒温干燥箱。 5 试剂和材料 5.1 水：符合 GB/T 6682 规定的一级水。 5.2 乙腈：液相色谱级。 5.3 乙腈溶液：取700 mL乙腈与300 mL水混合而成。 5.4 几丁寡糖标准品：纯度≥90%，聚合度n（n=2～6），结构式见附录A。 5.5 标准溶液：称取25.0 mg经105℃干燥4 h的几丁寡糖标准品于烧杯中，加入25.0 mL乙腈溶液溶解后，转移至50 mL容量瓶，用乙腈溶液定容至刻度。 6 测定步骤 6.1 样品溶液制备 样品在105℃干燥4 h后，称取25.0 mg样品置于50 mL烧杯中，加入25.0 mL乙腈溶液振荡溶解，转移至50 mL容量瓶并定容，摇匀后经0.2 μm滤膜过滤备用。 6.2 色谱条件 a) 流动相：乙腈溶液； b) 色谱柱：Amide-80，粒径5 μm，250 mm×4.6 mm； c) 流速：1.0 mL/min； d) 检测波长：195 nm； e) 进样量：10 μL。 6.3 色谱测定 分别将标准溶液和样品溶液注入液相色谱仪测定，记录峰面积。 7 结果计算 几丁寡糖含量按标准峰面积与样品峰面积比例计算，公式如下： W = (Ax × m2) / (A × m1) × 100% 式中： Ax——样品溶液峰面积； A——标准溶液峰面积； m1——样品质量（mg）； m2——标准品质量（mg）； W——几丁寡糖含量（%）。 8 重复性 同一实验室同一操作者进行的三个平行测定结果，相对标准偏差不大于5%，取算术平均值作为最终结果。 附录A（资料性附录）几丁寡糖化学结构式 （略）