【地方标准】 玉米穗腐病抗源鉴定及评价技术规程

ICS65.020.20 CCSB16 DB23 黑龙江省 地方标准 DB23/T38962024 玉米穗腐病抗源鉴定及评价技术规程地方标准信息服务平台 2024-12-30发布 黑龙江省市场监督管理局 2025-01-29实施 发布 前言 DB23/T3896—2024 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由黑龙江省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：黑龙江省农业科学院玉米研究所、东北农业大学、中国农业科学院作物科学研究所。 本文件主要起草人：启光辉、杨剑飞、朴琳、李永刚、李春辉、李国良、王明泉、付立新、胡少新、王志国。 地方标准信息服务平台 1范围 DB23/T3896—2024 玉米穗腐病抗源鉴定及评价技术规程本文件规定了玉米穗腐病抗源鉴定及评价技术的接种体制备、抗病性鉴定圃设置、接种、病情调查和抗病性评价等要求 本文件适用于玉米种质资源对玉米镶抱穗腐病的田间抗性鉴定和评价2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅注日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4404.1粮食作物种子第1部分：禾谷类NY/T1248.8玉米抗病虫性鉴定技术规范第8部分：镰孢穗腐病DB23/T2154玉米机械化籽粒收获栽培技术规程3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 玉米穗腐病抗源鉴定identificationofresistancesourcetomaizeearrot利用玉米禾谷镰包（Fusariumgraminearum）、拟轮枝镰孢（Fverticillioides）、亚粘团镶孢（F.subglutn.crs）层出镰孢（F.proliferatum）穗腐病混合菌进行人工接种，鉴定挖标准信息服 掘抗穗腐病种质资源。 4接种体制备 4.1镰孢病原菌分离与致病力测定4.1.1病原菌分离 取发生穗腐病的玉米籽粒，置于75%的酒精中浸泡2s~3s，取！后置干浓度为1.5%的次氯酸钠中浸泡3min~5min，再经无菌水换洗3次，晾干后用无菌剪力片中间剪开后将其中一块组织转移至PDA平板培养基上，置于25℃C27C环境中，黑暗培养3d后挑取病原菌至试管中保存。 4.1.2致病力测定 采用根部接种法根据柯赫氏法则验证所分离的镰孢菌为穗腐病原菌，并确定其具有一定的致病能力。 3 4.2镰孢病原菌鉴定 DB23/T3896—2024 采用形态学和分子生物学技术确定目标病原菌的所属种为禾谷镰孢、拟轮枝镰孢、亚粘团镰抱、层出镰抱。具体鉴定方法按NY/T1248.8的规定执行。4.3病原菌的配制 4.3.1培养基的制备 将高粱粒（125g）在沸水中煮20min，然后转移到250mL三角瓶中，121C湿热灭菌45min，完成高粱粒培养基的制备。按照NY/T1248.8提供的方法制备马铃薯葡萄糖琼脂培养基（Potatodextroseagarmedium,PDA) 4.3.2禾谷镰孢孢子悬浮液的配制将禾谷镰孢转移至PDA培养基上培养，挑取3个～5个扩繁的禾谷镰孢的菌碟转移到0.9%~1.5%的无菌盐水中，每100mL三角瓶装液量为15ml，28℃~30℃、可见光150lx~200lx条件下摇床震荡（150rpm~180rpm）培养96h~120h，双层纱布过滤后用血球计数法调整孢子悬浮液浓度为2×10°孢子/mL，4℃C条件下可保存96h。4.3.3拟轮枝镰孢孢子悬浮液的配制将PDA培养基扩繁7d后的拟轮枝镰孢5个菌碟转移至装有无菌高梁粒的三角瓶中，并在26℃、避光条件下培养5d，每天摇晃一次三角瓶，然后用无菌水冲洗带菌高梁粒，双层纱布过滤后用血球计数法调整抱子悬浮液浓度为2×10°孢子/mL，4℃条件下可保存96h。4.3.4亚粘团镰孢孢子悬浮液的配制将PDA培养基扩繁7d后的亚粘团镰孢5个菌碟转移至装有无菌高梁粒的三角瓶中，并在26℃、避光条件下培养5d，每天摇一次三角瓶，然后用无菌水冲洗带菌高梁粒，双层纱布过滤后用血球计数法调整孢子悬浮液浓度为2×10°孢子/mL，4℃条件下可保存96h。4.3.5层出镰孢7悬浮液的配制 将PDA培养基扩繁7d后的层出镰孢5个菌碟转移至装有无菌高梁粒的三角瓶中，并在26℃、避光条件下培养5d每天摇晃一次三角瓶，然后用无菌水冲洗带菌高粱粒，双层纱布过滤后用血球计数法调整孢子悬疗浓度为2×10°孢子/mL，4℃条件下可保存96h4.3.6混合孢子悬浮液配制 有育 服务平台 将禾谷镰孢、拟轮枝镰孢、亚粘团镰孢、层出镶包安照：0.5体积比将各镰孢菌孢子悬浮液混合，4℃条件下可保存48h5抗病性鉴定圃设置 5.1鉴定圃设计 鉴定圃应具有良好的自然发病环境，可根据需要进行排灌鉴定种质资源按照晚熟、中熟、早熟3个熟期分区种植，各熟期内种质资源采取随机排列，每隔30行鉴定材料设置1组已知同熟期抗病、感病对照。对照见附录表A.1。4 DB23/T3896—2024 鉴定材料采用单行区种植，3次重复，随机排列，小区行长5m，行距0.65m，植株密度为75000株/hm2。 5.2鉴定材料播种 鉴定材料播种时间与大田播种时间相当，也可根据当年农业生产气候条件适当调整播种期。播种时期按DB23/T2154规定执行。鉴定材料种子不应进行包衣处理，播种方式采用人工点播，每穴点播种子2粒，出苗后每穴保留1株健康的植株。种子符合GB4404.1标准。5.3田间管理 田间管理及虫草害防治与大田生产相同，田间管理过程中不应使用杀菌剂。6接种 6.1接种时期 应在玉米雌穗吐丝后3d~5d或花丝长度达5cm～10cm时进行。6.2接种部位及方法 接种采用花丝通道法，每株选择上部第1个果穗，利用可定量的连续注射器，在果穗花丝通道侧边插入至通道中空部位，每穗注射接种2mL孢子悬浮液。接种后常规田间管理，适度保持田间大气湿度。7病情调查 7.1调查时间 在鉴定材料进入完熟期时进行调查。7.2调查方法 采收接种的雌穗，去除苞叶后调查每个接种果穗发病面积，并进行分级统计。病情分级应按附录表A.2执行。 记录每份鉴定材料的总株数和名发店级别株数信息服务 8抗病性评价 8.1抗病性评价方法 根据不同材料的病情级别，计算每份鉴定材料的平均病情级别，平均病情级别计算公式见式1。 式中： ERSA= 1 ERS）/n 方 （式1） 5