【地方标准】 大豆转基因成分筛查方法

本标准编号：DB12/T506—2014，由天津市质量技术监督局发布，实施日期为2014年7月20日。 1 范围 本标准规定了大豆中转基因成分定性PCR筛查的术语和定义、检测方法、结果分析与表述。适用于大豆及其制品中Lectin内标准基因、CaMV35S启动子、NOS终止子、CP4-epsps基因、Bt基因和bar/pat基因的定性PCR筛查检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的： - GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 - NY/T672 转基因植物及其产品检测通用要求 - 农业部2031号公告—19-2013 转基因植物及其产品检测抽样 - 农业部1485号公告—4—2010 转基因植物及其产品成分检测DNA提取和纯化 3 术语和定义 3.1 Lectin基因：编码大豆凝集素的基因。 3.2 CaMV35S启动子：来自花椰菜花叶病毒（CaMV）的35S启动子。 3.3 NOS终止子：来自胭脂碱合成酶基因NOS的终止子。 3.4 CP4-epsps基因：来源于土壤农杆菌（Agrobacterium sp.）的CP4株系，编码5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶的基因。 3.5 Bt基因：来源于苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis，简称Bt），常见的Bt基因有crylAc基因、crylAb基因等，能够表达杀虫晶体蛋白。 3.6 bar/pat基因：bar基因来源于土壤吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus），pat基因来源于绿产色链霉菌（Streptomyces viridochromogens），这两种基因具有耐除草剂草丁麟（glufosinate）的耐受性。 4 检测方法 4.1 试剂和材料 4.1.1 实验用水为重蒸馏水或符合GB/T6682规定的一级水。 4.1.2 琼脂糖。 4.1.3 10g/L溴化乙锭溶液：称取1.0g溴化乙锭（EB），溶于100mL水中，避光保存。注：溴化乙锭有致癌作用，配制和使用时应戴一次性手套操作并要善处理废液。 4.1.4 10mol/L氢氧化钠溶液：在160mL水中加入80.0g氢氧化钠（NaOH），溶解后再加水定容到200mL。 4.1.5 500mmol/L乙二铵四乙酸二钠溶液（pH8.0）：称取18.6g乙二铵四乙酸二钠（EDTA-Na2），加入70mL水中，再加入适量氢氧化钠溶液（4.1.4），加热至完全溶解后，冷却至室温，用氢氧化钠溶液调pH至8.0，加水定容至100mL，在103.4kPa（121℃）条件下灭菌20min。 4.1.6 1mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液（pH8.0）：称取121.1g三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶解于800mL水中，用盐酸调pH至8.0，加水定容至1000mL，在103.4kPa（121℃）条件下灭菌20min。 4.1.7 TE缓冲液（pH8.0）：分别量取10mL三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液（4.1.6）和2mL乙二铵四乙酸二钠溶液（4.1.5），加水定容至1000mL。