【地方标准】 猪瘟病毒抗体高敏荧光检测试剂卡制备及高敏荧光免疫分析操作规程

ICS 11.220 CCS B41 福建省地方标准 DB35/T 2015—2021 猪瘟病毒抗体高敏荧光检测试剂卡制备及高敏荧光免疫分析操作规程 The preparation of CSFV antibody hypersensitive fluorescence detection reagent card and operating procedures for hypersensitive fluorescence immunoassay 2021-09-28 发布 福建省市场监督管理局 发布 2021-12-28 实施 前言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由福州海关提出并归口。 本文件起草单位：福州海关技术中心、厦门市翰均科检测科技有限公司、成都微瑞生物科技有限公司、上海德雨航生物科技有限公司、一品一码检测（福建）有限公司。 本文件主要起草人：郑腾、张体银、章键、吴俊清、吴冠英、谢向机、张志灯、唐寰宇、林杰、王武军、庄错、李宋钰、邱金生。 1 范围 本文件规定了猪瘟病毒抗体高敏荧光检测试剂卡的制备及高敏荧光免疫分析操作规程。 本文件适用于猪瘟病毒抗体水平的监测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件仅该日期对应的版本适用；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 18088 出入境动物检疫采样 GB 19489 实验室生物安全通用要求 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 PVC：聚氯乙烯（Polyvinyl chloride） 5 仪器与试剂 5.1 仪器 5.1.1 高敏荧光分析仪。 5.1.2 移液器（0.5μL～10μL、10μL～100μL）。 5.1.3 恒温培养箱（20℃～25℃、37℃±1℃）。 5.1.4 离心机（3000 r/min、18000 r/min）。 5.1.5 切条机。 5.1.6 划膜喷金机。 5.2 试剂 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水应符合 GB/T 6682 一级水要求。 5.2.1 高敏荧光纳米微球。 5.2.2 N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐。 5.2.3 猪病毒重组 E2 蛋白。 5.2.4 1% 聚乙烯醇。 5.2.5 牛血清白蛋白（BSA）。 5.2.6 鸡卵黄抗体（IgY）。 5.2.7 山羊抗鸡卵黄抗体/免疫球蛋白G抗体（IgY/IgG抗体）。 5.2.8 碳二亚胺（EDC）。 5.2.9 硝酸纤维素膜。 5.2.10 2-吗啉乙磺酸（MES）。 5.2.11 三羟甲基氨基甲烷（Tris）。 6 猪瘟病毒抗体高敏荧光检测试剂卡制备 6.1 检测线和质控线的包被 将硝酸纤维素膜粘贴于PVC底板上，使用划膜喷金机在膜上喷涂： （1）将0.5 mg/mL 山羊抗鸡 IgY/IgG 抗体形成质控线（C线）； （2）将1.0 mg/mL 猪瘟病毒重组蛋白E2形成检测线（T线）； 喷涂量均为 1 μL/cm，在 37℃±1℃条件下烘制 8 h。 6.2 硝酸纤维素膜的处理 用封闭液封闭硝酸纤维素膜30 min，用10 mmol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.5）清洗30 min，在20℃～25℃室温条件下干燥2 h备用。 6.3 高敏荧光纳米微球标记鸡IgY 将50 mg高敏荧光纳米微球加入0.1 mol/L MES缓冲液（pH 7.0）中，再加入10 mg碳二亚胺和10 mg N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐，室温20℃～25℃反应30 min后，于4℃、18000 r/min离心10 min，取沉淀备用。