【地方标准】 猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型二重PCR检测方法

ICS65.020.30 CCSB41 DB13 河北省地方标准 DB13/T5345—2021 猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型二重PCR检测方法
地方标准信息服务平台 2021-01-21发布 河北省市场监督管理局 2021-02-21实施
前言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第一部分：标准化文件的结构与起草规则》的规定起草。
本文件由河北农业大学提出，起草单位：河北农业大学。主要起草人：袁万哲、赵款、张建虹、王建昌、韩荞忆、李丽敏、宋勤叶、董世山、李希明、张磊、李睿文、白云、郝雪飘。
1 范围
本文件规定了猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型二重PCR检测方法的技术要求，适用于猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型的同时检测。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件仅适用于该日期版本；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。
NY/T541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 试剂材料
4.1 病毒核酸提取试剂盒。
4.2 1.0%琼脂糖凝胶，配制方法见附录A中A.1。
4.3 50X TAE缓冲液，配制方法见附录A中A.2。
4.4 溴化乙锭（EB，1 μg/μL）或市售核酸染料，配制方法见附录A中A.3。
4.5 焦碳酸二乙酯（DETC）处理的灭菌双蒸水，配制方法见附录A中A.4。
4.6 DNA分子量标准（100bp）。
4.7 反转录酶：M-MLV反转录酶（20 U/μL）或AMV反转录酶（10 U/μL）。
4.8 RNA酶抑制剂。
4.9 2X Taq MasterMix，含有PCR缓冲液、酶混合物、NTP混合物、无RNA酶的水等。
4.10 dNTP，浓度为2.5 mM。
4.11 引物：反转录引物、上游引物与下游引物见附录B中的表P，浓度为10 μmol/L。
5 仪器设备
5.1 PCR仪。
5.2 凝胶成像系统。
5.3 台式低温高速离心机。
5.4 电泳仪。
5.5 电泳槽。
5.6 冰箱。