【地方标准】 猪支原体肺炎诊断技术

ICS 65.020.30 B41 备案号： 江苏省地方标准 DB32/T 1771—2011 猪支原体肺炎诊断技术 Diagnostic Techniques for Mycoplasmal pneumonia of swine 2011-05-06发布 2011-07-06实施 江苏省质量技术监督局发布 前言 为规范猪支原体肺炎诊断技术，特制定本标准。 本标准按GB/T 1.1—2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》编制。 本标准由江苏省农业科学院提出，由江苏省农业科学院负责起草。 本标准起草人：刘茂军、邵国青、冯志新、王海燕、周勇岐、苏国东、孙佩元、甘源。 1 范围 本标准规定了猪支原体肺炎的诊断技术。 本标准规定的分离鉴定和PCR法适用于本病的确诊，间接血凝试验和ELISA试验适用于大批量样品的普查。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡注日期的引用文件，仅注日期版本适用；凡不注日期的引用文件，其最新版本（包括修订单）适用。 GB/T 6682—2008 分析实验室用水规格和试验方法 GB 16548 病害动物和病害动物产品生物安全处理规程 NY/T 541 动物疫病实验室检验采样方法 NY/T 1186 猪支原体肺炎诊断技术 DB32/T 1461 猪肺炎支原体检测PCR法 3 术语和定义 3.1 猪支原体肺炎 猪支原体肺炎（Mycoplasmal pneumonia of swine，MPS），俗称猪气喘病或猪地方流行性肺炎（Enzootic Pneumonia of Swine，EPs），是由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae）引起的一种呼吸道疾病，是全球广泛存在的严重危害养猪业健康发展的主要猪病之一。 我国为养猪大国，每年因该病造成重大经济损失，并可诱导免疫抑制，常与蓝耳病等混合感染，危害加重。 4 流行病学诊断 4.1 易感动物 本病仅发生于猪，不同品种、年龄和性别均可感染，以哺乳仔猪和幼猪最易感，发病率高、病死率较低；妊娠后期母猪和哺乳母猪次之，育肥猪较少发病。 4.2 易感季节 全年均可发生，以冬春寒冷季节较为多见。 4.3 诱发因素 猪舍通风不良、饲养密度过大、气候突变、阴冷潮湿及管理卫生条件差均可促进本病发生并加重病情。 5 临床诊断 5.1 急性型 病猪出现剧烈喘息、腹式呼吸或犬坐姿势，间发痉挛性咳嗽，体温一般正常，食欲减退或废绝，迅速消瘦，病程约1周，可因窒息死亡，病死率较高。 5.2 慢性型 表现为长期咳嗽，清晨、采食前后及运动后加重，严重者出现痉挛性咳嗽，体温正常但消瘦、生长发育不良，被毛粗乱，病程可达2～3个月，甚至半年以上，病死率较低。 6 病理学诊断 6.1 大体病变 特征性病变为肺心叶、尖叶及膈叶前缘发生对称性紫红色至灰色实变，肺门淋巴结肿大增生。肺组织质地变硬、重量增加，气管内可见黏液性渗出物。病死动物及病料应符合GB 16548规定。 6.2 组织学病变 支气管及细支气管上皮纤毛减少，小支气管周围肺泡扩大，腔内充满炎性渗出物，间质淋巴样细胞增生。急性病例以浆液性渗出物为主，伴单核细胞、中性粒细胞及少量淋巴细胞；慢性病例以淋巴细胞浸润为主。 7 病原学诊断 7.1 病原分离与鉴定 7.1.1 材料准备 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682—2008的灭菌二级水。使用Hanks液、KM2液体培养基、KM2固体培养基、免疫抗猪肺炎支原体高免血清及健康兔血清、灭菌棉拭子。 7.1.2 病料采集 按NY/T 541规定采样。用棉拭子采集病猪喉头或鼻腔分泌物；病死猪无菌采集病肺与健肺交界处组织。 7.1.3 病原分离 7.1.3.1 液体培养 将病肺组织切成小于2 mm碎块，用Hanks液洗涤后，取组织块置于KM2液体培养基中培养；棉拭子样品浸入培养基并挤压残液后37℃培养。连续传代培养，当培养物出现规则变色时进行进一步鉴定。