【地方标准】 混合型饲料添加剂中百里香酚、香芹酚、 丁香酚和肉桂醛的测定 高效液相色谱法

DB37/T3614—2019
混合型饲料添加剂中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的测定
高效液相色谱法
2019-07-23 发布
2019-08-23 实施

前言
本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出并监督实施。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省饲料质量检验所、青岛农业大学。本标准主要起草人：张玮、李会荣、杨智国、李斌、莫贞峰、李俊玲、郝智慧、黄婷婷。

1 范围
本标准规定了混合型饲料添加剂中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的高效液相色谱测定方法。本标准适用于混合型饲料添加剂中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的测定。本方法在混合型饲料添加剂中，百里香酚、香芹酚、丁香酚的检出限为25mg/kg，定量限为50mg/kg；肉桂醛的检出限为2.5mg/kg，定量限为5.0mg/kg。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可分的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 20195 动物饲料试样的制备

3 原理
试样中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛经甲醇提取、过膜后，供高效液相色谱仪测定，采用外标法定量。

4 试剂或材料
除非另有规定，仅使用分析纯试剂。
4.1 水：GB/T 6682，一级。
4.2 甲醇。
4.3 乙腈：色谱纯。
4.4 标准贮备溶液：精密称取百里香酚（CAS：89-83-8，纯度不低于98.0%）、香芹酚（CAS：499-75-2，纯度不低于98.0%）、丁香酚（CAS：97-53-0，纯度不低于98.0%）和肉桂醛对照品（CAS：104-55-2，纯度不低于98.0%）适量（精确至0.01mg），分别置于10mL容量瓶中，用甲醇（色谱纯）溶解并称释至刻度，混匀，配成浓度百里香酚、香芹酚、丁香酚为10mg/mL、肉桂醛为0.1mg/mL的标准贮备溶液。2℃～8℃密封保存，有效期为3个月。
4.5 混合标准工作溶液：准确移取百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛标准贮备溶液（4.4）各1.0mL置于同一10mL容量瓶中，用甲醇（色谱纯）稀释定容至刻度，混匀。该溶液中百里香酚、香芹酚、丁香酚的浓度为1.0mg/mL，肉桂醛浓度为0.1mg/mL。2℃～8℃密封保存，有效期为2周。
4.6 微孔滤膜：0.45μm，有机系。

5 仪器设备
5.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。
5.2 电子天平：感量为0.1mg和0.01mg。
5.3 涡旋振荡器。

6 样品
按GB/T 20195制备试样，至少200g，粉碎过0.42mm孔径的分析筛，充分混匀，装入磨口瓶中备用。

7 试验步骤
7.1 提取
平行做两份实验。称取试样0.11g（精确至0.1mg），置于25mL棕色容量瓶中，加入15mL甲醇（4.2），振荡提取10min，用甲醇（4.2）溶解定容至刻度，混匀。上清液过0.45μm的微孔滤膜，供上机测定。
7.2 液相色谱参考条件
色谱柱：C18柱，长150mm，内径4.6mm，粒径5μm，或性能相当者。
柱温：30℃。
波长：280nm。
流动相：乙腈（4.3）+水 = 42 + 58。
流速：1.0mL/min。
进样量：20μL。
7.3 标准系列溶液
准确移取百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛标准工作溶液（4.5）适量，用甲醇（色谱纯）稀释成百里香酚、香芹酚、丁香酚浓度分别为1.00 $mu$g/mL、5.00 $mu$g/mL、10.0 $mu$g/mL、50.0 $mu$g/mL、100 $mu$g/mL、500 $mu$g/mL，肉桂醛浓度分别为0.10 $mu$g/mL、0.5 $mu$g/mL、1.00 $mu$g/mL、5.0 $mu$g/mL、10.0 $mu$g/mL、50.0 $mu$g/mL的标准系列溶液，现用现配。
7.4 测定
按照7.2给出的色谱参考条件，分别上机测定标准系列溶液和试样溶液。试样溶液与标准溶液中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的保留时间相对偏差在±2.5%之内。百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛标准溶液图谱参见附录A。以百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的浓度为横坐标，以其响应值（峰面积）为纵坐标，绘制标准曲线，标准曲线相关系数不低于0.99。单点校准时，试样溶液与标准溶液中待测物的响应值相差不超过30%。如超出线性范围，应用甲醇稀释（n倍）后，重新进样分析。

8 试验数据处理
8.1 多点校准
试样中百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛含量以质量分数计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示。