【地方标准】 水产生物种质检验技术规程 简单重复序列扩增法

本标准依据GB/T1.1-2009给出的规则起草，由辽宁省海洋水产科学研究院提出，并归口于辽宁省海洋与渔业厅。标准主要起草人包括赫崇波、李宏俊、高祥刚、刘卫东、李云峰、鲍相渤。标准适用于水产生物种质检测与鉴定工作，采用简单重复序列扩增法（SSR）进行水产生物的基因检测。 本标准规定了术语定义、原理、试剂、仪器、取样、DNA提取、微卫星引物筛选、PCR扩增、聚丙烯酰胺凝胶检测产物、数据统计及水产生物种质检验分析评价的相关要求。 规范性引用文件包括GB/T18654.15-2008《养殖鱼类种质检验 第15部分：RAPD分析》。 术语定义： 1. 简单重复序列（SSR）：也称为微卫星，是指基因组中由短的重复单元（1~6个碱基）组成的DNA串联重复序列。 2. 聚合酶链式反应（PCR）：一种分子生物学技术，用于放大特定DNA片段。 3. 脱氧核苷酸（DNA）：由脱氧核苷酸磷酸酯组成的分子，是基因组中的基本构件。 4. 等位基因（allele）：基因的变异体，每个基因位点有两个等位基因，分别来自父母。 5. 基因型（genotype）：指特定座位的等位基因组成。 6. 座位（locus）：染色体上的位点。 本标准详细描述了微卫星扩增法的原理，其中微卫星的重复单位数目存在高度差异，且其侧翼序列通常是保守的单一序列，可以用于设计引物扩增微卫星位点，进而获得长度上的多态性。 标准中的试剂包括裂解液、三羟甲基氨基甲烷饱和酚（Tris饱和酚）等，具体配制方法详见附录A。