【地方标准】 海水中金刚烷胺的测定 液相色谱串联质谱法

DB37/T4299-2020
海水中金刚烷胺的测定
液相色谱串联质谱法
Determination of amantadine in seawater-Liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS
2020-12-30发布
山东省市场监督管理局发布
2021-01-30实施

前言
DB37/T4299—2020
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由山东省海洋局提出并组织实施。本文件由山东省海洋标准化技术委员会归口。本文件起草单位：山东省海洋资源与环境研究院、山东省水产品质量检验中心、山东省标准化研究院。
本文件主要起草人：徐英江、田秀慧、韩典峰、任传博、宫向红、刘小静、薛敬林、张华威、于宁、相吉利。

1 范围
DB37/T4299—2020
液相色谱串联质谱法
海水中金刚烷胺的测定
本文件规定了海水中金刚烷胺检测的原理、试剂和材料、仪器和设备、样品的制备、测定步骤、结果计算和表述、检测方法的灵敏度、准确度和精密度等技术内容。本文件适用于海水中金刚烷胺的测定。

2 规范性引用文件
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GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 术语和定义

3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。

4 原理
海水样品过滤后加入盐酸酸化，经固相萃取柱富集净化后，采用液相色谱-串联质谱法测定，使用内标法定量。

5 试剂和材料
除另有指定外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T 6682中一级水标准。
5.1 甲醇：色谱纯。
5.2 甲酸：色谱纯。
5.3 乙腈：色谱纯。
5.4 氨水：优级纯。
5.5 盐酸：优级纯。
5.6 0.45μm 醋酸纤维滤膜。
5.7 0.2 mol/L 盐酸：16.8 mL盐酸用水稀释并定容至1000 mL。
5.8 5% 氨水甲醇：取5 mL水，定容至100 mL。
5.9 0.1% 甲酸溶液：取0.10 mL甲酸，定容至100 mL。
5.10 定容液：将1 mL甲酸与300 mL乙腈，加入到700 mL水中。
标准品：金刚烷胺（CAS：768-94-5），纯度≥99.0%；金刚烷胺内标溶液（D3-金刚烷胺）：1 mg/mL。
5.11 标准贮备液：准确称取金刚烷胺0.0100 g，用乙腈溶解，定容至10 mL，配制成1.0 mg/mL标准贮备液，4℃下避光保存，有效期为6个月。
5.12 标准使用液：分别移取适量金刚烷胺和金刚烷胺内标贮备液，用乙腈分别稀释成标准使用液，金刚烷胺的浓度为1.0 mg/mL，金刚烷胺内标的浓度为100 μg/L，4℃下避光保存，有效期为1个月。

6 仪器和设备
6.1 液相色谱-串联质谱仪：配置电喷雾电离源（ESI源）。
6.2 分析天平：感量0.0001 g。
6.3 天平：感量0.01 g。
6.4 超声波清洗器。
6.5 玻璃砂芯过滤装置。
6.6 醋酸纤维滤膜：0.45 μm。
6.7 固相萃取装置。
6.8 氮吹仪。
6.9 旋涡混合器。
6.10 固相萃取柱：MCX，60 mg/3 mL，或相当者。

7 样品的制备
使用玻璃砂芯过滤装置，经0.45 μm醋酸纤维滤膜过滤后备用。

8 测定步骤
8.1 提取与净化
精确量取500 mL海水，加入100 μL内标使用液（5.12）和10 mL 0.2 mol/L盐酸（5.7），过活化后的MCX柱（6.10）（使用5 mL甲醇、5 mL水活化），5 mL水淋洗，10 mL 5%氨水甲醇洗脱（5.8），收集洗脱液用氮吹仪于40℃下吹至近干，用定容液定容至1 mL（5.10），供液相色谱串联质谱仪分析。
8.2 标准曲线的绘制
准确移取适量金刚烷胺的标准使用液（5.12），分别加入100 μL内标使用液，用定容液稀释成一系列的标准工作液，使金刚烷胺浓度分别为10.0 μg/L、20.0 μg/L、40.0 μg/L、80.0 μg/L、100 μg/L，以各标准峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标，以各标准工作液浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。
8.3 测定
8.3.1 液相色谱参考条件：
a) 色谱柱：（100 mm × 2.1 mm, 1.8 μm），或相当者；
b) 色谱柱温度：40℃；
c) 流动相A：乙腈；
d) 流动相B：0.1%甲酸溶液；
e) 流速：0.25 mL/min；
f) 进样量：10 μL；
g) 梯度洗脱程序：见表1。

表1 液相梯度洗脱程序表
时间 (min) | B (%) | D (%)
0.00 | 5 | 95
0.50 | 5 | 95
0.60 | 95 | 5
5.00 | 95 | 5
5.10 | 5 | 95
7.00 | 5 | 95

8.3.2 质谱参考条件：
a) 离子模式：ESI+；
b) 电离电压：2.50 kV；
c) 锥孔电压：30 V；
d) 离子源温度：140℃；
e) 锥孔反吹气流速：50 L/h；
f) 脱溶剂气温度：400℃；
g) 脱溶剂气流速：700 L/h；
h) 氩气流速：0.12 mL/min；
i) 测定方式：选择离子（SRM）多反应监测模式。

表2 定量离子和定性离子
化合物 | 母离子 | 子离子 | 锥孔电压 | 碰撞能量
金刚烷胺 | 152 | 93, 135, 141* | 25 V | 30 eV
金刚烷胺内标 | 167 | 25 | 25 V | 17 eV

8.3.3 定性方法
在同样测试条件下，试样液中待测物的保留时间与标准工作液中待测物的保留时间偏差应在 ±0.10 min 以内，且检测到的离子的相对丰度应符合要求。在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的特征离子均应出现，且应与浓度相当的校正标准溶液相对丰度一致。其允许偏差应符合表3要求。

表3 定性确证时相对离子丰度的允许偏差
相对离子丰度 (%) | 允许偏差 (%)
>50 | ±10
>20~50 | ±15
>10~20 | ±20
≤10 | ±50