【地方标准】 动物源性饲料中鸭源性成分测定 PCR方法

ICS 65.120 B46 备案号：41837-2014 DB22 吉林省地方标准 DB22/T2049-2014 动物源性饲料中鸭源性成分测定 PCR 方法 Determination of duck derived materials in animal-originated feedstuffs PCR method 2014-02-28 发布 2014-04-30 实施 发布单位：吉林省质量技术监督局 前言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 和 GB/T 20001.4-2001 的规定起草。 本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。 主要起草单位为吉林省产品质量监督检验院、国家农业深加工产品质量监督检验中心、中华人民共和国吉林出入境检验检疫局。 主要起草人包括史艳宇、刘金华、郦炜、王莹、周亮、吕航、郎乐、张庆波、宫国强。 1 范围 本标准规定了动物源性饲料中鸭源性成分的PCR检测方法，该方法检出限为0.1%。 本标准适用于动物源性饲料中鸭源性成分的定性检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期版本适用；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测 3 术语和定义 3.1 鸭源性成分 duck-derived materials 指鸭种属特异性DNA片段。 4 原理 对样品进行DNA提取，通过PCR扩增检测鸭特异性基因片段。 5 试剂和材料 除特别说明外，所有试剂均为分析纯，实验用水应符合 GB/T 6682 一级水要求，所有试剂应使用无DNA酶污染容器分装。 5.1 鸭源性成分检测用引物（PCR引物序列） 上游引物：5'-CATCTATCCTGCTAGCCGCC-3' 下游引物：5'-GGCTTGAGTGGAAGAATGCC-3' 5.2 Taq DNA 聚合酶 5.3 dNTP 包括 dATP、dGTP、dCTP、dTTP（脱氧腺苷、脱氧鸟苷、脱氧胞苷、脱氧胸苷三磷酸）。 5.4 动物基因组 DNA 提取纯化试剂盒 5.5 RNase A 酶（冻干品，不含 DNase） 5.6 蛋白酶 K（冻干品） 5.7 三羟甲基氨基甲烷（Tris） 5.8 Tris 饱和苯酚