【国家标准(GB)】 肥料中粪大肠菌群的测定

ICS 65.080
中华人民共和国国家标准
GB/T 19524.1—2004
肥料中粪大肠菌群的测定
Determination of fecal coliforms in fertilizers2004-05-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局Pa
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中国国家标准化管理委员会
2004-10-01实施
本标准的附录 A,附录13为规范性阴家前
标准市中华人民共利国农业部种杭业管二标难起革单位;农业部微生物肥料质弯黑诊…本标雅士要起#人曹风阴、沈德龙李俊妾，GB/T19524.1—2004
1范围
肥料中粪大肠菌群的测定
本标准规定了肥料中粪大菌的测定方法2定义
下列定义适用于本标推。
粪天肠菌eealculilarins
GB/T19524.1-2004
-群在44, 5C一C,5C条件能发臀乳糖,产酸气需气和兼性:厌乱的毕兰氏阴性无芽胞杆菌，粪大豚菌群数为每克(笔升)肥料样品中粪大肠岗群的最川能数(MPV）。3仪器设备
高压蒸汽灭菌器；显微镜;恒温水浴或橘水式培养箱:恒温旋转式摇床：[燥箱：天：酸度计或精密FH遇纸:接种环：诚管(15 III义150 IIiI);小衰管（杜兰管）：移液管：角瓶：培养Il:载玻片：玻璃珠灯：试管架：
4培养基和试剂
4.1培养基:遵照附录A 的规定。4.2毕兰质染色液遵照附录B的现定。5检验步骤
5.1样品稀释
在无随操作下称取栏品0.g或吸取样品！0mI人到带玻璃的90mI.无菌水中，置于摇床上20r/tmim充分振荡30 miu.即成10（稀释液。用,菌够液管玻取5.0 ml.上述稀释液兆人到45 ml. 片菌水中，混勾成13~稀释液。这椎袋稀释：分别得到1C.10等液度稀释液（衔个稀释度须史换九菌移液节）。5.2乳糖发酵试验
选取三个连续遁宜稀释液·分别吸取不同筛释液1.3tL北人到乳糖胆盐发管内.每一稀释度妄种 3 支发酵管,置 11. 5r±0. 5℃机温水浴或隔水式培养箱内,培养24 h=2 1:。延果所有乳糖胆盐发酶管都不产酸不产气.则为粪大砌菌群阳性：如果有产酸产气或只产骏的发酵管，则按，逃行，5.3分离培养
从产酸产气或只产酸的发酵管中分别挑取发酵液在仙红美蓝琼脂平板「划线，留36℃工1℃条位下培养 18 h-~24 b:.
5.4证实试验
从，3分离平极「挑敢可疑菌落,逃行革兰氏染也，染色反应阳性者为龚大肠菌群性:如果为革兰氏阴性无芽胞杆菌则挑姚取向样菌落接种在乳糖发酵管中，管11.5℃=（).：℃:条件下培菲24h二2h，观察产气情况，不产气为粪大杨菌群阴性：产气为粪大肠菌群引性5.5结果
江实试验为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发醛管数，查MPV检索丧.得出每克（亳升）胆料品出的粪人肠菌数。
GB/T19524.1—2004
A.1乳糖胆盐发酵培养基
蛋白陈
猪胆盐
0.004%溴甲酚紫水溶液
蒸馏水
制法：将蛋白陈、猪胆盐及恶
管9mL，并放入支倒置的
注1初发醇培养基。
附录A
（规范性附录）
培养基
1000mL
糖蒸子蒸馏水
高压灭卤
注2：类大肠菌群细菌发酵乳糖产酸产气便培养活
伊红美蓝琼脂培养
蛋白陈
磷酸氢二钾（KH
2%伊红Y水溶液
0.65%美蓝水溶液
蒸馏水
且，加人溴甲酸紫水落液，然后分装试管，每由紫色变成黄色，套管内充有气体，7.2-7
制法：将蛋白陈、乳氢二钾溶解于蒸案馏水中，校正PH，投人琼脂并加热容解分装于三角瓶中，高压灭菌115℃、15m电
伊红和美蓝溶液分别高压灭菌121℃、20min。临用府加热熔化培养
基，冷却至50℃~55℃，加人
A.3乳糖发酵培养基
蛋白陈
0.004%漠甲酚紫水溶液
蒸馏水
的伊红和美蓝落液，摇匀，倾注平板Sz0.0g
1000ml
制法：将蛋白及乳糖溶于水中，校正pH.加入指示剂，按检验要求分装3mL~5mL，并放入1支倒置的小套管，高压灭菌115℃、15min。2
R.1结晶紫染色液
乙液：
结晶紫
乙醇(95%)
草酸铵
蒸馏水
附录B
（规范性附录）
革兰氏染色液
GB/T 19524.1—2004
将结晶紫研细后，加人95以乙醇使之溶解，配成中液。将草酸铵溶于蒸馏水配成乙液.下滋与乙液犯合.静置h使用。
B.2卢哥氏(Lugol)碘液
碘(1,)
碘化钟(K1)
蒸馏水
光将供化钾溶解在少量馏水（3ml5mI.）中，再将碘完全济解在碘化饰浴液中.然后加人余下的蒸馏水，置于棕色瓶中可保存数月。B.3脱色液
的乙醇。
复染液
0.5的番红水溶液：取2、5番红花，落于100mI.无水乙醇中，收番红乙溶液201ml.無人80ml蒸馏水，即成0.5番红水溶液GB/T 19524. 1-2004
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2034 年7月第一版2001年7片等一次三*
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