【国家标准(GB)】 食品中黄曲霉毒素的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法

TCS 67.050
中华人民共和国国家标准
GB/T189792003
食品中黄曲霉毒素的测定
免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法
Determination aflatoxins content in fuodCleanup by inmunoaffinity chrumalugaphy and determination byhigb-performance liguid chromaligraphy and fluorometer2003-02-21发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2003-08-01实施
牛标准由北京质技术监务局提品：前言
交标准出全国食品广业标化技术委血会归二GBI18979—2C03
本标准制中单位：北京市产品质益监督控验所青岛户人境检验检究高、间家标准物质研究中心。本标雅主要足常人土品、涨鼎，张艺兵，邵明武心标非为首改发布，
1范罔
食品中黄曲霉毒鑫的测定
免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法
GB/T189792003
立标准规定了免疫亲和层折净化一占效浓相色逆法免疫亲和层析净化一炭光光坐法测定品中黄山毒需求的杀件和详细分析步驱。木标准适用于下米，花生总其制尿【花生酱、花生仁、花生米），大米、小走、担准脂、酱油、食醋等食样品中黄也游索的检出限，免亲和层析净化一高效满相谱法测定的曲每求以及黄曲或市求：、、s总量检出限为1g/kg。免疫京和层析净化荧光光度法测定黄山露毒豪BB、G：总量限为1g/kg蓝洲样品+检限为2.5/kg2免疫亲和层析净化耐效注相也谱法2.1方法提要
试详经过甲醇水提收，提收液经斗诺、稀释局·故视过含有黄两孕市索特开抗体的免疫衰和层析净位，此沈伴对黄国每带获B：.H.心：.G，具有专-性，黄曲需毒家交联在层析介质中的抗体上：用水成吐通-列/PS将免疫亲和杜上乐质除去，以甲醛通过免控亲和后析杜继脱，洗脱滤通过带状光检测器的高效滋相也谱伐杜后真溶液衔生测定黄曲每毒素的含鼠，2.2试剂和落液
险非另有规宸，仪使用分折纯试剂，互蒸确水，2.2.「啦CHUH：色语纯。
2. 2. 2甲醇水(7+=);取7 ml. 甲醛加 30 ml. 水,2.2.3甲-水812)放80m中晚20mL水：2.2.4甲醇水（45+>，取45ml中醇加35ml.水，22.5苯：色纯。
2.2.6乙腊色谱纯。
2. 2. 7 -乙脂(S8 1 2)收 2 Z脏加 98 mI 本。2.2.8氯化销(Nat1).
22.9磷酸氢二纳(N;IPO,）
2.2.10磷酸钾KH,PO.)。
氨化钾(KCI)。
P漫巾落：收.0R化钠.1.2&辉氧二钠，22性二钾0.2氯化钾，用SSCml.水溶解，燃后月浓盐酸调件p值至7.0,最正用纯水秘释至：000mL2.2.13蓝20/PRS落液（0.1%)：取1.温-20,加人PH短冲游滤井定容至1aL：2.2.14pI17.0辨酸盘漫冲举滤；取25.0ml.0.2mr.nl/1.内酸-氢射落被与29.1ml..1mml/T.的氧化销落液混写后、稀群划100加L。1
GB/T189792003
2.2.15黄曲书寿索标准品（黄曲毒事HH，)：度34，2.2.16英每高标准尚备穿减：用本-7睛98+2弃夜升别配制0.100Tg/mL的英用带每素B：B，，们：标准储备液，保存于么备用22.17黄曲谢毒意滤合标准1作滋，准避移取适量的黄由幕毒索B,B.行1、G，标准惜备波，用本-乙（18一2)榕液梯频减混合标准工作薇，2.2.18件后行生率液（0.05%碘液）称取C.=班，济解于23L中停斤，加纯水定容至200m1.以C.45Km的尼龙然悦过涉，4避光保存23仪器和设备
宽验索常规议器、设备及下划各项，2.3.1商违均举：=0001/min~-220001/mim23.2黄山需品素免亲机机.，
之.3.3高许维滤纸：支径11m孔1.5：2.3.4鼓筛注射益，10m.,Gml..
2.3.5我璃试书：直征12mm，长75mm荧光特性。2.3.6此效涨相色谱仪，具有350nm激发波长和人+42nm零射波长的荧光格测幕。2.3.7空气乐方泵。
2.3.8微量注射器：1ml.
2.3.9色谱片：C件（#长150mm.内径4.6mra.填料白径5ura)。2. 4分斯步骤
2.4.1提取
2.4.1.1不米、1米、充、花牛及其制品：准研称取经过磨细（粒度小m）的成样27.于25）ml.月率链形做中，加人5.0多氧化钠甲序-水（7+3至125.0mL（V），以均质器高速搅拌提取2m：定纸过游准确多取15.5ml2.4.1.2植特洲脂：准确称取诚样2.g252mT.具童维形瓶中，加人.氛化钠改加人中醇-水（713)车25.0tL满液并加人3J.1mLV)水税释，正玻离维池纸过蓝1--3次，坐滤遮游清，备用，2.4.1.3酱油：准确称取试样51.0g于25U.0具案准形能，加人3.5%氟化钩及加醇水（B+2)全100.0mL(V,>.以势则高速说拌泥取1mit：实量沙过滤.准确够收10.(mT.（V滤液并期人40.0mlY水梯邦，H玻璃纤维滤纸过滤1.-2次，至滤液短后，备用。2.414食幅：准确称取=.0g样品,切人1.(R氧化钠.以H7.0赚爱益级冲率液稀释全25.0L(V），混分定量滤抵过滤，取10.0L(V滤激人10.心mL（V:）冲减，混勾，以玻璃细浓纸过满1--2次，至滤液漫清·备用
2.4.2净化
2.4.2.1大米、±米，小述花及式带品.情物油鼎将免效亲和柱连接于20.0mL鼓璃注射器下准确修取1.5.0m1.（V，>样品提收秘注入收端让射器小，将空气压力泵与戒廖注射器连接，谢节三力使深以约6mL/min流过爆燃通过免疫亲和划.直至ml.~3ml.空气通过柱体。以I(uL水洗柱子两次，弃去全部流出商，并使2mL--3ral李汽连过社体，确加.人1.ml.(V)也谱级中醇洗脱流速为！rr:Lmitt~3mL/nin，收带全部满脱液于玻璃试世中，供裕测用。2.4.2.2将油：格免疫京和柱连装于1,DmL效考江射幕下.准确移取10.Cm1.(V>酱泊样品提双液注人班璃证射器十将气压力系与我璃注射器连接，避压力快游液以纳6mm机洗决性通过免度亲知#。用100.1%的性蓝-20/TI3S消洗，小以1cml.水增洗料子两次，齐去全邪流山液，井使之mL-3mI.空气滴过式述。确确加人1.0mLV)色谱缓甲而洗脱，流速为1ml./min~mi./mir，收案全部洗脱液丁玻照注受，供检用。GH/T18979—2003
2.4.23食醋：将免度竞和样连接十1C.2ml.玻璃注时器下.准移收75.0rl.(Y>食略样品拟取激注人班璃注射器，将气压力泵与破将注射器连接，调书压力使落滤以的6mI.mir:流迪经检通过充旋亲和杜，用10=0.1的吐道-2)/箱液齊洗，再以10mL水清选注子两次，弃去全部流出液，并使m.-~l，穿气通斗性件。注确测人nlV）竞谱级甲醇洗脱流连为mLi~2mL/nin.性集全部沈脱液于玻确式管中·供检测月：2. 4. 3 测定
2.4.3.1高效减相色谱条件
抗动相：甲醇-水（1:+i
筑递;t8L/n
式石衍生化系统
微生路滤：0浴碘游液
衍生箱液流速c.2l.mi
区管蕴度：7℃
反应时1min
2. 4. 3. 2定量
用进样器吸取10T.黄曲得寿泥合标准工作液(3.2.17)注人高效液划色诺议，在上述色谱杀件下定标雅浓的响应值（择高或峰而机），祥到黄曲激声素B、比、、G：标准率高效变色谱断。参考塔剂兜图1.
聚州：
牌能能互
图1黄邮年待需RBG,(2的标准语图8用时网/m
取择品洗晚带1.0ml.加人更获谣水更咨至2.nmT,用进杆器吸取100I.让人商效液扫色增仪，在上述色增条件下测定试样的响值（峰商需血我！）。经过与英曲戒索标谁游夜闲比较师虚值得到试样中黄带爆存素B、BG，和的施度。2.4.4空乌试验
用水代些试样,按2.1.1~·2.4.3步驱做空口试临.2. 4. 5 结果计筛
样品中黄曲每事奈B,、B、G,或G的合显()以龄克母二克表示,按式(1)计算：,-r,V
CB/T189792003
其中：
式中：
X，—样品中黄曲每准素TG成G，的含量，单位为微克每千克[/kg——试中黄靠项素、B、G，或的盖，单位为微克敏升（/e—-空凹诚验黄带球素BBG或G：的含量单收为微克升（g块终中醇选脱液林，单位为毫升（ml.)：称—-娠终净化洗脱流所含的成样质或，年位为克（2）：热：一试样称取的质量的微值，单位为克（R））V-…-伴品和提取液总体积，单心为奢mL；W
稀释用持品依体积，单位惠升（）；V-稀释该体乳.单位为毫升（mL)，—通过亲即杜的样品提取教体积，单应为案升。黄血游毒素总站为BBG,、G，的浓度之和.即F,H一G十。汇算结果表示到小数点后两位。3免险亲和愿析净化茨光光度法
3. 1方提要
试样经过中醇-水提攻，费取浓经过滤、缔摇后，波液经过管有黄曲择等表特抗体的免接亲和层析资化，此抗位对黄归市索、，行：县有专一性，黄出每牵素交燃在层折介质中的体上。用水免变亲和杜上杂质除长，以半再通过免瘦亲和尽切片洗脱·加人澳奔液衍生，以提高测定灵缺速，洗脱孩通过荧光光度计剪定范曲莅书效(H1B：1，…>总量3.2试剂和溶液
跨非另有规延，仅使用分析纯试剂，重蒸留水：3.2.1甲醇(CH,OT)：色斑纯，
3.2.2申-水（7-3)，70mL甲系30m水。3.2.3甲醛水<812)，取80ml.中醇20mL.水.3.2.4氯化钩(NaC1)
3.2.5雌酸氨:钠(NaTIPO,).
3.7.6磁酸氢短(KPO）。
3.2.8激落液储备滑0.01为）：取适点滤，容于水，配成0.1%的储备范：4%避光保存3.2.9流落上作渡.C2%！：收1mL..%的漠罐微加人1价m.水混勾.」惊色瓶中保存备用。需每次使用前配判，
3.2.10—水筑酸李宁（CI1N+11.S021)。3.2.11硫酸率液！3.5m0/L）：度2.rmL浓硫，统慢加人范量水11冷后定穿至：900m..3.2.12此光光度计校准降液：你取8.40靠晚案宁(CH%N()，H5O2H,0)用U.0Smol/L酸落批薪至U此游股费光光度读扣当于20Js/L英曲每毒素标准溶液。3.3收器和设备
实验室前规议端，设备皮下列各项3.3.1费光光度计。
3.3.2商质器18uu1/~.22/in
3.3.3茜曲获表素免将亲和，
3. 3. 4玻率纤维抵,肉径11 4ml.孔轻=. 5m3.3.5披换射器：10mL.20l.。
3.36玻聘管：直径12-1m1.长75.num.无荧光特性。3.3.7空压为录
5.4分析步票
3. 4. 1提取
同2. 4. ..
3.4.2帝化
向2.4,2.
3.43测定
3.4.3.1费光光宽计校准
GR/I18979—2003
在发被长360am.发剂波长450nm条件下，以0.0Em0/1.境酸资滤火宝口，调节炎光变计的读数估C.R/1以奖为光虚计校准落微:3.2. 12)询与炎光光虚H的减数值为20.g/L，3.432样准测定
取上述净化后的甲醇洗脱液人1.Gml.0.002魂培策，据勾·静置1mi，按3.4.3.1策件进行增作于荧度计中座序详波中黄曲尽奔素G1的浓度)3.4.4空白试验
市水代替试样，按3.4,~%.4.5出操做空当试验，3.4.5结果计算
样品中苗密事实（·G的含量X以微京每表示，按式（3算X--V下载标准就来标准下载网
其中：
式中：
X：—格品两密素（BB1：G含单价为克停千克（/k）c—试样中要盘素（:BG,的合，单位为微每(g：一空立试验黄曲穿率索(B十B十G十)的告昆.单位为微克每升（gT.展等中群洗脱液件租，单位为系力（m1张、《一最终净化税脱液所命的试样质单官为克（鸟)：w—或详称的质量的数怕，单位光克（g)：V,-一样品和提最液总体,位为案升(rl.;稀释用样品德被体承，总位为升（ml.）W-—稀释减体积，单位为客T:L
通过亲和术的栏品报最报本积，单位少实所（配L）引算结果表示到小数点后,位。
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