【国家标准(GB)】 实验动物 弓形虫检测方法

ICS65.020-30
中华人民共和国国家标准
GB/T18448.2—2001
实验动物
寄生虫学检测方法
Laboratory animalParasitological examination methods2001-08-29发布
中华人民共和国免费标准下载网bzxz
国家质量监督检验检疫总局
2002-05-01实施
GB/T1844822001
本标准由GB/T1926.34-—19944实验动物马形体检验方法》修订面成车标准剧除了GB/T14926.34-1994申注意事项\的所有内容，增加了检测原理和间接免疫美光《IFA》以及犬、猴等实验动物的弓形虫检测内容，本际准由丰华人民共利国科学技术部现出并妇口本标准起草单位：中国实验动物学会。本标准主要起草人，属置琴、幸冠民、诸欣平、潘振业、刘兆铭。本标准于1994年1月首次发布。
中华人民共和国国家标准
实验动物
弓形虫检测方法
Laboratery animal-Method for examinatiea of Toropfasma gondit1范圈
GB/T18448.22001
代营GB/T1492634-1994
本标准规定了实验动物号形重的间接血凝（IHA)法和间接免疫荧光法（IFA）检测方法，本标准适用于小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠免、大及膜等实验动物弓形体的检测。材料和试剂
弓形虫抗原致敏绵羊或人红解题，正常对照绵羊红细脂
南性对照血清。
明性对照血清。
稀释范：含1%健康免血清的确粒盐缓冲液（PBS:1/15mol/LNaHPO,7.3mL：1/15mol/LKH.PO,2.7mL燕编水90ml)。
微量血凝试验反查板，
微量加样器，
无菌试管、吸管，
震药器和球箱
2.10荧光显微镜。
同接血题法（IHA）
在一定条件下，航原可散敏绵羊（或人）红细胞，致敏红细胸遇相应抗体时，产生凝集反应。敢样
无菌采血约1mL（小鼠、大鼠、地鼠服部采血：原鼠心胜采直，兔、犬及膜耳部采血），斜效待凝，4C冰箱中过夜。
3.3分离血清
无菌条件下特冰箱中过夜后的血样管中的血清轻轻吸到另一无菌试管申，3.4
天活血清
将分高出的起清，置56C幅温水器中灭活30min。3-5
IHA试酸
以稻释减在微量反成板中依次对每份直清进行倍比稀释，每份直清器释两横排，每孔最后留量为0.025mL，设阳管血清，朗性血清、空白对照各一孔。第一横排滴加号形血致敏绵羊（或人》红细驼0.025mL，第二横排滴加正常对照绵羊红细脂0.025mL，然后将加好样品的微量反应板置震蓄器上震薄3.min~5min，使抗原抗体（即致敏红组跑与待检的靠释血清）充分混备，15℃~28C室覆下过夜后观中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2001-08-29批准6
2002-05-01实施
察结果。
3.6结果记录
GB/T18448.2-2001
3.6-1红细聪量膜状均匀沉于孔底，申美无沉点或沉点小如针，记为”++++”。3.6.2红细胞量呈膜状沉着，但题粒段粗，中央沉点较大，记为\+十+”3.6.3红耀胞部分呈膜获沉着，周国有凝集团点，中央沉点大，记为*十+”36-4缸细胸混集手中心周国有少量颗赖获领物，记为=3.6.5红细胞沉集于中心，周图无沉着物，分界清楚，记为””。3.6.6出现十+\孔的血清最高释信数定为本间接血疑试验的餐集效价，≤116为性：1:32为可载2164为阳性。
4间捷免疫费光法（IFA)
固定在感片上的再体含特异性抗原，遇相应抗体后影成抗原抗体复合物，可与相应的第二抗体荧光索情合物精合。在荧光显微镜下可观察到有无荧光及其强弱程度，4-2IFA表片抗原的制备
可形重RH样度腔接种小鼠，3~5d天后处死，收取血体，脑酶消清化+一定准度亲片，充分晾于后内酮周定·备用。
4.3阅性血清
自然感染弓形虫的动物抗体阻性血清或弓形虫免疫血清。4.4
朗性血清
确证无感黑感集的动物血清。
莞光结合物
4.5.1抗小鼠，大鼠、地鼠、豚成、免，犬和痛IgG异硫氰氢醒费光素结合物用于检毒相应实验动物血清抗体。使用时用含1/2000伊文思蓝PH7.2降融盐缓冲减（PBS）格释至合适浓度。4-52装光结合物的滴定，在已制备的弓形电抗原减片上滴加1110的写手电阳性血清同丝血请面PBS对照，参照荧光结合物的工作效价做系列需释，然后滴加以上各孔内，最后选择荧光强度为++十十最高带释度的结合物为正式试验用的释度。4.6操作步骤
滴加待检血清（1：10),已知用性，阴性血清和PBS于抗原玻片上+保温37Cmin~45min（玻片置于湿盒内）用洗液（PBS源洗3次，每次5min+甩于
加菱光结合特
+保温37C30min~45min
用洗覆（PBS）藻洗3次，每次5min，水洗1次+用干
滴50%甘油PBS后，覆以盖载片封片+
荧光足微镜镜检
4.7精果记录
荧光显微镜下，在抗原片上的弓形虫虫体星黄绿荧光，以将检血请1：10释择检测到虫体为阻性，酷果判定
GB/T18448.22001
特检样品用一种方法检测出现可聚或阳性时，应选用网一或另一种方送重试，重试阳性则为阳性。
6精单摄告
根据判定结果，作出报告。
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