【地方标准】 甘薯抗茎线虫病鉴定技术规程

DB32/T3863—2020
甘薯抗茎线虫病鉴定技术规程
Technical regulation for evaluation on sweetpotato resistance to stem nematode disease
2020-10-13 发布
江苏省市场监督管理局
2020-11-13 实施

前言
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由江苏徐州甘薯研究中心提出。本标准有江苏省农作物标准化技术委员会归口。本标准起草单位：江苏徐州甘薯研究中心。本标准起草人：孙厚俊、谢逸萍、张成玲、杨冬静、徐振、赵永强、马居奎、谢睿寰、唐伟、孙井。

1 范围
本标准规定了甘薯品种（系）对茎线虫病抗性鉴定的鉴定方法、抗性评价标准和鉴定记载表格。本标准适用于甘薯品种（系）对茎线虫病抗病性的自然诱发鉴定和室内接种鉴定。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB 4406 种薯
GB 7413 甘薯种苗产地检疫规程

3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1 感病对照品种 (susceptible control variety)：为检验试验的可靠性，在品种抗病性鉴定时附加的已知抗性为感病的品种，本标准中感病对照品种为栗子香。
3.2 人工接种鉴定 (evaluation of artificial inoculation)：用人工繁殖或收集病原线虫，按一定量接种，创造发病条件，根据茎线虫病发病程度确定品种抗病性。
3.3 高温愈合 (heat treated to wound healing)：在甘薯入窖初期，采用人工加温方法促进伤口迅速愈合的一种措施。
3.4 相对病情指数：将供试品种（系）的病情指数与高感对照病情指数进行比较，经过公式计算而换算出的病情指数。
3.5 体积比：人工接种鉴定时茎线虫侵染的体积与薯块体积的比值。

4 鉴定方法
4.1 自然诱发鉴定
4.1.1 病圃选择：选择排灌方便，肥力中等，甘薯茎线虫病发生较重且均匀的田块作为鉴定圃。
4.1.2 薯苗准备：将符合GB 4406要求的种薯在无病苗床排种育苗，将待鉴定品种薯苗离苗床土层3cm~5cm剪下，长度20cm～25cm。外寄鉴定材料应按照GB 7413要求进行检疫。每品种剪取三组薯苗，每组6株～8株按名单编号分别挂上名称、编号、试验重复的牌子，备用。
4.1.3 栽种及管理：5月上中旬起穴栽种，垄宽75cm～85cm，每垄划分成不同的小区，小区之间留隔离部分50cm。采用Z字形方式栽种，试验设3次重复，随机区组排列，每重复供试品种（系）6株～8株，株距23cm~25cm，选用栗子香为高感对照品种，每隔10个鉴定品种（系）栽种栗子香一垄，栽种后正常管理。
4.1.4 病情调查与分级：10月中旬进行调查薯块发病情况。人工将薯块刨出，用刀将薯块横切两刀，目测线虫侵染的面积，根据侵染横截面积进行分级，每个薯块均需调查，记载发病情况。分级标准如下：
—0级：无病；
—1级：0% < 为害面积占薯块横切面积比率 ≤25%；
—3级：25% < 为害面积占薯块横切面积比率 < 50%；
—5级：50% < 为害面积占薯块横切面积比率 < 75%；
—7级：75% < 为害面积占薯块横切面积比率 ≤100%。
4.1.5 病情指数及防治效果计算
依据病情调查情况，按式（1）计算病情指数：
DI = [Σ(i × Ni) / M] × 100%
式中：DI为病情指数；Ni为第i级病害的薯块数；i为为害级别值；M为调查的总薯块数。
依据病情指数结果，按式（2）计算相对病情指数：
相对病情指数 = [(对照病情指数 - 供试品种病情指数) / 对照病情指数] × 100%
相对病情指数精确至0.1，对照品种病情指数为鉴定圃中所有对照的平均病情指数。
4.1.6 鉴定有效性判断：田间鉴定对照品种的平均病情指数大于60，鉴定结果判定有效。

4.2 室内接种鉴定
4.2.1 病原线虫分离及消毒：人工采集病薯块，采用贝曼漏斗法分离线虫。将分离好的线虫用400目筛网过滤，筛网内收集线虫，用灭菌水冲洗3次，放入0.1%青素+0.1%链霉素的消毒液中，4℃环境放置12h，用400目筛网过滤，灭菌水冲洗3次，灭菌水配成200条/ml的线虫悬浮液备用。
4.2.2 鉴定材料准备：选用大小300g~400g薯块作为鉴定用薯块，每个供试品种（系）选3块，洗净晾干后编号备用。选用栗子香为高感对照品种。鉴定薯块随机或顺序排列在80cm×40cm的塑料筐内，每筐放置对照品种薯块2个～3个，每份鉴定材料重复3次，每重复2个薯块。接种前用75%酒精对薯块表面进行消毒处理。
4.2.3 接种材料：接种时需要5mm螺纹打孔器，12cm玻璃培养皿若干套，手术刀、手术镊各1把，1ml移液枪一支及枪头若干，酒精灯1只，电磁搅拌器1台。将打孔器、培养皿、烧杯、手术刀、手术镊灭菌后备用。
4.2.4 接种方法：用打孔器垂直在薯块中部打孔，深度至薯块中下部，用移液枪将配好的线虫悬浮液加入孔中，将打出的薯条切除下方1.5cm，再用剩余薯条封住孔口，用融化的石蜡密封孔口缝隙，放入用75%酒精消毒过的塑料筐内。接种后将筐置于26℃～28℃鉴定室内保湿培养。线虫悬浮液应处于搅拌状态，且每打孔一个薯块后打孔器需用酒精灯消毒。
4.2.5 病情调查：接种后45d调查薯块发病情况。先将薯块沿打孔部位横切，分别量取横切面薯块直径和线虫侵染直径，再将薯块沿中心纵切，量取薯块纵切面的薯块长度和线虫侵染长度。
4.2.6 发病体积比计算
依据病情调查结果，按式（3）计算茎线虫病发病体积比：
发病体积比 = (病斑直径 × 病斑长度) / (薯块直径 × 薯块长度)
按式（4）计算相对比：
相对体积比 = [(对照体积比 - 处理体积比) / 对照体积比] × 100%
品种（系）体积比精确至0.1%。

5 抗性评价标准
5.1 自然诱发鉴定评价标准
根据相对病情指数评价甘薯茎线虫病抗侵入性，将甘薯品种（系）划分为免疫、高抗、中抗、高感4个类型，评定标准如下：
— 免疫：相对病情指数为 100%
— 高抗：70% ≤ 相对病情指数 < 100%
— 中抗：30% ≤ 相对病情指数 < 70%
— 高感：0% ≤ 相对病情指数 < 30%