【地方标准】 畜禽疫病防治与净化技术规范 第7部分：鹅血清HA-HI抗体检测技术规范

ICS 11.220
B41
备案号：58542-2018
辽宁省地方标准
DB21/T 2827.7—2017

畜禽疫病防治与净化技术规范
第7部分：鹅血清HA-HI抗体检测技术规范
The technical specification of prevention and eradication of livestock and poultry diseases Section 7: The detection technology specification of goose serum antibody detection in HA-HI

2017-10-27发布
2017-11-27实施
辽宁省质量技术监督局发布

前言
本标准《畜禽疫病防治与净化技术规范》按照GB/T 1.1—2009规则起草，分为多个部分。本部分为第7部分，由辽宁省动物疫病预防控制中心提出并归口。主要起草单位及人员参与编制。

1 范围
本标准规定了高致病性禽流感鹅血清HA-HI试验技术要求。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。
GB/T 18936—2003 高致病性禽流感诊断技术
GB/T 16650—2008 新城疫诊断技术

3 血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验

3.1 材料准备
3.1.1 微量反应板、96孔板（或三角瓶）等实验器具。
3.1.2 试剂包括PBS缓冲液、鸡红细胞悬液、1%丙醇盐水、胰酶溶液、0.01 mol/L KI04、1 mol/L相关溶液等，具体配制见附录A。
3.1.3 高致病性禽流感（或新城疫）血凝素抗原及标准阳性血清、阴性血清。

3.2 操作方法

3.2.1 血凝（HA）试验
3.2.1.1 在微量反应板1～12孔加入0.025 mL PBS，换吸头。
3.2.1.2 吸取0.025 mL抗原加入第一孔，反复抽吸5～8次混匀。
3.2.1.3 从第一孔吸取0.025 mL加入第二孔，混匀后依次倍比稀释至第十孔，第十孔弃去0.025 mL并更换吸头。
3.2.1.4 每孔再加入0.025 mL PBS。
3.2.1.5 每孔加入0.025 mL体积分数1%鸡红细胞悬液（充分摇匀后加入）。
3.2.1.6 室温（20℃～25℃）静置40 min后观察结果，对照孔红细胞应形成明显纽扣状沉降于孔底。
3.2.1.7 结果判定：倾斜反应板观察红细胞是否呈泪滴状流动，完全血凝的抗原最高稀释倍数为一个血凝单位（HAU）。

3.2.2 4单位（4HAU）抗原回滴试验
3.2.2.1 根据HA试验结果配制4HAU抗原，以血凝终点滴度除以4确定4HAU抗原稀释倍数。例如终点滴度1:256，则4HAU为1:64。
3.2.2.2 在微量反应板1～5孔加入0.025 mL PBS，换吸头。
3.2.2.3 吸取0.025 mL 4HAU抗原加入第一孔，反复抽吸混匀。
3.2.2.4 依次倍比稀释至第四孔，第四孔弃去0.025 mL并换吸头。
3.2.2.5 每孔再加入0.025 mL PBS。
3.2.2.6 每孔加入0.025 mL 1%鸡红细胞悬液。
3.2.2.7 室温静置40 min后观察结果，对照孔红细胞形成明显纽扣状沉降。
3.2.2.8 结果判定：倾斜反应板观察反应结果（原文后续缺失）。

4 无害化处理
（原文缺失）

附录A（规范性附录）试验用溶液的配制