【地方标准】 转基因植物及其产品成分筛查Cry1AbCry1Ac试纸条法

DB12/T650—2016 转基因植物及其产品成分筛查 Cry1Ab/Cry1Ac试纸条法 前言 本标准按照GB/T1.1-2009的规则起草，由天津市农村工作委员会提出，起草单位包括天津市农业质量标准与检测技术研究所、中国农业科学院生物技术研究所和天津市东丽区产品质量监督检验所。主要起草人：兰青阔、李亮、黄风军、刘雪岩、赵新、宛煜嵩、易萌、陈锐、徐石勇。本标准于2016年9月首次发布。 1 范围 本标准规定了转基因植物及其产品成分Cry1Ab/Cry1Ac试纸条法的术语和定义、检测方法、结果判断等内容。适用于转基因大豆MON87701、转基因玉米MON810、Bt11、Bt176、转基因水稻TT51-1、克螺稻、科丰六号、转基因棉花MON531、MON15985等主要植物及其初级加工产品中Cry1Ab/Cry1Ac蛋白的试纸条筛查。 2 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少的： GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 原理 转基因快速检测试纸应用双抗体夹心免疫层析的原理。样本中的抗原在侧向移动过程中与标记的特异性单克隆抗体结合，形成抗原-抗体复合物，继续向前方流动并在NC膜检测线上与另一特异性单克隆抗体结合，形成双抗体夹心复合物，显色。如果样本中转基因作物含量大于5%，控制线（C）和检测线（T）显色，结果为阳性；反之，控制线显色，检测线不显色，结果为阴性。 4 仪器设备及试剂 4.1 仪器设备 匀浆器、天平、移液枪、振荡器、离心管等。 4.2 试剂 提取缓冲液；实验用水为重蒸馏水或符合GB/T6682规定的一级水。 5 方法步骤 5.1 样品的采集和预处理 使用离心管盖夹取或打孔的方式，采集植物新鲜组织样品生长点附近约3cm幼嫩组织100mg-200mg，置于2mL离心管中。作物籽粒可使用铁钳夹碎，取较碎部分置于2mL离心管中。 5.2 样品研磨 加1mL纯水或提取缓冲液于离心管中，使用一次性研磨杆手工研磨或电钻研磨，确保上层液体体积至少占总体积的三分之一。对于混合样品，应称重后使用大容量研磨仪器研磨至100目大小粉末，然后加入水或提取缓冲液。 5.3 涡旋震荡 在振荡器上用力震荡30秒到1分钟，确保样品充分混匀。 5.4 试纸条检测 震荡后，静置1分钟待固体物质沉淀分层，尽快从包装中取出试纸条，按照箭头方向插入离心管，开始计时。 5.5 读取结果 5-10分钟后，底色褪去，将试纸条水平放置于观察者正面读取结果。 5.6 结果判断 测试结果分为阴性、阳性和无效三种： - 阴性：控制线（C）显色，检测线（T）不显色； - 阳性：控制线（C）显色，检测线（T）显色，肉眼可见； - 无效：C线未显色，可能是操作不当或试纸失效。此时应重新测试。