【地方标准】 非洲猪瘟恒温扩增检测技术规范

DB37/T4032—2020
山东省地方标准
非洲猪瘟恒温扩增检测技术规范
Technical specification for isothermal amplification detection of African swine fever
发布日期：2020-07-09
实施日期：2020-08-09

前言
本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：山东省农业科学院畜牧兽医研究所、山东师范大学、中国动物卫生与流行病学中心、山东鼎科检测技术有限公司、潍坊安普未来生物科技有限公司、上海基灵生物科技有限公司、潍坊汉森生物饲料科技有限公司。
本标准主要起草人：孙文博、吴家强、陈蕾、殷斌、陈智、吴晓东、蒋文明、刘宪、郑乾坤、李敏、杜以军、于江、时建立、吴香菊、李俊、丛晓燕、郭立辉。

1 范围
本标准规定了非洲猪病毒（ASFV，英文缩略表见附录D）核酸的重组酶聚合酶扩增（RPA）检测技术的要求。
本标准适用于非洲猪瘟的快速检测、诊断、检疫、监测和流行病学调查。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 原理
核酸恒温扩增技术是依赖解旋酶解开双链DNA，依赖单链DNA结合蛋白与模板单链结合，使模板处于单链状态并保护它的完整性。引物与模板杂交，然后在DNA聚合酶的催化下开始扩增。

4 试剂或材料
除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。
4.1 水：GB/T 6682，一级水。
4.2 1X PBS溶液 (pH 7.4)：配制见附录A.1。
4.3 核酸提取试剂：
a) 蛋白酶K溶液（20mg/ml，配制见附录A.2）；
b) 10%十二烷基硫酸钠（SDS溶液，pH 7.2，配制见附录A.3）；
c) Tris缓冲液；
d) 三氯甲烷；
e) 70%乙醇（配制见附录A.4）。
4.4 重组酶聚合酶恒温扩增试剂盒。
4.5 DEPC水。
4.6 恒温扩增检测的引物：恒温扩增检测引物见附录B.1。
4.7 无水乙醇。
4.8 微量移液器配套的带滤芯吸头。
4.9 离心管：1.5mL。

5 主要仪器设备