【国家标准】 瓜类果斑病菌检疫鉴定方法

中华人民共和国国家标准

GB/T 36822—2018

瓜类果斑病菌检疫鉴定方法

Detection and identification of Acidovorax citrulli

前 言

本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC 271）提出并归口。

本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、深圳市检验检疫科学研究院、南京农业大学、中华人民共和国新疆出入境检验检疫局、中国农业科学院植物保护研究所、国家瓜类工程技术研究中心、江苏省植物保护植物检疫站。

本标准主要起草人：赵文军、冯建军、田茜、田艳丽、张祥林、赵廷昌、胡白石、龚伟荣。

瓜类果斑病菌检疫鉴定方法

1 范围

本标准规定了瓜类果斑病菌的症状观察、分离培养、免疫学及分子生物学检测方法。

本标准适用于可能带有瓜类果斑病菌的西瓜、甜瓜等葫芦科作物植株及种子的检疫鉴定。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

SN/T1465 西瓜细菌性果斑病菌检疫鉴定方法

3 瓜类果斑病菌基本信息

学名：Acidovorax citrulli(Schaad et al.) Schaad et al.,2008

异名：Acidovorax avenae subsp.citrulli(Schaad et al.,1978) Willems et al.,1992
Pseudomonas avenae subsp.citrulli(Schaad et al.,1978) Hu et al.,1991
Pseudomonas pseudoalcaligenes subsp.citrulli Schaad et al.,1978

传播途径：主要通过带菌种子进行远距离传播，田间扩散主要依靠雨水、农事操作和昆虫传播。

瓜类果斑病菌的其他信息参见附录 A。

4 方法原理

根据瓜类果斑病菌的培养性状、生物学特性，寄主范围及危害症状等对病原菌进行分离培养；根据瓜类果斑病菌与抗体之间的特异性反应进行免疫学检测；根据瓜类果斑病菌的特异性 DNA 序列进行分子生物学检测。

5 仪器设备

5.1 PCR 仪：温度范围 4 ℃～99 ℃，控温精度±0.25 ℃。

5.2 实时荧光 PCR 仪：温度范围 4 ℃～99 ℃，控温精度±0.25 ℃。

5.3 电泳仪：输出电压 5 V～600 V，输出电流 2 mA～200 mA。

5.4 杂交炉：温度范围室温至 99.9 ℃，控温精度±0.1 ℃。

5.5 凝胶成像分析仪：光强连续可调 302 nm 紫外透照仪、顶置白光光源、白光转换板、UV 干涉滤光片、机载头像捕捉软件、图像分析软件。

5.6 显微镜：目镜放大倍数 10，物镜放大倍数 100。

5.7 高速冷冻离心机：最大转速 15 000 r/min。

5.8 恒温培养箱：温度范围 5 ℃～65 ℃，波动度±0.5 ℃。

5.9 超净工作台：高效滤膜可除去 99.99%以上的 0.3 μL 粒子。