【国家标准】 饲料中丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯和乙氧喹的测定

前 言

随着我国饲料工业的不断发展，抗氧化剂在饲料中的使用逐渐增加。考虑到抗氧化剂在饲料中用量的多少所带来的利弊，必须建立检测其含量的方法。

我国食品中抗氧化剂BHA、BHT的检测已有国家标准。气相色谱法单项测定BHA、BHT或EQ的方法已有介绍。国外检测抗氧化剂的方法很多，主要是气相色谱和高压液相色谱法。但在我国目前还未见检测饲料中抗氧化剂的方法的报道，更没有制定国家标准。

根据我国复核酸检验不同品种的国外进口抗氧化剂以及我国目前使用抗氧化剂的情况来看，主要是复合型抗氧化剂或复配使用。因此，建立能同时检测多组分复合型抗氧化剂的检测方法势在必行。鉴于此，特制定本标准。

本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出。

本标准由国家饲料质量监督检验中心（北京）负责起草。

本标准主要起草人：谢发明、宋荣、韩华琼、范理。

中华人民共和国国家标准

饲料中丁基羟基茴香醚、二丁基
羟基甲苯和乙氧喹的测定 GB/T 17814—1999

Determination of butyl hydroxy anisole, dibutyl
hydroxy toluene and ethoxyquin in feeds

1 范围

本标准规定了饲料中抗氧化剂丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)和乙氧喹(EQ)测定方法的试剂、仪器、设备、操作方法和注意事项。

本标准适用于配合饲料、鱼粉中抗氧化剂 BHA、BHT、EQ 的测定。

2 引用标准

下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。

GB/T 14699.1—1993 饲料采样方法

3 原理

样品中 BHA、BHT、EQ 用正己烷提取，离心分离后（如遇干扰待测组分的样品，则需取上清液，用柱层析净化处理），取上清液用气相色谱、FID 检测器检测，外标法定量。

4 试剂

除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯，分析用水为蒸馏水（或离子交换水）。

• 4.1 正己烷。
• 4.2 丙酮。
• 4.3 二氯甲烷。
• 4.4 二氯甲烷-丙酮(9+1)混合液。
• 4.5 无水硫酸钠：500℃烘 4 h。
• 4.6 氟罗里硅土：孔径 $177 \sim 149 \text{ }\mu\text{m}$ ($80 \sim 100$目)，$550^\circ\text{C}$烘 $4 \text{ h}$，存于干燥器中。
• 4.7 助滤剂 Celite 545：$20 \sim 45 \text{ }\mu\text{m}$。
• 4.8 医用脱脂棉。
• 4.9 BHA 标准物：纯度 $98\%$。
• 4.10 BHT 标准物：纯度 $98\%$。
• 4.11 EQ 标准物：纯度 $95\%$。

4.12 BHA、BHT、EQ 混合标准溶液：称取上述标准物各 $500.00 \text{ mg}$（视其纯度，换算成 $100\%$再称样），置于 $50 \text{ mL}$棕色容量瓶中，以正己烷溶解并定容。此液为 $10 \text{ mg/mL}$。然后稀释成系列标准液：$1.00 \text{ mg/mL}$、$0.50 \text{ mg/mL}$、$0.10 \text{ mg/mL}$、$0.05 \text{ mg/mL}$、$0.01 \text{ mg/mL}$。

5 仪器、设备

5.1 气相色谱仪：带FID检测器。

5.2 氮气钢瓶：氮气纯度为99.99%。

5.3 氢气发生器：氢气纯度为99.99%。

5.4 空气钢瓶：一般压缩空气。

5.5 离心机：4000 r/min。

5.6 粉碎机：粉碎粒度达40目。

5.7 超声波处理机。

5.8 微型混合器。

5.9 分析天平：感量0.0001g。

5.10 具塞刻度玻璃试管：10mL。

5.11 铝制试管架。

5.12 具活塞层析柱：15 cm×φ1 cm。

5.13 旋转蒸发器：带抽真空装置（或真空泵）。

5.14 浓缩烧瓶：150mL，带5mL刻度尾接管。

6 样品

6.1 按GB/T 14699.1取得样品。

6.2 配合饲料：以四分法缩分样品至约250g，粉碎，过孔径420 μm(40目)筛，混匀，装入密闭广口瓶中，避光低温保存备用。

6.3 鱼粉：如为均匀粉状，可直接取样。

7 测定步骤

7.1 试样制备

7.1.1 提取

按6.1或6.2称取样品2.000g于10mL具塞刻度试管中，加入少许无水硫酸钠，再加5.0mL正己烷，加塞，在微型混合器上混合0.5min，将试管放到试管架上，连同试管架一起放入超声波处理槽内，槽内水位以刚好与试管中试样液位取齐或稍过，超声提取15min。取出，将试管外水液擦去，放入离心机，以4000r/min离心2min，取出试管。上清液为待测溶液。

7.1.2 净化

7.1.2.1 如遇干扰待测组分的样品，须作如下柱层析净化处理：首先按7.1.1提取样品，只是提取液由5.0mL正己烷改为10.0mL正己烷。

7.1.2.2 装柱：层析柱底先放少许脱脂棉，再加少许（约2g）无水硫酸钠，用正己烷调制氟罗里硅土适量（约4g，以装满柱为准），湿法填充于层析柱中，上端先加约5g助滤剂，再加约5g无水硫酸钠，铺平。

7.1.2.3 淋洗：用移液管准确吸取7.1.2.1所得上清液5.0mL上柱。先以30mL正己烷淋洗，再以80mL二氯甲烷-丙酮(4:4)混合液淋洗，速度以大约每分钟2mL为宜。用旋转蒸发器浓缩至约1mL。用正己烷定容至2.0mL，待测。

7.2 测定

分别取系列混合标准溶液(4.12)1μL进样，测得不同浓度BHA、BHT、EQ的峰面积（或峰高），以浓度为横坐标，峰面积（或峰高）为纵坐标，分别绘制工作曲线。同时取样品待测液1μL进样，测得峰面积（或峰高）分别与工作曲线相比较定量，或按式(1)计算求得。

7.3 计算