【GB国家标准】 染发类化妆品中20种禁限用染料成分的测定高效液相色谱法

ICS71.100.70
中华人民共和国国家标准
GB/T35824—2018
染发类化妆品中20种禁限用染料成分的测定
高效液相色谱法
Determination of 20 kinds of prohibited and restricted dyestuff in hair dyes-High performance liquid chromatography2018-02-06发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2018-09-01实施
中华人民共和
国家标准
染发类化妆品中20种禁限用染料成分的测定高效液相色谱法
GB/T35824—2018
中国标准出版社出版发行
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2018年2月第一版
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本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由中国轻工业联合会提出。本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257)归口。GB/T35824—2018
本标准起草单位：北京市产品质量监督检验院、欧莱雅（中国）有限公司、上海市日用化学工业研究所。
本标准主要起草人：卢晓蕊、沈虹、许海东、杜洪森、沈敏。I
rrKAoNiKAca
GB/T35824—2018
本标准的被测物质邻苯二胺、间苯二胺是我国《化妆品安全技术规范》规定的禁用物质禁用物质是指不能作为化妆品生产原料即组分添加到化妆品中的物质。《化妆品安全技术规范》规定：若技术上无法避免禁用物质作为杂质带入化妆品时，应进行安全性风险评估，确保在正常、合理及可预见的使用条件下不得对人体健康产生危害。自前我国尚未规定这些物质的限量值，本标准的制定，仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法。-TKAoNIKAca
1范围
染发类化妆品中20种禁限用染料高效液相色谱法
成分的测定
GB/T35824—2018
本标准规定了染发类化妆品中20种禁限用染料成分的高效液相色谱测定方法。本标准适用于染发类化妆品中20种禁限用染料成分的测定。本标准染料成分的检出限和定量限参见附录A的表A,1。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
试样经溶剂提取后，采用高效液相色谱分离，二极管阵列检测器检测，外标法定量。4试剂与材料
除非另有说明，所用水为GB/T6682中规定的一级水。4.1标准物质：20种禁限用染料成分的中文名称、INCI名称、CAS号、分子式、结构式、相对分子质量参见附录B的表B,1。
4.2甲醇：色谱纯。
乙醇：分析纯。
4.4磷酸二氢钾：分析纯。
4.5磷酸氢二钠：分析纯。
4.6亚硫酸氢钠：分析纯。
4.7亚硫酸氢钠水溶液（1g/L)：称取亚硫酸氢钠（4.6)1.00g（精确至0.01g）于容量瓶中，加水定容至1000mL
4.8乙醇水溶液：[乙醇十亚硫酸氢钠水溶液（4.7)］=1十1(休积比）。4.90.05mol/L磷酸盐缓冲液溶液：准确称取磷酸二氢钾（4.4)6.8045g（精确至0.0001g）和磷酸氢二钠（4.5)17.907g（精确至0.0001g）至容量瓶中加水定容至1000mL。4.10乙醇+0.05mo1/L磷酸盐缓冲液=1十49（体积比）。4.11乙醇+0.05mol/L磷酸盐缓冲液-1+1（体积比）。2乙醇十0.05mo1/L磷酸盐缓冲液=5十95（体积比）。4.12
3标准储备溶液A：分别准确称取各标准物质（p-苯二胺、0-苯二胺、m-苯二胺、P-氨基苯酚、m-氨基苯酚、间苯二酚、4-氨基-2-羟基甲苯、2-甲基-5-羟乙氨基苯酚、5-氨基-6-氯-0甲酚、6-羟基吲哚、4-氯间苯二酚、羟苯并吗琳、邻氨基苯酚、6-氨基间甲酚、1萘酚、1，5二羟基蔡、2，7二羟基萘，共17种）1
KAONiKAca
GB/T35824—2018
50mg（精确至0.1mg）于棕色容量瓶中，用乙醇水溶液（4.8）溶解后定容至10ml.配置成浓度为5mg/mL的标准储备液，于4℃6℃条件下避光保存，保存期为3天。标准储备溶液B：分别准确称取各标准物质（甲苯-2，5-二胺硫酸盐、N，N-双（2-羟乙基）-p-苯二胺硫酸盐，共2种）50mg（精确至0.1mg）于棕色容量瓶中，用亚硫酸氢钠水溶液（4.7）溶解后定容至10mL，配置成浓度为5mg/mL的标准储备液，于4℃～6℃条件下避光保存，保存期为3天标准储备溶液C：准确称取标准物质（4硝基-o-苯二胺，1种）25mg（精确至0.1mg）于棕色容量瓶中，用乙醇水溶液（4.8）溶解后定容至10mL配置成浓度为2.5mg/mL的标准储备液，于4℃～6℃条件下避光保存，保存期为3天。
4.14混合标准中间液：混合标准中间液：准确移取A，B标准储备液各200uL，C标准储备液400μL于10mL容量瓶中，用磷酸盐缓冲液溶液稀释至刻度，配置成各标准物质浓度均为100μg/mL的混合标准溶液，需现用现配
4.15混合标准工作溶液准确移取混合标准中间液（4.14）.用磷酸盐缓冲液溶液稀释定容，配制成，10μg/ml，20μg/mL，40μg/mL，80μg/mL，100μg/mL的系列标准混合溶液，需1μg/mL.5μg/mL
现用现配。
5仪器和设备
5.1高效液相色谱-二极管阵列检测器5.2分析天平感量0.1mg
5.3漩涡混合器。
5.4超声波清洗器。
5.5离心机：转速不小手oe0rmin。试样制备
本标准提供三个前建理方法可根据带要自行选择合适的方法方法一：准确称取1.0g样品（精确至0.001g）于25mL具塞刻度塑料离心管中，首先加人10mlL甲醇（4.2)涡旋并超声10min，使样品分散并提取目标物，用甲醇（4.2)定容至25ml，涡旋混合均匀，超声提取10min，然后于5000r/min离心10min。准确移取上层提取液，mL于5mL刻度塑料试管中，氮吹浓缩至约0.5mL，然后用乙醇+0.05mol/L磷酸盐缓冲液=5+95体积比）（4.12）稀释并定容至5mL，涡旋1min后，上清液经0.1μm滤膜过滤作为测定液，用高效液相色谱测定。方法二：准确称取1.0g样品（精确至0.001g）于25mL具塞刻度塑料离心管中，加人乙醇十0.05mol/L磷酸盐缓冲液=1+49（体积比4.10）的混合溶液定容至25mL，剧烈振荡使样品分散，涡旋1min，超声15min，5000r/min离心10min，取上清液经0.45um滤膜过滤作为测定液，用高效液相色谱测定。
注：适合分离p苯二胺、0-苯二胺、m-苯二胺、P氨基苯酚、m氨基苯酚、间苯二酚、4-氨基2-羟基甲苯、羟苯并吗啉、邻氨基苯酚、6-氨基间甲酚、甲苯-2.5-二胺硫酸盐、N，N-双（2-羟乙基）-p-苯二胺硫酸盐、4-硝基o苯二胺这13种染料。
方法三：准确称取1.0g样品（精确至0.001g）于25mL具塞刻度塑料离心管中，加人乙醇+0.05mol/L磷酸盐缓冲液一1十1（体积比）（4.11)的混合溶液定容至25mL，剧烈振荡使样品分散，涡旋1min，超声15min5000r/min离心10min，取上清液经0.45pμm滤膜过滤作为测定液，用高效液相色谱测定。
注：适合分离2-甲基-5-羟乙氨基苯酚、5-氨基-6-氯-0-甲酚、6-羟基吲哚、4-氯间苯二酚、1-苯酚、1,5二羟基萘、2.7二羟基蔡这7种染料。
TTKAONrKAca
7分析步骤
7.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
色谱柱：PoroshellHPHC18,2.7um，3.0mmX100mm（或相当者）；a)
柱温：30℃：
检测器：二极管阵列检测器；
流动相：A：50mmol/L磷酸盐缓冲液溶液（含3%甲醇）；B：甲醇；d
流速：0.5mL/min；
进样量：2uL：
液相色谱分离条件见表1
表1液相色谱分离条件
时间/mi
流速/（mL/min）
流动相A/%
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流动相B/%
色谱柱的型号，内径和长度及色磨填料粒径可报据色谱每高情况自出选挥，流动相比例，流速等色谱条件随仪器而异，应通过试验选择最佳愿作条件。7.2试样测定
移取系列标准溶液（415），按照色谱条件（7.1)进行高效液相色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，制作标准曲线。力苯二胺、0-苯二胺、m苯二胺、氨基苯酚、甲苯-2，5-二胺硫酸盐、m-氨基苯酚、间苯二酚、4-氨基2-羟基甲苯、2-甲基5-羟乙氨基苯酚、5-氨基-6-氯-0-甲酚、6-羟基吲哚、4-氯间苯二酚、羟苯并吗啉、邻氨基苯酚、N，N-双（2-羟乙基）-P-苯二胺硫酸盐、4-硝基-o-苯二胺、6-氨基间甲酚（17种）根据280nm下的紫外吸收进行定量计算；1-萘酚、1,5二羟基萘、27二羟基萘（3种）根据225nm下的紫外吸收进行定量计算。样品溶液中的被测物的响应值均应在仪器测定的线性范围之内。如果检出的目标染料的色谱峰的保留时间与标准品一致，并且在扣除背景后的样品色谱图中，该物质的紫外吸收光谱图与标准品一致，则可初步认定样品中存在目标染料，用外标法定量。20种禁限用染料的标准物质液相色谱图参见附录C的图C.1。20待测样液中目标染料含量应该标准曲线之内，超出线性范围则应稀释后再进行分析。7.3空白试验
除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。3
TTKAONKAca
GB/T35824—2018
8结果计算
试样中20种目标染料的含量按式（1)计算：CXV
m×1000×1000
式中：
试样中目标染料的含量，%；
试样溶液中目标染料的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；V试样溶液体积，单位为毫升（mL)；m试样质量，单位为克（g）。
计算结果保留至小数点后两位。...
注：对于混合使用的试样，取含有目标染料的试样进行检测，计算结果按实际使用时的比例进行折算。9回收率
在添加浓度100μg/g~1000pg/g浓度范围内，回收率在80%～115%之间，相对标准偏差小于10%。
精密度
在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。-iikAoNiKAca
（资料性附录）
20种禁限用染料成分的检出限和定量限20种禁限用染料成分的检出限和定量限见表A.1。表A.120种禁限用染料成分的检出限和定量限序号
p苯二胺
0苯二胺
m-苯二胺
β氨基苯酚
甲苯-2,5-二胺硫酸盐
m-氨基苯酚
间苯二酚
4-氨基-2-羟基甲苯
化合物名称
2-甲基5-羟乙氨基苯酚
氨基6氯。甲酚
N,N-双(2-羟乙基）-p-苯二胺硫酸盐6-羟基吲哚
4-氯间苯二酚
羟苯并吗咪
邻氨基苯酚
6-氨基间甲酚
4-硝基α苯二胺
1-萘酚
1,5二羟基茶
2,7二羟基茶
检出限
GB/T35824—2018
定量限
KAONMIKAca
GB/T35824—2018
附录B
（资料性附录）
20种禁限用染料成分的中文名称、INCI名称、CAS号、分子式、结构式、相对分子质量20种禁限用染料成分的中文名称、INCI名称、CAS号、分子式、结构式、相对分子质量见表B.1。20种禁限用染料成分的中文名称、INCI名称，CAS号、分子式、结构式、相对分子质量表B.1
中文名称
-苯二胺
0苯二胺
m-苯二胺
P-氨基苯酚
甲苯2，5二
胺硫酸盐
m-氨基苯酚
间苯二酚
4-氨基-2-羟
基甲苯
2甲基-5-羟
乙氨基苯酚
INCI名称
1,4-diaminobenzene
1,2-dianinobenzene
1,3-Diaminobenzene
4-aminophenol
2Methyl
1,4 benzenediamine
sulfate
3-aminophenol
1,3-Dihydroxybenzene
4-Amino-2-hydroxy-
tolucne
2-Methyl-5-N-
hydroxyethylamino
phenol
CAS号
106-50-3
95-54-5
108-45-2
123-30-8www.bzxz.net
615-50-9
591-27-5
108-46-3
2835-95-2
55302-96-0
分子式
C,H2N2O.S
C,H,NO
结构式
相对分于质量
中文名称
5-氨基-6-氯-
o-甲酚
N，N-双（2-
羟乙基)-p-
苯二胺硫
6-羟基吲哚
4-氯间苯二酚
羟苯并吗啉
邻氨基苯酚
6-氨基间甲酚
4-硝基-0-苯
1-萘酚
1,5二羟基茶
2,7二羟基茶
INCI名称
2-Methyl-5-amino
6-chlorophenol
N,N-Bis(2-hydroxy
ethyD)-p- phenylened
iamine sulphate
6-Hydroxyindole
4-Chlororesorcinol
Hydroxybenzomor-
pholine
o-arninophenol
6-Amino-m-cresol
4-Nitro-0-phenylene
diamine
I-Naphthol
1,5-Naphthalenediol
2,7-Dihydroxynapht
halene
表B.1（续）
CAS号
84540-501
54381-16-7
2380-86-1
9588-5
26021-57-8
95-55-6
2835-98-5
99-56-9
90-15-3
83-56-7
582-17-2
分子式
ChaHN,O.s
C1oHgO2
结构式
GB/T35824-2018
相对分子质量
GB/T35824—2018
附录C
（资料性附录）
20种禁限用染料的标准物质液相色谱图20种禁限用染料的标准物质液相色谱图见图C.1。AU
对应峰号：
一p-苯二胺；
2——0-苯二胺：
一m-苯二胺：
4——p-氨基苯酚；
甲苯-2.5-二胺硫酸盐；
m-氨基苯酚：
一间苯二酸；
2=280nm
A=225nm
GB/T35824-2018
4-氨基-2-羟基甲苯；
-2-甲基-5-羟乙氨基苯酚；
-5-氨基-6-氯-0-甲酸；
N.N-双（2-羟乙基）-p-苯二胺硫酸盐；-6-羟基吲哚；
4-氟间苯二酚；
羟苯并吗啉；
20种禁限用染料的标准物质液相色谱图25.00
邻氨基苯酚；
6-氨基间甲酚；
4-硝基-0-苯二胺；
1-萘酚；
1,5二羟基茶；
2.7二羟基萘。
版权专有侵权必究
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